检验结核分枝杆菌及结果分析

徐懿

(益阳医学高等专科学校附属医院 湖南 益阳 413000）

检出痰液中结核分枝杆菌一直是临床诊断肺结核或鉴别肺结核与其他肺病的主要依据，涂片法简单易行，但阳性率较低，罗氏培养法虽为金标准，但因周期较长，均难以满足临床需要。近年来，作为直接检测分枝杆菌种系的鉴定及药敏的许多分子生物学方法得到长足发展，这些方法能将诊断的时间从几周缩短到几天，其中实时荧光定量PCR(FQ-PCR)因其技术成熟，具有较高的敏感性和特异性，已逐步应用于临床，我们用以上3种方法同时检测100例临床痰液标本结核杆菌，对结果进行分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

取自本院呼吸内科的肺结核病人100例，均选自门诊和住院病人，经X线检查或病理学检查确诊为结核病(均系初治病人)。非结核肺部病例40例，其中肺炎23例，支气管扩张12例，肺癌5例。

1.2 试剂

FQ-PCR试验盒由中山医科大学达安基因公司生产，罗氏培养基由浙江省结核病防治所提供，萋-纳氏抗酸染色法，均按《全国结核病诊断细菌学检验规程》[1]试剂配制、操作及结果报告。

1.3 方法

痰液直接涂片抗酸染色镜检；结核杆菌培养采用罗氏培养法，痰液碱前处理后，于30min内接种完毕；荧光定量PCR痰液标本处理：痰液根据不同性状，加入4倍体积40g/LNaOH液化30min，取1mL液化好的痰液离心，再用生理盐水洗涤沉淀2次，离心取沉淀加入50mLDNA提取液置水浴100℃10min裂解，取2mL做PCR模板，93℃2min预变性，93℃30s，55℃min，40个循环，结果判定，>1.0×l03拷贝／mL为阳性。

2 结果

(1)100例标本结核杆菌检测结果，见表1。(2)40例非肺结核病患者痰液标本检测结果，TB-DNA均为阴性。(3)抗酸染色、罗氏培养和FQ-PCR标本结果的相关性，见表2。

表1 100例标本检测结果

表2 3种方法检测结果相关性

3 讨论

目前，结核病的细菌学实验诊断，主要依靠痰液涂片镜检抗酸杆菌。由于该方法阳性率不高，发展中国家此法的敏感性仅为20%～40%，发达国家达40%～60%，只能发现抗酸杆菌菌体。很难鉴别是死菌还是活菌[2]。罗氏培养，耗时是活菌才能生长，整个过程长达8～12周，已不适合现代短程化疗的需要，但仍可继续做药物敏感性试验、菌种鉴定和毒力试验[3]。本文检测结果证实，在确诊的MTB患者中FQ-PCR的阳性检出率可达58%，明显高于培养法与涂片法，这与AL ZahraniK等[4]报道相反，其原因在于培养阳性率不高。由于FQ-PCR采用闭管操作，本文检测的40例非MTB病人无一例为阳性，与LInuma等[5]报告的结果较为一致。因此，无论敏感性还是特异性，FQ-PCR法较涂片和培养法都有优势，应当列入MTB的常规检验项目。

结核杆菌培养仍是目前诊断MTB的金标准，尤其是药敏实验结果指导临床用药及耐药性监测等方面具有重要作用，涂片法和FQ-PCR都无法替代，但其耗时太长有待改进。我们建议将上述3种方法同时使用，涂片和FQ-PCR法可为临床及时提供诊断依据，培养及药敏结果可指导临床用药，FQ-PCR定量监测TB-DNA可用于判断疗效。

[1]中国防痨协会.结核病诊断细菌学检验规程[J].中国防痨杂志,2006.

[2]金法祥.结核分枝杆菌实验室诊断3种方法的初步评价[J].现代中西医结合杂志，2003，12：634～635.

[3]闰国蕊,腊胜明,杨建华,等.结核病五项实验检测方法的对比分析[J].中国防痨杂志,21：165～l66.

[4]Al Zahrani K,Al jahdali H,Poirier L,el al.Aceuracy utili～ofc0lnrnercilyavml～emcalionand ogict florthedi isofminit pllltT my tubel js[J].Am J Rcspir Cift Care Med,2000,l63:l323～1329.

[5]linuma Y,Ichiym～S,Yamori S,et a1.Dia0sticvueoftl1eAm—plio0rPcRas8ayf0_riniti～ di～ ismdassess～ ntof～ lncntre ef0rlJu1rrl('nnry1)ercu s[J].Mic～id hm～und,42:281～287.