高效液相色谱法同时测定复方地芬诺酯片中两组分含量

何建锋，郭瑞锋，郄冰冰

（1.河北省邯郸市中医院，河北 邯郸 056001； 2.河北省药品检验所，河北 石家庄 050011）

复方地芬诺酯片是由盐酸地芬诺酯2.5 mg和硫酸阿托品0.025 mg组成的复方制剂，2005年版《中国药典（二部）》中分别采用两种高效液相色谱（HPLC）系统测定两组分含量，操作烦琐。本试验建立了一种能同时测定两组分含量的HPLC法，方法简便、快捷，结果准确、可靠，可很好地控制该产品的内在质量。

1 仪器与试药

LC-2020A HT系列高效液相色谱仪，LC-solution色谱工作站（日本岛津）；Sartorius BP211D分析天平。盐酸地芬诺酯和硫酸阿托品对照品（中国药品生物制品检定所）；复方地芬诺酯片（河北赛克药业有限公司，批号为 20060401，20060402，20060403)；十二烷基硫酸钠、乙腈、磷酸均为色谱级，试验用水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验[1]

色谱柱：岛津VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm，5!m)；流动相：0.5%十二烷基硫酸钠溶液（用70%磷酸调节pH至2.7）-乙腈（35 ∶65）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：210 nm ；进样量：10!L。在此条件下，色谱图见图1。两组分分离效果良好，与相邻峰分离度均大于1.5，理论塔板数均不低于4 000。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取盐酸地芬诺酯对照品10 mg，用流动相溶解并稀释制成100!g/mL的溶液，作为对照品溶液"；精密称取硫酸阿托品对照品10 mg，用流动相溶解并稀释制成20!g/mL的溶液，作为对照品溶液#。取样品细粉适量（约相当于盐酸地芬诺酯100 mg，硫酸阿托品1 mg），置50 mL量瓶中，加流动相适量，充分振摇使溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液"(此为硫酸阿托品含量测定浓度）；由于盐酸地芬诺酯和硫酸阿托品规格相差较大，因此将供试品溶液"稀释20倍后，作为供试品溶液#(此为盐酸地芬诺酯含量测定浓度）。

2.3 方法学考察

辅料干扰试验：按处方比例配制除待测组分的辅料空白样品，依法测定。结果表明，辅料峰（2.5 min以前）与相邻主峰分离良好，不干扰含量测定。

线性关系考察：精密量取2.2项下两种对照品溶液各1，5，10，25，50!L，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进样，记录色谱图。以质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，得盐酸地芬诺酯和硫酸阿托品的线性回归方程分别为 Y1=2.500 0×104+3.304 6×104X1（r1=0.999 9）和Y2=1.623 4×103+1.334 8×104X2（r2=0.999 9）。结果表明，盐酸地芬诺酯和硫酸阿托品质量浓度分别在10.12～505.6!g/mL和2.36～118.0!g/mL范围内与峰面积线性关系均良好。

精密度试验：分别取对照品溶液"和#各10!L，连续进样6次，记录色谱图，计算峰面积。结果盐酸地芬诺酯和硫酸阿托品峰面积的 RSD分别为0.3%和0.4%（n=6），表明仪器精密度良好。

重现性试验：取同一批号的样品6份，精密称定，依法测定两组分含量。结果盐酸地芬诺酯和硫酸阿托品含量的 RSD分别为0.5%和0.7%（n=6），表明方法重现性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8，12，24 h时进样测定。结果盐酸地芬诺酯和硫酸阿托品的 RSD分别为0.6%和0.8%（n=7），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

加样回收试验：精密称定已知含量样品（批号为20060401）6份，每份约含盐酸地芬诺酯50 mg，分别精密加入盐酸地芬诺酯对照品30，50，70 mg各2份，按供试品溶液制备方法制得待测溶液并测定，计算回收率。精密称定已知含量样品（批号为20060401）6份，每份约含硫酸阿托品0.5 mg，分别精密加入硫酸阿托品对照品0.3，0.5，0.7 mg各2份，按供试品溶液制备方法制得待测溶液并测定，计算回收率。结果见表1。

表1 盐酸地芬诺酯及硫酸阿托品加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

取3批样品，依法测定，按外标法以峰面积计算含量。结果3批样品中每片含盐酸地芬诺酯和硫酸阿托品分别为2.45 mg和24.6!g，2.44 mg 和 24.5!g，2.46 mg 和 24.8!g。

3 讨论

由于硫酸阿托品仅有末端吸收，在此波长范围盐酸地芬诺酯也具有较强吸收，因此测定波长定为210 nm。因为盐酸地芬诺酯和硫酸阿托品的极性差异太大，故在不加入离子对试剂或缓冲盐的情况下，二者不可能在同一流动相条件下同时、合理出峰。经试验，加入缓冲盐（磷酸二氢钾）后会导致两组分峰拖尾；加入离子对试剂可增强硫酸阿托品峰的保留性，在此基础上增加流动相中有机相的比例，即可使二者同时出峰且保留时间合理，峰形和分离效果均较为满意。因此，用0.5%十二烷基硫酸钠溶液作为流动相的水相组成。曾在流动相中加入少量三乙胺，结果三乙胺对改善拖尾的作用不明显，反而会导致峰形变宽，柱效降低，因此不使用三乙胺。当流动相pH＜3.5时，盐酸地芬诺酯和硫酸阿托品峰能有效分离，保留时间趋于稳定，峰形和分离度均较为理想；pH＞3.5时，二者虽能被同时分离，但拖尾严重，柱效均降低。因此，pH定在2.5～3.5之间较为合理。

硫酸阿托品对照品经120℃干燥恒重后即为无水硫酸阿托品，故试验测得的硫酸阿托品含量实为无水化合物含量。因为制剂中硫酸阿托品含量按一水化合物计算，所以测定结果需乘以二者的相对分子质量之比1.027，方可得一水硫酸阿托品的含量。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社，2005：425.