阳春片的质量标准研究

陈剑锋，陈学松

（1.广西壮族自治区岑溪市人民医院，广西 梧州 543200； 2.广西壮族自治区梧州食品药品检验所，广西 梧州 543002）

阳春片由人参、鹿茸、淫羊藿、山茱萸等组成，具补肾壮阳、生精益脑的功效，用于肾阳不足、肾精亏损引起的阳痿不举、滑精早泄、失眠健忘、肾虚腰痛。为控制该制剂质量，笔者对方中淫羊藿、山茱萸两种药材进行了薄层鉴别，并采用高效液相色谱法测定淫羊藿中淫羊藿苷的含量，结果报道如下。

1 仪器与试药

LC-2010型高效液相色谱仪（日本岛津）；GR-202型电子分析天平（日本AND）；CQX25-06型超声波清洗器。熊果酸、淫羊藿苷对照品（中国药品生物制品检定所）；阳春片（市售品）；硅胶G、硅胶GF254（化学纯，青岛海洋化工厂）；其他化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

淫羊藿：取样品3片，研细，加水15 mL，超声处理15 min，滤过，滤液用乙酸乙酯提取2次，每次15 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加水20 mL使溶解，加入已处理好的聚酰胺柱（内径1 cm，聚酰胺粉2 g，干法装柱）上，用乙酸乙酯20 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺淫羊藿的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液。再取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各5!L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲醇 -水（10∶1∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液色谱中则无此斑点（图 1 A）。

山茱萸：取样品15片，除去薄膜衣后研细，加硅藻土2 g，乙醇50 mL，置水浴上加热回流10 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，加水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15 mL，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，滤过，作为供试品溶液。另取缺山茱萸的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液。再取熊果酸对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各4!L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（24∶4∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃下加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液色谱中则无此斑点（图1 B）。

图1 薄层色谱图

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱：依利特 Hypersil-ODS2柱(250 mm×4.6 mm，5!m)；流动相：乙腈 -0.1%磷酸（30 ∶70）；流速：1.0 mL/min；检测波长：270 nm；进样量：10!L。

2.2.2 溶液制备

精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含40!g的溶液，即得对照品溶液。取样品10片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50 mL，称定质量，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，蒸干，残渣加水25 mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取5次，每次25 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45!m）滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取缺淫羊藿的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备成阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

专属性考察：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10!L，注入高效液相色谱仪。结果见图2，表明在该色谱条件下，阴性对照品对测定无干扰。

标准曲线制备：精密称取淫羊藿苷对照品11.24 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取上述对照品溶液1 mL，置10 mL量瓶中，分别加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液（质量浓度为44.96!g/mL）。按拟订的色谱条件分别吸取上述对照品溶液 1，2，5，10，50!L，注入色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标（Y）、淫羊藿苷对照品进样量为横坐标（X）绘制标准曲线，得回归方程 Y=172 549.8X+6 014.5，r=0.999 8（ n=5）。结果表明淫羊藿苷进样量在44.96～2 248 ng范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

精密度试验：取同一对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，测定峰面积积分值。结果的RSD=0.41%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，放置 0，2，4，6，8，10 h，按上述色谱条件分别测定峰面积积分值。结果的 RSD 为 0.77%（n=6），表明供试品溶液在10 h内基本稳定。

重现性试验：精密称取同一批样品共6份，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定含量。结果样品中淫羊藿苷平均含量为0.178 mg/g，RSD=1.84%（n=6），表明方法重现性良好。

加样回收试验：取已知含量适量（淫羊藿苷含量为0.178 mg/g）的阳春片约0.5 g，研细，取粉末精密称定，平行取样6份。另取淫羊藿苷对照品4.62 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.092 4 g/L的溶液。分别精密吸取该溶液适量，分别加入6份样品，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，测定，计算回收率。结果见表1。

图2 高效液相色谱图

表1 淫羊藿苷加样回收试验结果（n=6）

2.2.4 样品含量测定

分别取3批样品，按供试品溶液制备方法制备成溶液，在拟订的色谱条件下进行测定，计算含量。结果批号为 20070912，20070920，20071014的样品中，淫羊藿苷的含量分别为0.194，0.155，0.212 mg/g。

3 讨论

采用高效液相色谱法进行含量测定前，曾对样品前处理进行了考察，发现如仅用乙醇提取，极性大的杂峰过多，会对淫羊藿苷峰造成一定的干扰，增加了液-液萃取步骤后，杂质干扰明显减少。对乙腈-0.1%磷酸[1]、乙腈-水[2]、甲醇-1%醋酸[3]等流动相也进行了考察，结果发现以乙腈-0.1%磷酸（30∶70）为流动相得到的色谱峰峰形和分离度最好。

[1]苗艳平，张宪平.高效液相色谱法测定抗骨增生片中的淫羊藿苷的含量[J]. 吉林医学，2007，28(13):1 466-1 467

[2]陈 刚，彭 艳，陈熙佳.高效液相色谱法测定男宝胶囊中淫羊藿苷含量[J]. 中国药业，2009，18（1）：13-14.

[3]池玉梅，冯 亮，张爱华.HPLC法测定巴戟胶囊中淫羊藿苷含量[J].南京中医药大学学报，2006，22(6):384-385.