綦江地区健康成人外周血T淋巴细胞亚群参考范围分析

张 静 周臣敏

（重庆市綦江区人民医院输血科，重庆，401420）

外周血中T淋巴细胞亚群的含量变化与各种疾病的发生和发展密切相关，因此其含量的检测可以用于临床中各种疾病的辅助诊断[1]。近几年，临床中主要使用流式细胞术对外周血中的T淋巴细胞亚群进行检测[2]。健康成人T淋巴细胞亚群含量的高低与其所在地区、种族、年龄、性别等息息相关，所以各个地区的实验室或临床科室需要根据自身的实际情况，制订适合本实验室或科室的T淋巴细胞亚群参考范围[3-4]。因此本研究通过采用流式细胞术检测311例健康成年人群的外周血T淋巴细胞亚群，对綦江区健康人群的T淋巴细胞亚群水平的变化趋势进行探讨，然后统计其特点，并展开分析，为綦江地区T淋巴细胞亚群的实验室参考范围进行规范化提供参考，为该地区的免疫缺陷性疾病、病毒性感染等相关诊断、相关性科学研究以及临床效果的评估，提供有力依据，从而保证患者的生命安全。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2022年4月1日—2023年4月10日于綦江地区进行健康体检的311例体检者为研究对象，年龄19～84岁，平均年龄（32.35±5.83）岁。其中男性体检者207例，平均年龄（33.01±5.35）岁，平均身体质量指数（20.65±1.19）kg/m2；女性体检者104例，平均年龄（31.20±5.44）岁，平均身体质量指数（20.25±1.06）kg/m2。

1.2 主要试剂

（1）四色T淋巴细胞亚群检测抗体试剂盒：CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC（生产企业：北京同生时代生物技术有限公司，型号：Z6410002）。

（2）血细胞分析用溶血剂（生产企业：北京同生时代生物技术有限公司，型号：Z6910001M）。

1.3 样本处理

采用含有EDTA抗凝剂的紫色真空管按照标准流程采集健康体检者的空腹静脉血2 mL，保证血液无凝固与溶血。试剂复温至室温，取绝对计数管1支进行编号，向管底加入CD3/CD8/CD45/CD4试剂20 μL，注意枪尖不能碰到管底微球；采用反向移液技术吸取50 μL患者混匀全血样本加入管底，注意血液不沾管壁亦不沾到抗体。盖上管帽，进行涡旋、混匀，在室温下，放置在避光环境中孵育15 min。取一次性塑料试管1支，去离子水将10×原液按1:9（一人份：50 μL:450 μL）稀释成1×，涡旋混匀。向绝对计数管管内加入450 μL 1×血细胞分析用溶血剂，盖上管帽，涡旋混匀。室温避光孵育10 min直至液体变得清亮，涡旋混匀后上机检测。

1.4 流式细胞仪上机检测

按照标准流程的顺序打开流式细胞仪（生产企业：BD公司，型号：FACSCanto Ⅱ），待仪器开机成功连接后，进行常规仪器维护，确保液路通畅，并使用荧光微球标准品上机进行仪器的调试，调整光路，对阴性对照进行检测，调整电压至最佳，以确保仪器的正常使用。设置淋巴细胞门，对淋巴细胞进行圈取，数量为1 000个，并通过软件对结果进行读取，分析CD3+、CD3+/CD4+、CD3+/CD8+亚群的百分比与细胞绝对数。

1.5 统计学分析

采用SPSS 22.0统计学软件处理本研究过程中的数据并进行统计分析，计量数据用（）表示，两组之间比较采用t检验，三组之间比较采用F检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同性别健康体检者外周血T淋巴细胞亚群检测结果

将311例健康体检者按照性别不同进行分组，比较不同性别健康体检者外周血T淋巴细胞亚群检测结果，结果显示男性总淋巴细胞绝对计数、总T淋巴细胞绝对计数、CD8+淋巴细胞百分比、CD8+淋巴细胞绝对计数高于女性，CD4+淋巴细胞百分比低于女性，差异有统计学意义（P＜0.05）；两组总T淋巴细胞百分比、CD4+淋巴细胞绝对计数、CD4+/CD8+比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 不同性别健康体检者外周血T淋巴细胞亚群检测结果 （）

表1 不同性别健康体检者外周血T淋巴细胞亚群检测结果 （）

检测项目男（n=207）女（n=104）合计（n=311）总淋巴细胞绝对计数（×106/L）2 696.39±745.49 2 520.79±713.732 643.35±737.70 t/P1.988/0.048总T淋巴细胞百分比（%）69.00±8.94 69.74±7.57 69.25±8.50 t/P0.734/0.470总T淋巴细胞绝对计数（×106/L）1 860.35±569.57 1 723.43±507.90 1 827.94±550.80 t/P2.071/0.039 CD4淋巴细胞百分比（%） 33.44±7.35 36.27±6.3834.39±7.16 t/P3.344/0.001 CD4淋巴细胞绝对计数（×106/L） 900.58±334.84 922.57±317.51907.93±328.80 t/P0.556/0.579 CD8淋巴细胞百分比（%）30.45±8.51 28.16±7.88 29.52±8.02 t/P2.294/0.023 CD8淋巴细胞绝对计数（×106/L） 823.82±330.81 702.16±275.00 783.13±318.04 t/P3.231/0.001 CD4+/CD8+ 1.21±0.50 1.32±0.46 1.25±0.50 t/P1.879/0.061

