上皮钙黏素E-cadherin蛋白在食管癌中的表达特点*

孟庆春，李 岩，马 威，徐 飞

(1.鞍山市第四医院 胸外科，辽宁 鞍山 114034； 2.大连医科大学 人体解剖学教研室，辽宁 大连 116044)

食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，死亡率居常见肿瘤死因的第六位，80%～85%的病例发生在发展中国家，以鳞状上皮癌为主。西方国家自20世纪70年代中期以来食管癌腺癌的发病率显著增长，成为增长速度最快的恶性肿瘤之一。中国是世界上食管癌发病率和死亡率最高的国家。食管癌的发病因素与机制尚不明确，癌变过程涉及多种癌基因的激活与抑癌基因的失活，其中介导同质细胞间黏附的钙依赖性跨膜糖蛋白上皮钙黏素基因E-cadherin 的作用值得关注。本研究采取组织微阵列技术和免疫组织化学ABC方法检测E-cadherin在不同病变食管癌组织中的表达情况，并分析其与各病理特征之间的关系，探求E-cadherin表达与食管癌发生的关系。

1 材料和方法

1.1 研究对象

83例食管癌组织均选自鞍山市肿瘤医院1999～2008年未经放化疗的诊断明确的食管癌手术切除标本，术中同时切取38例癌前与9癌旁非癌组织。患者中男性70例，女性13例，年龄31～78岁，平均年龄(59.8±10.8)岁。鳞癌68例，腺癌15例，高分化27例，中分化40例，低分化16例，无淋巴结转移39例，有淋巴结转移44例。

1.2 研究方法

根据肿瘤石蜡标本HE染色观察结果标记取样组织定位，运用组织芯片技术(由大连医科大学辽宁省癌症基因组学重点实验室提供，专利号：02109826.3)，制成的组织微阵列。按照SP试剂盒说明书进行免疫组化染色，抗体为鼠抗人E-cadherin单克隆抗体(Santa Cruz，Msc-8426，1∶100)DAB显色，苏木精复染，中性树胶封片。以已知阳性组织为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定

E-cadherin免疫组织化学结果判定由2位研究人员分别完成而后汇总。染色阳性反应为呈现棕黄色颗粒，定位于细胞浆中及细胞膜表面，其膜E-cadherin为功能性钙黏素，故本实验主要观察膜E-cadherin。判定的标准是：细胞膜上无着色的为阴性(-)；与未加一抗的阴性对照比较，着色略深的为弱阳性(+)，较深的为阳性(++)，明显加深的则为强阳性(+++)，本研究中，膜E-cadherin(-)与(+)视为下调表达。

1.4 统计学方法

实验数据采用SPSS 11.0软件，应用Kruskal-Wallis 和Mamm Whitney的检验方法进行χ2检验，P<0.05为差异有显著性意义。

2 结 果

2.1 膜E-cadherin的表达情况

膜E-cadherin的表达(见表1、图1)在癌旁相对正常组织、癌前病变和食管癌组织中，呈现下调趋势，下调率分别为44.4%、84.2%和94.0%，食管癌组同癌旁正常组和癌前病变组相比较，分别为P=0.000和P=0.006，两者差异有显著性意义；在食管癌不同组织病理分型之间，鳞癌较腺癌下调更为明显，两者差异具有统计学意义(P=0.001)；癌旁正常组和癌前病变组相比差异有显著性意义(P=0.002)。

表1 不同病变食管癌组织中膜E-cadherin的表达情况

1)与癌旁正常组相比P<0.05；2)与癌前病变组相比P<0.05；3)与腺癌相比P<0.05

2.2 膜E-cadherin的表达与食管癌患者各病理指标的关系

膜E-cadherin表达未见明显性别差异 (P=0.125)和年龄差异(P=0.196)；在不同食管癌高、中、低分化的比较中，差异无统计学意义(P=0.352)；但在不同大、中、小病变中E-cadherin表达的下调率分别为75.0%、96.5%和100%，差异具有统计学意义(P=0.011)；食管癌膜E-cadherin下调率在淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组 (P=0.015)；在T3、4组中明显高于T1、2组(P=0.013)；在Ⅲ-Ⅳ期明显高于Ⅰ-Ⅱ期(P=0.027)，见表2。

