五味子制剂提取工艺研究

程丽梅,于秀华,付 春,张永和

(1.长春市人民医院,吉林长春130061;2.长春中医药大学附属医院,吉林长春130021)

五味子是民间常用的中药,具收敛固涩,益气生津,补肾宁心功效,药用价值较高。其主要化学成分为木脂素、挥发油、苯甲酸等。本文以五味子醇中含量为指标,采用正交试验设计法,研究五味子软胶囊提取的最佳工艺。

1 仪器与材料

1.1 药材 五味子:经长春中医药大学附属医院新药中心鉴定符合《中国药典》2005年版一部[2]的规定,为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实。

1.2 仪器 LC-20AT型高效液相色谱仪(日本岛津),SPD-10Avp紫外检测器,UV-3000型紫外分光光度仪。

1.3 试药 五味子醇甲对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号:857-200102及110857-200406,供含量测定用),甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 原料的筛选 五味子全果50 g,用水冷浸,挫去果肉,分出种子,干燥,分别称定种子和果肉重量,另取五味子全果50 g,将上述3种药材分别捣碎,过20目筛,加3倍体积的乙醇加热回流3次,每次2 h,过滤,提取液适当浓缩,定容于50 mL量瓶中,加乙醇至刻度,摇匀,精密吸取各提取液1～25 mL量瓶中,加乙醇至刻度,摇匀,即得。采用高效液相色谱法测定各提取物中五味子醇甲的含量。

2.1.1 对照品溶液的制备 取五味子醇甲对照品约10 mg,精密称定为 13.16 mg,置10 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1 mL,置10 mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得(每1 mL含五味子醇甲0.1316 mg)。

2.1.2 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(65∶35)为流动相;检测波长为250 nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于5000。

2.1.3 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液2,5,10,15,20,25 μ L按上述色谱条件分别注入液相色谱仪,测定峰面积,则回归方程为:Y=2008655.21X-21546.49,γ=0.9999,线性范围:0.2632～ 3.290 μ g。

2.1.4 供试品溶液的制备 取上述3种粉末各约0.25 g,分别精密称定,置20 mL量瓶中,加甲醇约18 mL,超声处理(功率 250 W,频率 40 kHz)20 min,取出,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.1.5 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ L,注入液相色谱仪,测定,即得。因此五味子软胶囊的原料采用五味子的种子。

2.2 以五味子醇甲含量为指标优选最佳工艺 采用正交试验法优选乙醇回流提取最佳工艺。考查指标:出膏率和五味子醇甲含量。考查因素:按L9(34)正交试验表(表1)试验条件进行乙醇回流提取,滤过,浓缩,分别定容于50 mL量瓶中,作为样品溶液。

分别精密量取定容后的1～9号醇提样品溶液各1 mL,置5 mL量瓶中,分别加适宜溶剂稀释至刻度,摇匀,即得。分别精密吸取2.1.1项下的对照品溶液与上述供试品溶液各10 μ L,注入液相色谱仪,测定,即得(见表1-表3)。

表1 L9(34)正交试验因素水平表

表2 正交试验结果

表3 方差分析表

查表得F0.05(2,2)=19.00,F0.01(2,2)=99.00,因此B(回流次数)、D(加醇量)因素有极显著性,且B3＞B2＞B1,D3＞D2＞D1,A因素(乙醇浓度)、C因素(回流时间)无显著性,且A3＞A1＞A2,C3＞C1＞C2。即乙醇浓度、回流时间对该试验无多大影响。考虑到实际生产成本及实际生产实践经验,确定最后工艺为:A2B3C3D3,即用6倍量90%乙醇,回流提取3次,时间为2,2,1 h。

2.3 最佳工艺的验证实验 为考察上述最佳工艺的可靠性,按该工艺条件进行验证实验,并按照前面实验的方法测定样品中五味子醇甲的含量,分别为16.2,16.6,15.8 mg/g生药。测定结果说明,该工艺重复性好,确实为最佳的提取工艺。

3 小结

五味子提取工艺考察指标有采用紫外分光光度法测定五味子醇甲[1],或采用高效液相色谱法测定五味子甲素含量的[2],本实验参照中国药典[3]采用高效液相色谱法测定五味子醇甲含量,提高了实验精度。

[1]可成友,谭凤华,边蔷,等.正交实验法优化五味子醇甲的提取工艺研究[J].山西中医,2009,25(4):40.

[2]潘新,刘霞,蔡敏芝.五昧子中五味子甲素的提取工艺研究[J].中成药,2006,30(6):附2.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版社,2005:44.