两种十大功劳叶中生物碱成分的分析与比较*

刘翔，刘布鸣，何开家，陈明生，林 霄

（1.广西中医学院，广西 南宁 530001； 2.广西中医药研究院，广西 南宁 530022）

阔叶十大功劳 Mahonia bealei(Fort.)Carr.为小檗科十大功劳属植物，其干燥叶为药材十大功劳叶，含有小檗碱、药根碱、尖刺碱、巴马汀、小檗胺、木兰碱等成分[1]，功能清虚热、燥湿、解毒，临床用于治疗肺痨咳血、骨蒸潮热、头晕耳鸣、腰膝酸软、湿热黄疸、带下、痢疾、风热感冒、目赤肿痛、痈肿疮疡等症[2]。药材市场上经常以同属植物长柱十大功劳作为阔叶十大功劳使用。有人从长柱十大功劳中分离提取到小檗碱、药根碱、巴马汀、异粉防己碱和"－谷甾醇[3]。但两种十大功劳叶的含量测定方法均未见报道，为了更有效地控制十大功劳叶药材的质量，比较两者的成分差异，笔者以反相高效液相色谱（RP－HPLC）法测定两者中药根碱、巴马汀和小檗碱的含量，报道如下。

1 仪器与试药

KQ5200B 型超声波仪（江苏昆山，160 W，40 kHz）；TG328A 型分析天平（上海）；LC9000型高效液相色谱仪，WM2010型通用多媒体色谱工作站（南宁威玛龙公司）。阔叶十大功劳 Mahonia bealei(Fort.)Carr.干燥叶，长柱十大功劳 Mahonia duclouxiana Gagnep.干燥叶，经广西中医药研究院何开家副教授鉴定。盐酸药根碱对照品（批号为0733－200005，供鉴别用），盐酸巴马汀对照品（批号为110732－200506，供含量测定用），盐酸小檗碱对照品（批号为1101713－200208，供含量测定用），均购于中国药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：大连依利特Sino Chrom ODS－BP柱（250 mm×4.6 mm，5!m）；流动相：乙腈 －0.2% 磷酸（23 ∶77）；流速：1.0 mL/min；检测波长：265 nm；柱温：室温；进样量：10!L。在此条件下，柱效按盐酸小檗碱峰计算，理论塔板数为14 501。盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的分离度分别为12.89，12.34，3.66，均可完全分离（见图1）。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取盐酸药根碱对照品 9.5 mg、盐酸巴马汀对照品9.2 mg、盐 酸 小 檗 碱 对 照 品10.5 mg，分别置 10 mL 量瓶，以流动相稀释至刻度，作为对照品贮备液（含盐酸药根碱0.95g/L，盐酸巴马汀 0.92 g/L，盐酸小檗碱 1.05 g/L）。分别精密吸取上述贮备液 1.18，0.23，0.22mL，混合于25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，得高质量浓度对照品溶液（盐酸药根碱44.84!g/mL，盐酸巴马汀8.46!g/mL，盐酸小檗碱9.24!g/mL）。精密量取高质量浓度对照品溶液0.8 mL用流动相定容至10 mL容量瓶，摇匀，作为低质量浓度对照品溶液（盐酸药根碱3.59!g/mL、盐酸巴马汀0.68!g/mL、盐酸小檗碱0.74!g/mL）。取干燥叶粉碎，过 20 目筛，取 0.25 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加入盐酸 －甲醇（1∶100）溶液约20 mL，超声处理60 min，放冷至室温，用盐酸－甲醇（1∶100）溶液定容至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10 mL至蒸发皿中，水浴60℃以下蒸干，放冷，残渣加入流动相使溶解，转移至10 mL量瓶，稀释至刻度，摇匀，0.45!m微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察：分别精密量取2.2项下对照品贮备液各0.38,0.14,0.22 mL，混合于 10 mL量瓶中，用流动相定容，制得混合对照品溶液（盐酸药根碱 36.1!g/mL，盐酸巴马汀 12.88!g/mL，盐酸小檗碱 23.1!g/mL）。再分别取上述混合对照品溶液 0.04,0.52,1.00,1.48,1.96 mL，置 10 mL 量瓶中，用流动相定容至刻度，制得5个质量浓度的对照品溶液。按上述色谱条件进样10!L，以峰面积积分值为纵坐标、进样量（!g）为横坐标绘制标准曲线，得盐酸药根碱回归方程 Y=2 ×10－7X －0.001 1，r=0.999 9，进样量线性范围是0.001 444～0.070 76!g；盐酸巴马汀回归方程 Y=2×10－7X －3×10－4，r=0.999 6，进样量线性范围是 0.000 515 2～0.025 24!g；盐酸小檗碱回归方程 Y=2×10－7X+2×10－5，r=0.999 8，进样量线性范围是 0.000 924 0 ～0.045 28!g。