食管鳞癌癌前病变(A )；鳞癌(B)；食管腺癌癌前病变(C)；贲门腺癌(D)图1 E-cadherin在不同病变食管癌组织中免疫组织化学染色×200

n膜E-cadherin下调例数(%)不变例数(%)P性别0.125 男7067(95.7)3(4.3) 女1311(84.6)2(15.4)年龄0.196 <604039(97.5)1(2.5) ≥604339(90.7)4(9.3)分化程度0.352 高分化2724(88.9)3(11.1) 中分化4039(97.5)1(2.5) 低分化1615(93.7)1(6.3)病变大小0.011 <4cm129(75.0)3(25.0) 4～8cm5755(96.5)2(3.5) ≥81414(100)0(0)淋巴结转移0.015 无3934(87.2)5(12.8) 有4444(100)0(0)浸润深度0.013 未及浆膜(T1、2)2521(84.0)4(16.0) 侵及浆膜(T3、4)5857(98.3)1(1.7)临床分期0.027 I-II4338(88.4)5(11.6) III-IV4040(100)0(0)

3 讨 论

人的E-cadherin基因CDH1定位于16q22.1，编码分子量为120 kD的单链跨膜糖蛋白，主要位于上皮细胞膜，是促进上皮细胞间相互黏附和维持组织结构稳定的重要蛋白[1,2]，在功能上其作为肿瘤侵袭和转移的抑制因子已在许多研究中得到了证实[3,4]。目前公认，细胞黏附功能的丧失是导致肿瘤细胞侵袭和转移的前提条件之一，故E-cadherin被广泛认为是肿瘤进展的关键蛋白。当E-cadherin表达降低，尤其是功能性的膜表面的E-cadherin表达下调或功能障碍时，细胞间的黏附能力就会下降，肿瘤细胞就会彼此松动、分离，进而自原发灶脱落，逐步浸润深层、并向局部淋巴结及远处转移[5]。因此，E-cadherin表达下降与肿瘤的侵袭和进展密切相关。

本研究结果与以往的文献报道相一致，即在大多数食管癌，特别是浸润癌中呈现膜型E-cadherin表达减少甚至消失。因此，E-cadherin蛋白表达作为食管癌发生、发展、演进过程中重要的分子事件，其表达在癌旁相对正常食管黏膜组织、癌前病变、食管癌组织中呈现逐渐下调的特点证实膜上E-cadherin的含量有可能是细胞去分化程度和肿瘤转移潜能的重要生物学标志，即它减少的程度反映出细胞去分化的严重性和肿瘤细胞播散的可能性。

本文结果中E-cadherin基因表达未见年龄与性别的差异，但与分化程度和病变大小有关，分化越低、病变越大则E-cadherin下调表达越显著。而E-cadherin下调率在淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组；在T3、4组中明显高于T1、2 组；在Ⅰ-Ⅱ期食管癌中明显高于Ⅰ-Ⅱ期的结果亦证实该基因的表达与食管癌进展相关，可以作为判断食管癌病变程度以及预测肿瘤浸润趋势的潜在的分子指标，具有重要的肿瘤诊断学意义。

E-cadherin在蛋白水平的下调与基因突变、转录抑制以及表观遗传学启动子区高甲基化相关[6-8]。甲基化水平改变可能与饮食特点关系密切。本研究中，食管癌患者E-cadherin下调十分明显，高达90%以上，这是否与火锅、烧烤、腌制食品过度摄入所导致的基因启动子区高甲基化有关，值得进一步验证、核实。

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