高分离度快速液相色谱法检测人参皂苷的研究

王艳杰，越 皓，2，王淑敏*，李 慧，2，刘淑莹，2

（1.长春中医药大学，吉林 长春 130117；2.吉林省人参科学研究院，吉林 长春 130117）

高分离度快速液相色谱法检测人参皂苷的研究

王艳杰1，越 皓1，2，王淑敏1*，李 慧1，2，刘淑莹1，2

（1.长春中医药大学，吉林 长春 130117；2.吉林省人参科学研究院，吉林 长春 130117）

目的建立高分离度快速液相色谱（RRLC）法定量检测人参中的主要成分人参皂苷，并应用于人参根、人参花及人参花不同部位中主要人参皂苷成分的含量测定。方法采用反向色谱柱进行梯度洗脱。结果人参根、人参花及人参花不同部位人参皂苷Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd在15 min内得到完全分离，并且测得人参花中皂苷含量约是人参根中皂苷含量10倍，人参花不同部位皂苷含量为花蕾＞花托＞花柄。结论本方法具有快速、准确、分离效果好、高灵敏度、节约溶剂、可操作性强、重现性好的优点，比传统HPLC法更为方便快捷，能更有效的控制药材质量。

高分离度快速液相色谱（RRLC）；人参花花蕾；人参花花托；人参花花柄；人参皂苷

人参为五加科植物人参（Panax ginseng C.A.Mey.）的干燥根。具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、大补元气、补脾益肺等功用［1-5］。人参花为人参的干燥花蕾，被欧洲誉为“绿色黄金”，我国学者对人参花的研究远远少于人参［6-7］。高分离度快速液相色谱（RRLC）是一种新兴的液相色谱技术，具有高分离度和快速分离的特点。本实验建立了定量分析人参皂苷的RRLC方法，并对人参根、人参花及人参花不同部位中人参皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 含量进行了比较，报道如下。

1 仪器与材料

Agilent 1200高分离度快速液相色谱仪；ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 × 50 mm，1.8 μm）色谱柱；G1312B Bin Pump SL型二元泵；G1316B TCL SL型检测器；Chem-Station化学工作站。

乙腈：色谱纯，加拿大Promptar试剂公司。甲醇：色谱纯，美国TEDIA试剂公司。水为双重蒸馏水。人参皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 均购自吉林大学基础医学院。人参根、人参花均购自吉林省抚松县。

2 溶液制备

2.1 供试品溶液

2.1.1 人参根样品制备 取人参根粉末（过4号筛）2.0 g，精密称定，加入40 mL 70%乙醇回流提取2次，每次1.5 h，合并两次滤液，减压回收乙醇，加入40 mL水溶解，加入40 mL乙醚，萃取3次，弃去乙醚层，合并水层，加入120 mL水饱和正丁醇萃取3次，合并水饱和正丁醇层，减压回收水饱和正丁醇。浸膏加入甲醇，配成 1.2 g／mL的溶液，摇匀后过 0.45μm 微孔滤膜，即得。

2.1.2 人参花、人参花花蕾、人参花花托、人参花花柄样品制备 将人参花分成3部分，即人参花花蕾、人参花花托、人参花花柄，分别将其于60℃干燥1 h，碾碎，过60目筛，称取1.5 g，按1∶15的固液比加入乙醚脱脂两次，待其乙醚气味消失，再于60℃干燥1 h，按照1∶20的固液比加入30 mL 50%乙醇，回流提取2次，每次1.5 h，合并两次滤液，减压回收乙醇，得到人参皂苷浸膏粗品，加30 mL水溶解，加入水饱和正丁醇萃取3次，每次30 mL，合并正丁醇层，减压回收正丁醇，得到人参皂苷浸膏。用甲醇溶解，配成0.18 g／mL的溶液，摇匀后过 0.45μm微孔滤膜，即得。2.2 对照品溶液 分别精密称取对照品人参皂苷Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 适量，加入甲醇制成每 1 mL分别含 0.118 ～ 15.8，0.016 ～ 12.4，0.024 ～ 34.8，0.07～35.0，0.035 ～ 33.3，0.036 ～ 67.9μg的溶液，作为对照品溶液。

