原发干燥综合征伴发间质性肺疾病患者淋巴细胞CCR7的表达及临床意义

吴春玲，刘海娜，郭韵，杨娉婷，赵丽娟

（1.中国医科大学 附属第一医院风湿免疫科，沈阳 110001；2.中国医科大学 附属盛京医院风湿免疫科，沈阳 110004）

原发干燥综合征伴发间质性肺疾病患者淋巴细胞CCR7的表达及临床意义

吴春玲1，刘海娜1，郭韵2，杨娉婷1，赵丽娟1

（1.中国医科大学 附属第一医院风湿免疫科，沈阳 110001；2.中国医科大学 附属盛京医院风湿免疫科，沈阳 110004）

目的 探讨CC族趋化因子受体7（CCR7）在原发干燥综合征（pSS）伴发间质性肺疾病（ILD）发病机制中的作用及其临床意义。方法 选择31例原发干燥综合征患者，其中无脏器受累者18名，伴有ILD者13名。正常对照组20名，为健康体检者。应用流式细胞检测术检测外周血淋巴细胞表面CCR7的表达。结果 原发干燥综合征组CD4＋T细胞和CD8＋T细胞上CCR7的表达均高于正常对照组（P<0.01），且原发干燥综合征组CD4＋T细胞上CCR7的表达高于CD8＋T细胞（P<0.05）；其中pSS伴间质性肺疾病组CCR7在CD4＋T细胞上的表达高于pSS无脏器受累组（P<0.05），也高于同组的CD8＋T细胞（P<0.01）；而CCR7在两组CD8＋T细胞上的表达无统计学差异 （P>0.05）。结论 原发干燥综合征患者外周血淋巴细胞上CCR7的表达明显增加，且此种增加在肺部受累的pSS患者表现更为明显。

干燥综合征；间质性肺疾病；趋化因子受体；CCR7

1 材料与方法

1.1 研究对象

选择31例2007年6月至2008年6月在我院风湿免疫科就诊的pSS患者，诊断均符合2002年国际干燥综合征（Sjgren′ssyndrome，SS）的分类标准［3］。其中无脏器受累者18名，包括男性1例，女性17例，年龄 23～71岁，平均（38.35±12.87）岁；伴有 ILD者13名，包括男性2例，女性11例，年龄25～75岁，平均（35.15±10.46）岁。采血前均未使用糖皮质激素和/或免疫抑制剂治疗。正常对照组20名，为健康体检者，男性2名，女性18名，年龄20～68岁，平均（31.58±8.71）岁。与病例组在年龄、性别构成等方面无统计学差异。

1.2 主要试剂及仪器

FITC标记的鼠抗人CD4抗体、PE-cy5标记的鼠抗人CD8抗体及 FITC、PE、PE－cy5分别标记的小鼠IgG1均购自深圳晶美生物科技公司；PE标记的鼠抗人CCR7抗体购自R&DSystems，Inc；流式细胞仪为美国BD公司产品，由我院中心实验室提供。

1.3 实验方法

1.3.1 流式细胞仪检测外周血淋巴细胞CCR7的表达

分别抽取pSS患者、正常对照者晨起空腹外周血，取100μl抗凝血加入流式管底部，再向其中加入上述3种已标记的鼠抗人抗体各5μl，4℃避光孵育40min。再加入2ml红细胞裂解液，混匀，避光放置10min。离心弃上清，用流式细胞仪检测CCR7的表达。

1.3.2 统计学分析

2 结果

2.1 pSS与正常对照组CCR7表达的差异（见表1）

pSS组CD4＋T细胞和CD8＋T细胞上CCR7的表达均高于正常对照组（t=14.23，P<0.01；t=16.44，P<0.01），且pSS组CD4＋T细胞上CCR7的表达高于CD8＋T细胞（t=2.07，P<0.05）。

2.2 pSS伴ILD组与pSS无脏器受累组CCR7表达的差异（见表1）

pSS伴ILD组CCR7在CD4＋T细胞上的表达高于 pSS无脏器受累组（t=3.13，P<0.05），但在 CD8＋T细胞上的表达与pSS无脏器受累组无统计学差异（t=0.71，P>0.05）。此外，pSS伴 ILD组 CD4＋T细胞表面CCR7的表达高于同组的CD8＋T细胞 （t=5.28，P<0.01），而 pSS无脏器受累组 CD4＋T细胞表面CCR7的表达与同组的CD8+T细胞无统计学差异（t=0.58，P>0.05）。

表1 T淋巴细胞亚群上CCR7的表达（%）Tab.1 Expressions of CCR7on different Tlymphocyte subgroups（%）

3 讨论

SS的发病依赖很多不同的机制，其中淋巴细胞的功能紊乱及对淋巴细胞的诱导募集是其病变的基础。而CCR7是CC类趋化因子受体，高度表达于不同的淋巴组织、T细胞、B细胞、活化的NK细胞及树突细胞表面，在配体作用下诱导淋巴细胞向特定组织移行，参与免疫反应［3］。

