前列地尔冻干乳的溶血性和急性毒性评价

洪 军 刘国辉 张光玉

前列地尔，又名前列腺素E1，是天然前列腺素（Prostaglandinum，PG）类物质中的一种。前列腺素存在于大多数哺乳动物组织内，其基本结构为含有一个环戊烷及两个脂肪侧链的二十碳脂肪酸。根据环戊烷上双键位置和取代基的不同可以分为几种类型，其中主要有E、F、A、B等四类。每一类有不同的亚型，具有广泛的生物学效应[1]。

内源性前列腺素E1在体内分布广，其含量甚微，一般细胞均能合成，在局部发挥生物学作用后迅速失活，具有抑制血小板聚集、血栓素A2生成、动脉粥样硬化、脂质斑块形成及免疫复合物的作用；能扩张外周血管和冠状血管，降低外周阻力和血压，有保护缺血性心肌、缩小心肌梗死面积等作用，还有排钠、利尿的作用及对肝、肾、肺、胃病变均有治疗、保护作用，临床上在心血管疾病、呼吸系统疾病、脑血管疾病、糖尿病并发症、肺动脉高压、肾病、男性不育疾病、肝肾综合征（HRS）等许多方面均有应用，尤其对老年心血管患者的治疗有独特疗效。

前列地尔目前已上市的剂型有注射用前列地尔粉针剂、前列地尔注射液、前列地尔尿道栓和前列腺素E1乳膏，但它们都存在各种缺陷，导致不良反应的发生[2]。为此研究人员开发了一系列新剂型，在研的品种主要有注射用前列地尔脂质体、前列地尔冻干粉（新辅料和环糊精包合物）、前列地尔冻干乳、注射用前列地尔胶束、鼻粉剂与口腔制剂（舌下片，口腔贴片或口腔含片）等剂型。其中注射用前列地尔脂质体、前列地尔冻干乳、注射用前列地尔胶束等注射剂正处在新药审评阶段。

本课题的目的就是通过家兔的溶血性试验、局部刺激性试验、豚鼠的过敏性试验及急性毒性试验对前列地尔冻干乳做出安全性评价，为前列地尔冻干乳进入临床提供保证。

1 前列地尔冻干乳的溶血性试验研究

1.1 仪器、实验材料与实验动物

1.1.1 仪器

高速离心机，上海安亭科学仪器厂；数显式电热恒温水浴锅，上海跃进医疗器械厂；兔台，自制；离心管（20mL）、玻璃棒，若干支。

1.1.2 实验材料及制品

前列地尔冻干脂肪乳，自制，10μg/支，临用前2mL注射用水溶解；前列地尔脂肪乳剂，自制5μg/mL；0.9%氯化钠注射液，哈尔滨制药六厂生产。

1.1.3 实验动物

新西兰大耳白，体重2.8～3.2kg，雌、雄各半。

1.2 试验方法与试验结果

1.2.1 试验方法[3，4]

将家兔背位固定于兔台，分离颈总动脉插管取血约20mL于离心管中，用玻璃棒轻轻搅去纤维蛋白，加生理盐水摇匀，离心（1500rpm×15min）后倾去上清液，如此反复3～4次，直至上清液不显红色且透明为止，用0.9%氯化钠注射液配成2%红细胞混悬液供试验用。取前列地尔冻干乳一支，加2mL注射用水溶解，摇匀。取10mL试管7只，编号并按表1所示，加入各种试液，其中第6管为生理盐水空白对照、第7管为阳性对照（蒸馏水）。各管轻轻摇匀，置37℃水浴中，分别观察并记录0.5、1、2、3、4h的结果，观察有无溶血和红细胞凝集现象，并于室温下放置24h，继续观察有无溶血及红细胞凝集发生。按表2标准判断。

表1 体外溶血试验

1.2.2 试验结果

前列地尔冻干乳在37℃水浴中观察0.5～4h内未出现溶血或部分溶血现象，表现为溶液中红细胞全部下沉，上层液乳白色与前列地尔注射液相同，摇匀后红细胞上浮分散；生理盐水组（第6管）在0.5～4h内也未出现溶血或部分溶血现象，蒸馏水组（第7管）在各时间点呈明显粉红色，全溶血。未见红细胞凝集。室温观察24h亦无溶血和红细胞凝集现象。以上试验重复3次，结果详见表3。

表2 溶血结果判断

表3 前列地尔体外溶血试验结果

1.3 讨论

注射制剂进入血液后，可能引起人红细胞溶血，因此必须检查制剂的溶血性是否符合要求。天然磷脂是脂肪乳的主要成分，为复杂的混合物，主要包括磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酸、二油酰磷脂酸、磷脂酰丝氨酸、二磷脂酰甘油及少量的鞘氨醇、神经酰胺、脑苷、神经节苷酯、碳水化合物及微量未探明物质等。其氧化产物中有一种为溶血卵磷脂，会引起红细胞的破裂而导致动物死亡。本实验中所用的注射用前列地尔冻干乳经常规体外试管溶血检验方法试验不会产生溶血反应，表明注射用前列地尔冻干乳溶血性符合静脉注射制剂的要求。

2 前列地尔冻干乳的急性毒性试验研究

2.1 实验材料与实验动物

2.1.1 实验材料及制品

前列地尔冻干脂肪乳，自制，10μg/支；前列地尔脂肪乳剂，自制，5μg/mL；0.5%葡萄糖注射液，哈尔滨制药六厂生产。

2.1.2 实验动物

ICR小鼠，体重19～22g。以上动物均购自吉林大学基础医学院实验动物部。

2.2 试验方法与试验结果

2.2.1 试验方法[3，4]

取40只小鼠，雌雄各半，随机分为两组：注射用水组和冻干乳剂组。将前列地尔冻干乳用适量注射用水溶解，每只小鼠静脉注射给药0.5mL，观察2周。

2.2.2 试验结果

给药后立即观察动物表现，均有体位固定，但不稳，自发活动少，安静，呼吸短暂缓慢，5～10min后恢复正常，饮食、饮水、排便均正常，口、眼、鼻无异常分泌物，动物状态良好体重增长正常。连续观察14d，动物无异常反应。

2.3 讨论

由于前列地尔脂肪乳静脉给予小鼠至可能承受的最大容量50mL/kg未见动物死亡，也未见严重的急性毒性，按此剂量给予小鼠前列地尔冻干乳所做的急性毒性试验结果表明，前列地尔冻干乳未见严重的急性毒性。

3 结 论

通过对前列地尔冻干乳剂进行的家兔溶血性试验未见有异常反应出现，说明在所采用的试验条件下注射用前列地尔冻干乳静注不会引起溶血反应；同时急性毒性试验表明本品具备足够的安全性。以上安全性考察试验说明本工艺处方所得前列地尔冻干乳生物相容性较好，供静脉注射给药安全。

[1] 胡志,高丽,孙秀峰,等.前列地尔临床应用的综合评价[J] .中国处方药,2005,4(37):73-77.

[2] 彭婕.34例前列地尔所致不良反应分析[J] .中国新药杂志,2006,15(1):65-67.

[3] 国家食品药品监督管理局药品审评中心.化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则[S] .2005年版.

[4] 徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M] .北京:人民卫生出版社,2002:910.