血液乙醇样本保存条件对酒驾认定的价值分析

姚凤娟

周口三川司法鉴定所，河南 周口 466000

根据《车辆驾驶人员血液、呼气酒精含量阈值与检验标准》（GB19522-2010）的规定，酒后驾车和醉驾被明确定义为血液中酒精浓度（BAC）在20mg/100ml 至80mg/100ml 之间和超过80mg/100ml 的状态。目前，中国主要依赖呼气式酒精检测仪和顶空气相色谱法两种主要方法，来检测涉嫌酒后驾驶或醉酒驾驶的人员。一般情况下，交通警察会在现场使用呼气式酒精检测仪来初步检测被怀疑醉酒驾驶的司机的呼气中的乙醇浓度（Breath Alcohol Concentration，BrAC）。对于经测试涉嫌醉酒的人，随后会采集其血液样本并送往实验室，使用顶空气相色谱法进行进一步的血液乙醇浓度检测。

然而，问题在于这两种检测方法的结果往往不一致。部分人的呼气酒精浓度较低，但血液检测结果却较高。而另一些人的呼气酒精浓度较高，但血液检测结果可能低于80mg/100ml。因此，研究呼气值与血液检测值存在的差异对于涉嫌酒后驾驶案件的处理具有重要意义。

一、材料与方法

（一）实验材料

实验使用无水乙醇和叔丁醇，都属于色谱纯。乙醇标准溶液包括不同浓度的乙醇（0.10、0.20、0.50、0.80、1.00、2.00、3.00mg/mL），并在4℃冷藏。从99.5%高纯度的叔丁醇中取适量，溶解于100mL 容瓶中，加入蒸馏水并混匀，得到5.0mg/mL的对照品标准储备液。将该储备液稀释125 倍，制得40.0μg/mL 的内标工作液。

实验使用酒的酒精浓度为45%，从超市购买。采血使用一次性真空采血管，包括不同规格的管。空白血液源自未服药者，实验中使用重蒸馏水作为实验水［1］。

（二）实验仪器

实验所使用的设备和条件如下：首先，使用岛津GC-2010plus 色谱仪，搭配岛津HS-20 顶空仪进行分析。在色谱柱方面，采用两种毛细柱，分别是Rtx-BAC1 和Rtx-BAC2，规格为30×0.32 毛细柱。为了维持恒定的温度，色谱柱设置在40℃。在进样过程中，进样口的温度保持在150℃，柱流量为5mL/min，吹扫流量为3mL/min，而分流比则为6.4。血储容器包括枸橼酸钠1∶9 管、肝素钠管、EDTA-k2 管、氟化钠-草酸钾管、枸橼酸钠1∶4 管。

采用两个FID 火焰离子化检测器检测化合物，检测时温度设定为250℃。在顶空进样条件下，设置恒温炉、样品流路和传输线的温度分别为65℃、105℃、110℃。样品瓶在恒温炉中导入时间为0.8min，导入平衡时间为0.4min，平衡10min，加压时间为0.3min，加压平衡时间为0.3min，进样时间为0.5min［2］。

（三）实验方法

首先，准备两个20ml 容量的顶空样品瓶。接着，在每个瓶子中，分别加入1.00ml 浓度为40.0µg/ml 的叔丁醇内标溶液，以及0.20ml 待测血液样品。随后，密封瓶口并充分混匀，确保内标和待测血液样品充分混合。

其次，将两个密封瓶放入65℃的加热环境中，进行加热处理，持续5min。之后，从每个瓶子中提取1.00ml 的液体上层气体，提取物将用于进行顶空气相色谱分析。

对数据进行统计分析时，采用Duncan 氏新复极差法来比较不同处理之间的显著差异性。这种方法有助于确定各处理组之间是否存在显著性差异。数据分析过程中，借助诸如Excel 和SPSS20.0 等软件工具，进行数据整理、图表绘制和统计分析。这包括使用单因素方差分析和重复测量数据的方差分析，以进一步探究数据之间的差异和相关性［3］。

最后，在统计分析中，设定显著性水平（α），通常取0.05。这一水平用于确定结果是否具有统计显著性。通常情况下，如果观察到的概率小于0.05，即认为结果是显著的，即存在显著性差异。