SS的细胞免疫异常多出现在受累的腺体局部组织。北京协和医院对15例pSS和4例正常人的唇腺病理进行分析，发现SS患者淋巴细胞浸润以CD4＋T细胞占多数，CD4＋/CD8＋的比例明显高于正常对照组，并与疾病的严重程度有关。由于CD4＋T细胞增多，导致B细胞功能亢进，产生大量自身抗体。大量淋巴细胞浸润使组织结构破坏，腺体功能丧失［4］。我们通过研究发现，在pSS患者外周血淋巴细胞中，CD4＋T细胞和 CD8＋T细胞表面均可检测到CCR7的表达，与正常对照组相比较明显增多，表明CCR7可能参与了SS的发病过程。而且本实验还发现在 pSS患者，CCR7＋CD4＋T细胞数明显高于 CCR7＋CD8＋T细胞，提示pSS患者CCR7介导CD4＋T细胞的趋化作用要强于CD8＋T细胞。这也表明，pSS外分泌腺大量CD4＋T细胞浸润的病理改变可能与pSS患者T细胞上CCR7的异常表达有关，间接证明CCR7在T细胞向病变组织异常聚集的过程中发挥了重要作用。

SS尤其是pSS患者发生ILD很常见，发生率可达8%～38%，SS伴发ILD常见的组织病理学表现主要以淋巴细胞增殖性病变为主，包括淋巴细胞性间质性肺炎（LIP）、淋巴细胞支气管炎或支气管扩张、假性淋巴瘤或淋巴瘤，以聚集的淋巴细胞间质浸润为特征。其支气管肺泡灌洗液（BALF）中，淋巴细胞增高明显，在pSS伴ILD患者的BALF中，以CD4＋T细胞增加更为显著［6］。而我们在实验中发现在伴有间质性肺疾病的pSS患者，CD4＋T细胞上CCR7的表达高于无脏器受累的pSS患者，也高于同组的CD8＋T细胞，而CD8＋T细胞CCR7的表达在2组患者之间无统计学差异。这可能部分解释了pSS伴ILD患者BALF中CD4＋T细胞显著增加的原因。

综上，CCR7在pSS外周血淋巴细胞上表达异常增加，尤其在CD4＋T细胞表达CCR7更多，且此种增加在肺部受累的pSS患者表现更为明显。因此无论是通过基因治疗的方法或是直接应用CCR7的拮抗剂来阻断其与配体的相互作用，抑制淋巴细胞的游走，均有可能为pSS的免疫治疗，特别是预防和减缓肺受累的进程提供新的思路。

［1］张奉春.风湿免疫病学［M］.北京：人民卫生出版社，2009：34-43.

［2］Szekanecz Z，Szücs G，Szántó S，et al.Chemokines in rheumatic diseases［J］.Curr drug targets，2006，7（1）：91-102.

［4］陈顺乐，邹和建.风湿内科学［M］.北京：人民卫生出版社，2009：83-89.

［5］侯显明，于润江.间质性肺病学［M］.北京：人民卫生出版社，2003：274-275.

（编辑 孙宪民，英文编辑 赵传胜）

The Clinical Significance of CCR7Expression on Lymphocyte in the Patients with Interstitial Lung Diseaseassociated with Primary Sjgren′s Syndrome

WUChun-ling1，LIUHai-na1，GUOYun2，YANGPing-ting1，ZHAOLi-juan1
（1.Department of Rheumatology and Immunology，The First Affiliated Hospital，China Medical University，Shenyang 110001，China；2.Department of Rheumatology and Immunology，Shengjing Hospital，China Medical University，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo explore the role and the clinical significance of CCR7in the pathogenesis of interstitial lung disease-associated with primary Sjgren′s syndrome（pSS）.Methods31patients with primary Sjgren′s syndrome（pSS）were selected.They consisted of 18patients without any viscera damage and 13patients with interstitial lung disease（ILD）.20healthy persons were included as normal controls.The expression of CCR7on the peripheral blood lymphocyte was detected by flow cytometry（FCM）.ResultsThe level of CCR7on CD4+Tand CD8+Tcells from pSSwas higher than that from normal controls（P<0.01）.Furthermore，CD4+Tcells from pSSexpressed CCR7more than CD8+Tcells （P<0.05）.The level of CCR7on CD4+Tcells from pSSwith ILDgroup was higher than that from pSSwithout any viscera damage group.It was also higher than that on CD8+Tcells from the same group （P<0.01）.However，there was no statistic difference between the expressions of CCR7on CD8+Tcells from the two pSSgroups.ConclusionThe expression of CCR7on pSSTlymphocytes increased prominently，especially on CD4+Tcells from pSSwith ILDgroup.

Sjgren′s syndrome；interstitial lung disease；chemoceptor；CCR7

R593.22

A

0258-4646（2010）12-1030-03

国家自然科学基金资助项目（30801204）

吴春玲（1977-），女，主治医师，硕士.E-mail：wuchling@hotmail.com

2010-05-07