3 色谱条件

ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 × 50 mm，1.8μm）；流动相：乙腈（B）-水（A），梯度洗脱（0 min，20%B；0 ～15 min，20% ～ 35%B；15 ～ 17 min，35%B）；流速：1.0 mL／min；检测波长：203 nm；柱温：35 ℃；进样量 10μL。

3.1 人参标准品色谱结果 见图1。

图1 对照品RRLC色谱图

3.2 各样品色谱结果 见图2。

图2 样品RRLC色谱图

4 方法学考察

4.1 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液注入液相色谱仪，以峰面积积分值 Y为纵坐标，以对照品进样量 X（μg）为横坐标作图，得人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 Rc、人参皂苷 Rb2、人参皂苷Rd的回归方程，见表1。

表1 6种人参皂苷标准曲线

人参皂苷 Re进样量在 0.118～ 15.8μg，人参皂苷 Rf进样量在0.016～12.4μg、人参皂苷 Rb1进样量在0.024 ～ 34.8μg、人参皂苷 Rc 进样量在 0.07 ～35.0μg、人参皂苷 Rb2 进样量在 0.035 ～ 33.3μg、人参皂苷Rd进样量在0.036～67.9μg范围内线性关系良好。

4.2 精密度实验 分别吸取对照品溶液10μL连续进样 5次，测定峰面积。人参皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 峰面积的 RSD 分别为 0.13%、0.059%、0.98%、0.65%、0.075%、0.54%，精密度良好。

4.3 重复性试验 按供试品溶液制备方法处理样品7份，测得人参根、人参花、人参花花蕾、人参花花托、人参花花柄中人参皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd的 RSD 分别为 0.27% ～ 2.46%、2.86% ～ 4.49%、1.50% ～ 4.70%、0.64% ～ 4.35%、0.97% ～ 4.92%、1.26% ～4.61%，重现性良好。

4.4 加样回收率实验 取上述已测知含量的样品各6份，每份0.5 g，精密称定，分别按相当于药材中人参皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 100%的量加入混合对照品溶液，按“供试品溶液制备”方法进行处理并测定，求得回收率平均值为 98.5% ～100.08%、98.9% ～ 99.6%、98.3% ～ 99.2%、98.5% ～100.03%、98.3% ～ 99.8%、98.9% ～ 99.8%。测得人参皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 的 RSD 为 3.86% ～4.98%、4.28% ～ 4.86%、4.67% ～ 4.89%、4.15% ～4.72%、4.25% ～ 4.62%、4.38% ～ 4.95%。

5 样品测定

分别取按 2.1.1、2.1.2 项下制备的供试品溶液10μL注入液相色谱仪，测得的人参皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 的平均百分含量，见表 2。

表2 样品含量测定结果%

6 讨论

本研究用RRLC法定量分析了人参根、人参花及人参花不同部位中人参皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd，在较短的时间内6种人参皂苷达到完全分离，分离度大于1.8。同时该方法还具有高灵敏度、节约溶剂、可操作性强、结果准确可靠、重现性好的优点，是一种可替代传统方法更有效的控制药材质量的方法。

本研究通过对人参根、人参花及人参花不同部位中人参皂苷 Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 含量比较，发现人参花中皂苷含量约是人参根中皂苷含量10倍，并且人参花不同部位皂苷含量差异较大，即花蕾＞花托＞花柄。人参一般在4年后起收，每年成产的人参花除极少量加工成人参花茶外，大部分被丢弃。本文通过对人参根、人参花及人参花不同部位中人参皂苷Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd 含量比较，用科学数据证明了人参花的重要性。笔者认为，深入进行人参花的研究与开发，对充分利用人参资源，提升人参的附加值，保护环境等方面具有重要的意义。

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R284.2

A

1007－4813（2010）06－0824－03

吉林省科技发展计划项目（20090182）；吉林省重大科技攻关项目（20096043）

王艳杰（1983－），女，硕士研究生。研究方向：中药化学。

*通信作者：王淑敏，教授，Tel：0431-86045467，Fax：0431-86172409，E-mail：minshuw＠sina.com。

2010－ 09－14）