2.2 不同年龄健康体检者外周血T淋巴细胞亚群检测结果

将311例健康体检者按照不同年龄进行分组，即青年组（年龄≤30岁）、中年组（年龄31～50岁）、老年组（年龄＞50岁），比较不同年龄健康体检者外周血T淋巴细胞亚群检测结果，结果显示三组各项指标比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 不同年龄健康体检者外周血T淋巴细胞亚群检测结果 （）

表2 不同年龄健康体检者外周血T淋巴细胞亚群检测结果 （）

检测项目青年组（n=175）中年组（n=113）老年组（n=23）总淋巴细胞绝对计数（×106/L）2 585.94±845.052 617.24±823.812 392.90±854.48 F/P0.687/0.504总T淋巴细胞百分比（%）69.63±8.2169.45±8.87 69.41±8.19 F/P0.019/0.981总T淋巴细胞绝对计数（×106/L）1 795.09±577.261 730.38±515.661 774.51±543.55 F/P0.471/0.625 CD4+淋巴细胞百分比（%）34.02±6.61 34.43±7.72 34.93±8.10 F/P0.230/0.795 CD4+淋巴细胞绝对计数（×106/L） 879.77±353.99 887.08±360.36 880.72±398.96 F/P0.014/0.986 CD8+淋巴细胞百分比（%）29.40±7.20 30.49±8.82 29.66±8.96 F/P0.649/0.523 CD8+淋巴细胞绝对计数（×106/L） 787.65±358.53 822.12±367.97 798.14±394.70 F/P0.307/0.736 CD4+/CD8+ 1.25±0.45 1.24±0.49 1.31±0.60 F/P0.206/0.814

2.3 311例健康体检者外周血T淋巴细胞亚群参考范围

采用百分位数法对311例健康体检者外周血T淋巴细胞亚群进行分析，并将各项指标的95%可信区间作为綦江地区健康成人外周血T淋巴细胞亚群的参考范围，见表3。

表3 311例健康体检者外周血T淋巴细胞亚群参考范围

3 讨论

临床中各种检验项目的的检测结果需要根据其参考区间作出相应的合理解释。临床实验室对于各项指标的检测基础就是了解指标的参考区间，也是临床医生在患者健康体检后，对其健康状态进行评估的主要指标[5]。故临床实验室需要给临床医生提供更加准确、更加合适的参考范围，否则发生误诊或者漏诊的概率较高，若情况严重，则会导致患者接受错误的治疗，从而加重病情[6-7]。国内临床实验室一般会通过流式细胞术进行检查，该检查方法对于淋巴细胞亚群项目检查后的数值参考区间存在较大的差异，并且相关试剂以及对应的仪器生产企业较多，而试剂以及仪器生产企业一般会通过调查研究对其参考区间进行确认，同时，调查人群和实验室中的检测人群具有较大的差异[8-10]。受到地域因素、遗传因素、环境因素、生活习惯等相关因素的影响，导致检查时生理状态不同，因此，国际上临床化学联合会建议每个临床实验室都需要建立和当地人群生理特征相符的检验项目的参考区间[11-12]。

目前，綦江地区无健康成人T淋巴细胞亚群参考范围相关研究，因此，研究本地区健康成人T淋巴亚群的正常参考范围是急需解决的问题。本研究结果显示，男性总淋巴细胞绝对计数、总T淋巴细胞绝对计数、CD8+淋巴细胞百分比、CD8+淋巴细胞绝对计数高于女性，CD4+淋巴细胞百分比低于女性，差异有统计学意义（P＜0.05）；两组总T淋巴细胞百分比、CD4+淋巴细胞绝对计数、CD4+/CD8+比较，差异无统计学意义（P＞0.05），并且不同年龄组各项指标比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。说明綦江地区健康成人的性别对T淋巴细胞亚群的部分指标影响较大。实验室结果的准确性、可靠性和适用的参考区间，能够对体检者的健康状况进行评估、并可有助于诊断疾病、监测病情变化以及治疗效果、评估预后效果，意义重大[13]。但因为人们的生理状态的影响因素较多，同时，仪器、试剂、标本制备方法、操作的差异性等，都会对CD4+T淋巴细胞以及CD8+T淋巴细胞亚群的检测结果产生影响，但其是否能够对检测结果产生明显因素，尚未可知，需要采用深入研究进行证实[14-16]。在对各项试验技术进行完善、对其质量进行严格控制的基础上，需要建立不同地区、不同年龄、不同性别及是否吸烟的健康人群的T细胞CD4+亚群、CD8+亚群的参考范围，提升实验室检测的可定量性，进而使其临床价值明显提高[17-19]。采用百分位数法对311例健康体检者外周血T淋巴细胞亚群进行分析，并将各项指标的95%可信区间作为綦江地区健康成人的参考范围，具体如下：总淋巴细胞绝对计数1 520×106/L～3 780×106/L、总T淋巴细胞绝对计数950×106/L～2 840×106/L、总T淋巴细胞百分比49 %～85 %、CD4+淋巴细胞绝对计数545×106/L～1 420×106/L、CD4+淋巴细胞百分比26 %～50 %、CD8+淋巴细胞绝对计数318×106/L～1 255×106/L、CD8+淋巴细胞百分比12 %～42 %、CD4+/CD8+为0.70～2.90。通过本研究建立对应的参考区间，与受检人群的实际情况更加符合，能够为免疫状态的分析以及临床对疾病的诊断和治疗，能够提供更加精准的参考依据。

综上所述，性别会影响健康成人外周血T淋巴细胞亚群的部分指标参考范围，建立适合本地区健康成人外周血T淋巴细胞亚群参考范围对疾病的诊断具有极其重要的意义。