二、结果与分析

（一）-20℃血液乙醇含量稳定性随时间产生的变化

在-20℃条件下，对三种真空抗凝管在4 ～8℃冰箱冷藏下血液乙醇含量的稳定性进行了详细研究。结果显示，实验初期（0d 和3d）枸橼酸钠1∶9管、肝素管、EDTA-k2 管的血液乙醇含量分别为108.08±0.21Aa、107.57±0.4Aa，107.65±0.29 Aa、107.26±0.25Aa，107.67±0.37Aa、107.02±0.48Aa，三者相近。

随时间推移，35d 内各管血液乙醇含量保持相似，枸橼酸钠1∶9 管为107.06±0.31Aa，肝素管为106.24±0.19Ba，EDTA-k2 管为106.41±0.44 Aa，且无显著差异。然而，42d 时枸橼酸钠1∶9 管和肝素管的含量急剧下降至80.77±0.40Ba 和69.27±0.46Cb，而EDTA-k2 管的含量仍保持相对稳定（106.23±0.52Ac）。49d 时，枸橼酸钠1∶9管和肝素管的含量进一步下降至80.24±1.42Ba和69.29±0.34Cb，而EDTA-k2 管的含量为106.88±0.36Ac。

随时间推移，枸橼酸钠1∶9 管和肝素管的血液乙醇含量显著下降，而EDTA-k2 管性能相对稳定，特别是在长达49d 的储存期。因此，在-20℃冰箱冷藏条件下，确认EDTA-k2 管为最佳血液乙醇储存容器，如表1 所示。法律通常要求准确测量血液乙醇含量，以便判断酒后驾驶或醉驾。因此，选择EDTA-k2 管有助于确保法律程序的公正和司法公正［4］。

表1 三种采血管中血液乙醇含量变化

（二）检测时间对血液样品中乙醇含量的影响

随着时间的推移，血液乙醇含量呈逐渐下降的趋势（见表2）。在最初的3d 内，乙醇含量相对稳定，保持在约106.32±0.78 的水平。然而，在接下来的一周内，即7d 后，乙醇含量开始显著下降，降至约106.02±0.73。这种下降趋势在随后的时间段内继续，分别为14d、21d、30d、60d 和90d，乙醇含量逐渐减少，分别降至105.79±0.91、105.47±0.88、105.22±0.59、104.92±0.63 和104.68±0.71。

表2 不同保存时间下血液乙醇含量的变化（mg/100ml）

然而，在90d 后观察到乙醇含量下降速度有所减缓，且变得更为平稳。这表明在90d 之内，血液乙醇含量保持相对恒定，而超过90d 后，乙醇含量的下降趋势变得显著。因此，根据这些观察结果，可以得出结论，酒驾血液样本的最佳保存期限为90d。

此外，通过Duncan 氏新复极差测验，表明在-20℃冰箱冷藏条件下，血液中乙醇含量的变化幅度最小。这表明在-20℃的低温环境中冷藏血液样本，可以有效减缓乙醇含量的下降速度，延长其有效保存期限［5-6］。

采用回归分析探究乙醇含量与时间的关系，通过三次函数表示样本失效情况。从图1 中可以看出乙醇含量随时间增长逐渐下降，且这种下降速度随保存时间的延长而逐渐增加。换言之，随着时间推移，样本中的乙醇含量逐渐减少，且这一减少趋势随样本保存时间的延长而变得更加显著。当保存时间超过90d 时，测定血液乙醇含量的结果将不再具有统计学意义。

图1 -20℃保存温度下血液乙醇含量的三次函数回归方程

综上所述，这些数据和分析结果明确指出，酒驾血液样本的最佳保存期限为90d，而在-20℃的低温条件下冷藏可以延长样本的稳定性。这对于司法和法医领域的血液乙醇含量测定具有重要的实际意义。

三、结论

首先，在-20℃冰箱冷藏条件下，EDTA-k2 管表现出最好的稳定性，而枸橼酸钠1∶9 管和肝素管的性能在储存时间延长时显著下降。这为司法程序中的血液乙醇含量准确测量提供了重要的指导，特别是在长时间的储存情况下选择EDTA-k2管作为血液乙醇储存容器更为可靠。

其次，乙醇含量在初始的3 天内相对稳定，然后开始逐渐下降。然而，在90d 内，乙醇含量变化幅度有所减缓，维持在相对稳定的水平。因此，我们建议酒驾血液样本的最佳保存期限为90d。此外，在-20℃的低温环境中冷藏可以有效延长样本的稳定性和保存期限。

最后，乙醇含量会随时间的延长而逐渐降低，且在保存时间超过90d 时，测定血液乙醇含量将失去统计学意义。