精密度试验：精密吸取2.2项下低质量浓度对照品溶液10!L，重复进样6次。结果盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱峰面积的 RSD分别为1.46%,1.32%,1.88%。精密吸取2.2项下同一供试品溶液10!L，重复进样6次。结果盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱峰面积的 RSD分别为1.40%,1.60%,1.90%。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于 0，12，24，48，72 h时进样测定。结果盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱峰面积的RSD分别为1.53%,1.41%,1.26%，表明供试品溶液在3 d内稳定。

重现性试验：依法制备6份供试品溶液并进样测定。结果盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱平均含量分别为0.4129，0.08905，0.108 5 mg/g，RSD 分别为 1.47%，1.94%，2.20%（n=6），表明方法重现性良好。

加样回收试验：取样品细粉9份，约0.125 g，精密称定，分别精密加入 2.2 项下高质量浓度对照品溶液 0.8,1.0,1.2 mL，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定，计算回收率。结果见表1。

表1 盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱加样回收试验结果（n=9）

2.4 样品含量测定

分别取不同产地的样品细粉，按2.2项下方法平行制备2份供试品溶液，在上述色谱条件下测定。结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n=2）

3 讨论

试验结果表明，长柱十大功劳叶与阔叶十大功劳叶含有相同的化学成分，但含量差异很大，即使为同种植物，不同产地的含量差异也很大。

邢俊波等[4]曾发现盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱对照品溶液在265 nm波长处吸收值最大、灵敏度最高，故以此为测定波长。试验中曾考察了超声提取、回流提取、索氏提取器提取3种方法，发现前两者巴马汀的含量差不多，但超声提取药根碱和小檗碱的含量远高于其他两种方法，考虑到小檗碱对热不稳定性[5]及操作简便性，故采用超声提取。高温条件下盐酸小檗碱易氧化变质[5－6]，在蒸干甲醇时应注意水浴温度，经试验摸索，水浴温度60℃蒸干与室温下自然挥干所测得含量无差异，而当水浴温度为75℃时盐酸小檗碱含量减半，当以水蒸气蒸干时盐酸小檗碱含量仅为60℃水浴蒸干的1/4。

笔者建立的RP－HPLC法可同时分离并测定阔叶十大功劳叶与长柱十大功劳叶中的3种小檗碱型生物碱，方法简便、准确，既可用于十大功劳属植物中小檗碱型生物碱的考察，也可为含药根碱、巴马汀、小檗碱药材和中药制剂的常规检验提供参考。

[1]宋德勋.两种功劳叶药材鉴别[J].时珍国药研究,1997,8(4):343－344.

[2]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社，1999:320－321.

[3]何开家,刘布鸣,卢文杰.长柱十大功劳的化学成分研究(")[J].华西药学杂志,2008,23（2）:172 － 173.

[4]邢俊波,徐今宁,吴 禾,等.HPLC法测定妇泰软胶囊中生物碱的含量[J].中国新药杂志,2005,14(12):1 148－1 150.

[5]彭宗玢,朱天明.温度对盐酸小檗碱质量的影响[J].时珍国医国药,2002,13(10):45.

[6]朱天明,马伟东.盐酸小檗碱及其片剂中有关物质检查方法的探讨[J].中国药品标准,2006,7(4):60－61.