宫颈癌患者人乳头瘤病毒基因分型的研究

陈仲波,羊正炎,俞 华,朱笕青,牟翰舟,吕卫国

宫颈癌是一种常见的严重危害妇女健康的恶性肿瘤,人乳头瘤病毒 (HPV)感染是引起宫颈癌及其癌前病变的主要原因[1],但 HPV基因型与宫颈癌的关系尚待进一步探讨。由于受分型技术的限制,我国宫颈癌 HPV基因型的流行病学资料较为有限。本研究应用可检测 21种 HPV基因型的导流杂交基因芯片技术对 1 169例宫颈癌患者进行 HPV检测和分型,为宫颈癌的预防、高危人群筛查和特异性疫苗的研制提供一定的实验依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择 2007—2008年在浙江省肿瘤医院就诊并经病理学确诊的 1 169例浸润性宫颈癌患者为研究对象。年龄22～86岁,平均 48.2岁。按 1995年为际妇女科联合会 (FIGO)标准[2]分期:I期,413例;Ⅱ期,526例;Ⅲ期,224例;Ⅳ期,6例。组织学类型按 2003年 WHO分级标准分型[3]:鳞癌 1 092例,腺癌 41例,腺鳞癌 25例,其他 11例(包括:透明细胞癌 9例,小细胞癌 2例)。

1.2 方法

1.2.1 标本采集及保存 使用专用的 HPV采样刷采集非月经期宫颈癌患者的宫颈脱落细胞标本,采样前 3 d内无阴道用药史,采样前 1 d禁止性生活。以专用细胞保存液保存标本。采集的标本置 4℃冰箱保存,2周内检测。

1.2.2 HPV分型检测 用凯普导流杂交技术及其配套试剂(潮州凯普生物化学有限公司提供),对21种常见的 HPV基因型进行分型检测,包括 13种高危型 HPV(16、18、31、33、35、39、45、 51、 52、 56、 58、 59和 68),5种低危型 HPV(6、11、42、43和 44)和 3种中国人常见的 HPV基因型(53、66和 CP8304)。检测过程包括:样本 DNA提取;PCR扩增;导流杂交;酶标显色;结果判断,根据芯片上 HPV基因型分布相应位点判断为何种基因型。

1.3 统计学方法 采用 SPSS 12.0软件进行统计处理,HPV基因型感染率比较采用 χ2检验,以 P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈癌患者 HPV感染率及 HPV各致病基因型的感染率 1 169例宫颈癌患者检出 1 072例 HPV,HPV感染率为91.70%。HPV感染者各基因型的感染率:感染 HPV16为62.10%(726/1 169);感染 HPV18为 10.95%(128/1 169);感染 HPV58为 10.52%(123/1 169);随后的 HPV基因型从高到低依次为 HPV52为 7.96%(93/1 169);HPV33为3.93%(46/1 169);HPV31为3.76%(44/1 169);HPV68为1.88%(22/1 169);HPV53为1.88%(22/1 169);HPV45为 1.20%(14/1 169);HPVCP8304为 1.20%(14/1 169);HPV66为 0.77%(9/1 169);HPV59为 0.68%(8/1 169);HPV6为 0.60%(7/1 169);HPV39为 0.43%(5/1 169);HPV11为 0.43%(5/1 169);HPV56为 0.26%(3/1 169);HPV42为 0.26%(3/1 169);HPV35为 0.17%(2/1 169)和 HPV44为 0.17%(2/1 169);未检测到 HPV35及HPV51。

2.2 HPV基因型单一感染、多重感染情况 1 169例宫颈癌患者检出 902例单一 HPV基因型感染,HPV单一基因型感染率为 77.16%;170例患者 HPV基因型混合感染,HPV基因型混合感染率为 14.54%;其中二重感染 143例,二重感染率为12.23%;三重感染 15例,三重感染率为 1.28%;四重感染 9例,四重感染率为 0.77%;五重感染 3例,五重感染率为0.26%(见表 1)。

