酶解泥鳅蛋白对酒精致肝损伤的保护作用

代伟长,指导:胡耀辉

(吉林农业大学,吉林长春130118)

酒精对于人类肝脏的损害已得到了证实[2]。泥鳅鱼属鲤形目、鳅科、花鳅亚科、泥鳅属,有较高的食用和药用价值。祖国医学认为泥鳅有保肝护肝等功效[1],有“水中人参”之称。对于泥鳅的这些功效并没有完整的研究数据报道,笔者采用胰蛋白酶和木瓜蛋白酶双酶法酶解制取泥鳅鱼蛋白,观察对于酒精致肝损伤的保护作用的系统研究,为泥鳅的药用研究与产品开发提供了比较详实的数据。

1 实验材料与方法

1.1 试验动物 泥鳅鱼(长春光复路市场购得),SPF级昆明种小鼠,体重(18～22)g,共120只,由吉林大学药学院实验动物中心提供。

1.2 试剂和仪器 无水乙醇分析纯;试剂盒(南京建成生物工程研究所);组织匀浆机桑翌技术(北京)有限公司;数显恒温水浴锅:北京意成东方科技有限公司;UV-2600型紫外分光光度计:尤尼柯(上海)有限公司;FD-1D-50型真空冷冻干燥机:北京博医康实验仪器有限公司;DD-5M离心机:湖南凯达科学仪器有限公司。

1.3 酶解泥鳅蛋白的制备 将活泥鳅用清水静养24 h,去头和内脏,用绞肉机绞成鱼糜。取鱼糜置于反应瓶中,调整底物浓度1.00%,按鱼糜中蛋白质含量的1.50%加入1∶4混合的胰蛋白酶—木瓜蛋白酶,在65℃水浴反应6 h,然后沸水浴加热15min,使酶失活,经4500 r/min离心10 min得上清液,真空冷冻干燥得淡黄色酶解泥鳅蛋白粉末,密封冷冻。人体推荐日摄入量为0.02 g/kg。

1.4 试验方法[2]实验设3个剂量组、1个空白对照组和1个模型对照组,以人体推荐量(0.02 g/kg)的10倍为其中的1个剂量组,另设中剂量和高剂量组。用无水乙醇(分析纯)造成肝损伤模型,无水乙醇浓度为50%(以蒸馏水稀释),小鼠灌胃量12～14 mL/kg BW(折合乙醇的剂量为6000～7000 mg/kg BW)。受试样品给予30 d,经口灌胃。动物每周称重2次,按体重调整受试样品剂量。给予受试样品结束时将模型对照组及各样品组1次灌胃50%乙醇12 mL/kg BW,空白对照组给予蒸馏水。禁食16 h处死动物,进行各项指标的检测及病理组织学检查。

1.5 检测指标 肝组织中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、甘油三酯(TG),按照试剂盒的详细说明进行检测。

1.6 数据处理和结果判定 采用方差分析,但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验,方差齐,计算F值,F值≤0.05,结论:各组均数间差异无显著性;F值≥0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间数的两两比较方法进行统计;对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换,待满足正态方差齐要求后,用转换后的数据进行统计;若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的,改秩和检验进行统计。

结果判定:满足任一条件,可判定受试样品具有对酒精性肝损伤有辅助保护作用;肝脏丙二醛MDA、还原型谷胱甘肽(GSH)和甘油三酯(TG)3项检测指标结果阳性。肝脏丙二醛MDA、还原型谷胱甘肽(GSH)和甘油三酯(TG)3项指标中任两项指标阳性和病理组织学检查结果阳性。

2 结果

各组肝脏甘油三酯、谷胱甘肽、丙二醛检测结果,见表1。

表1 各组肝脏甘油三酯、谷胱甘肽、丙二醛检测结果

3 结论

肝脏甘油三酯(TG)、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)3个指标的检测结果均呈阳性,故判定酶解泥鳅鱼蛋白对酒精致肝损伤有保护作用。

[1]李时珍.本草纲目[M].北京:中国三峡出版社,2009:305-307.

[2]大西久仁房.酒精与肝病[J].日本医学介绍,1997,18(1):6-7.

[3]黄雨三.保健食品检验与评价技术规范实施手册[M].北京:清华同方电子出版社,2003:799-804.