2.3 宫颈癌组织类型与 HPV基因型的关系 宫颈癌患者中以宫颈鳞癌为主,故将宫颈癌患者分为鳞癌和非鳞癌两组。宫颈非鳞癌组患者 HPV18基因型感染率为 12.99%,鳞癌组HPV18基因型感染率为 6.87%,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05,见表 2)。

3 讨论

目前发现的 HPV基因型达 200多型,其中约 50型与生殖道黏膜病变有关,对宫颈癌 HPV基因型的研究发现不同地区之间存在差异。2003年 Clifford等[4]对 85项涉及全球范围的10 058例宫颈癌的研究进行 Meta分析,发现在全世界范围内HPVl6是最主要的基因型,其次是 HPVl8。除这两个基因型外,其他 HPV基因型的分布存在明显的地区差异,非洲较为流行的是 HPV45和 33,欧洲较为流行的是 HPV45,南、北美洲是 HPV31、33和 45,在亚洲较为流行的是 HPV58和 52。我国宫颈癌 HPV基因型的流行病学资料报道较少,近年来仅有湖北[1]、四川[5]、台湾[6]、广东[7]等为数不多的地区有报道,且样本量较小,浙江省尚无大样本的研究报道。本研究显示宫颈癌患者 HPV16基因型感染率为 62.10%,居首位;HPV18基因型感染率为 10.52%,居第二位,但低于 Prétet等[8]报道的 19%;HPV58和 HPV52的感染率为 10.52%和 7.96%,居第三、四位,本地区宫颈癌患者常见 HPV基因型的分布符合亚洲地区研究结果。

表 1 1 169例宫颈癌患者 HPV基因型感染情况Table 1 Prevalence of HPV genotypes in 1 169 cases of cervical cancer

表 2 宫颈鳞癌和非鳞癌患者 HPV基因型的感染率比较 [n(%)]Table 2 Comparison of cervical squamous cell cancer and nonsquamous cell cancer in HPV genotype infection rate

宫颈癌患者的 HPV基因型多重感染并不少见,但各家报道的检出率并不一致,除与研究的人群及地域有关外,主要还与检测方法有关[9]。本研究发现宫颈癌脱落细胞中 HPV基因型多重感染率为 14.54%,与 Cai等[1]报道的 11%相近。有学者报道 HPV16是多重感染中最常见的基因型,HPV16、18、33常有多重感染,故认为 HPV的多重感染与 HPV基因型有关[10]。本研究显示,在 170例 HPV多重感染中发现绝大部分含 HPV16、18,表明 HPV16、18是多重感染中最常见的基因型。

宫颈癌的恶性程度与 HPV感染类型有关,感染 HPV18基因型的宫颈癌患者的病情进展快,转移早,预后差[11-12]。本研究发现非鳞癌组患者 HPV18基因型感染率高于鳞癌组,HPV16基因型感染率与鳞癌组患者无差异。有报道显示,HPV16基因型多见于宫颈鳞癌,而 HPV18基因型多见于宫颈腺癌[13]。宫颈腺癌中以 HPV18基因型居多,这可能是其生物学行为如趋于年轻化、内生型生长、易于向宫颈组织深间质浸润、侵犯血管淋巴间隙、较早发生转移、对治疗的反应差及预后比宫颈鳞癌差的病原学原因,HPV18基因型在宫颈腺癌与宫颈鳞癌中表达的不同可能有助于解释两者临床病理特征的不同。

由于 HPV与宫颈癌之间有较为明确的病因学联系,使研究者将目光投向针对病因的预防性措施——HPV疫苗,希望其可用于加强 “初级预防 -筛查 -治疗”的癌症控制规划,以减少宫颈癌发生对社会和家庭造成的负担。美国食品药品监督局 (FDA)批准上市的默克 (Merck)公司四价疫苗 (Gardasil)及正接受 FDA评估的葛兰素史克 (Glaxo Smith Kline,GSK)公司二价疫苗 (Cervarix),但疫苗的整体预防效果取决于 HPV的基础感染型别[14]。因此,宫颈癌 HPV基因型分布的研究,有助于确定宫颈癌发生的高危因素、高危人群,为政府制定预防政策提供依据,也为本地区 HPV疫苗的推广、研发提供理论依据。

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