抗HCV靶向药物筛选及相关中药研究进展

李杏花，吴修红，王喜军

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)是已知唯一能造成慢性感染的RNA病毒(除逆转录病毒外)［1］。HCV感染者中，55% ～85%会发展为慢性感染，发展为肝硬化、肝癌的比例也较高［2］。目前，标准的HCV治疗方案是α－干扰素(interferon alfa，IFN－α)或聚乙二醇化α－干扰素(pegylated interferon alpha，peg－IFNα)和利巴韦林(ribavirin，RBV)联合使用，对丙型肝炎能起到一定的治疗作用，但对I型HCV病毒感染者的疗效仅为40% ～50%，且治疗周期长，费用高，副作用也较高［3］。临床上迫切需要更为有效的抗HCV药物。目前，抑制HCV的感染和复制的靶向治疗药物的研究成为主要趋势，并获得了重大进展。本文就目前HCV的靶向药物筛选及相关中药研究进展进行了综述。

1 HCV靶向治疗药物的研究方向

一般情况下，只要抑制HCV感染和复制的任何一个环节就能对丙型肝炎起到治疗作用。

1.1 阻断病毒进入细胞的过程

Tao W［4］研究发现，HCV感染过程中 E2中的I414T的突变是HCV获得较高感染力和高突变性的重要因素;Keck ZY［5］研究发现，CD81分子是HCV病毒对中和抗体的免疫逃逸的重要影响因素。

1.2 阻断病毒大分子的生物合成

1.2.1 抑制病毒RNA的翻译

梁雪松等［6］研究发现，酵母细胞的一段60nt核酸片段IRNA及其互补体RNA(cIRNA)对HCV IRES介导的蛋白翻译体有体外抑制作用，而对帽状结构RNA形成的依赖性蛋白翻译仅有轻微的抑制作用，以此可以考虑作为HCV感染的基因治疗。Kapadia SB［7］研究发现，siRNA可抑制HCV复制子的复制。

1.2.2 阻断病毒的复制

病毒复制所需的酶有NS2－3蛋白酶、NS3－4A丝氨酸蛋白酶、NS3解旋酶和NS5B RNA依赖性RNA多聚酶。对HCV复制酶的抑制剂的研究已是目前HCV靶向药物研究的主要方向。

1.2.2.1 NS2 －3 蛋白酶

NS4A衍生的肽，在体外对NS2－3蛋白酶有抑制作用［8］。Ciesek S［9］研究发现，环孢素 A 是通过抑制NS2来抑制HCV复制的。

1.2.2.2 NS3 －4A 丝氨酸蛋白酶

目前NS3－4A丝氨酸蛋白酶抑制剂药物主要有:Te1aprevir(VX95O)、Boceprevir(SCH50303)、BILN －2061、ITMN －191(R7227)、Vaniprevir(MK －7009)等。

1.2.2.3 NS3 解旋酶

现有的NS3解旋酶抑制剂抑制剂主要是硫代叠氮化合物和取代嘧啶核苷［10］。

1.2.2.4 NS5B RNA 依赖性 RNA 多聚酶

NS5B RNA依赖性RNA多聚酶的抑制剂主要有核苷类抑制剂和非核苷类抑制剂;核苷类抑制剂多数为底物类似物，通过与正常底物竞争插入到RNA链中导致HCV病毒复制终止。非核苷类抑制剂主要有苯并噻二嗪、苯并咪唑及其衍生物、双取代的苯丙氨酸/噻吩羟胺化合物、吡喃类化合物等。

2 抗HCV药物筛选的模型

2.1 动物模型

2.1.1 黑猩猩

迄今为止，黑猩猩是唯一适合HCV感染并支持复制的动物模型，其感染HCV后的免疫反应、致病过程与人类相似［11］，可用于研究病毒在体内的复制过程、发病机制及筛选HCV疫苗。

2.1.2 树鼩

Zhao X［12］发现，HCV患者血清可感染原代分离培养的树鼩肝细胞，并可在其中传代，提示树鼩可能对HCV易感。由于树鼩体积小，来源容易，可以进行人工繁殖，将有可能替代黑猩猩用于HCV研究。

2.1.3 小绢猴，绒猴

GB病毒B型(GBV－B)与HCV病毒有高度核酸同源性。研究发现，GBV－B可以感染小绢猴，绒猴，因此这两种动物可能替代黑猩猩用于HCV筛选［13－14］。

2.1.4 小鼠

2.1.4.1 转基因小鼠

Mofiya等［15］用 HBV X基因启动子来控制 HCV核心蛋白的表达获得的核心基因转基因小鼠出现肝脂肪变性、胆管损害和淋巴细胞浸润，有1/3进一步发展为肝肿瘤。Masciopinto等［16］通过CAG开关有效地控制CD81的表达，获得了CD81转基因小鼠。

2.1.4.2 嵌合小鼠

Labonte等［17］通过异种移植将未感染HCV的人肝癌细胞移植到无胸腺的裸鼠体内，并用HCV阳性血清进行感染，证实HCV可以感染移植人肝细胞的小鼠;Mercer等［18］将严重联合免疫缺陷小鼠(SCID)与尿激酶型纤溶酶原激活物转基因小鼠(uPA)的属性联合起来，产生了一种新的模型系统。Kamiya N［19］利用telaprevir对上述模型进行了实际评估，结果表明，给予与临床等量的药量后，血清中HCV快速转阴，在治疗10天后肝脏中HCV转阴率与血清HCV转阴率具有相关性。

2.1.4.3 质粒转染鼠模型

詹林盛等［20］将pHCV－neo4表达载体转染到小鼠体内，在小鼠肝脏检测到荧光素酶的高水平表达，同时HCV IRES介导的荧光素酶在小鼠心、脾、肾脏组织中也得到表达，可以作为体内瞬时评价以HCV IRES为靶位的抗HCV药物活性的小鼠模型。

2.2 细胞模型

2.2.1 HCV全长基因感染细胞模型

Yoo等［21］应用体外转录的全长HCV RNA经脂质体法传染Huh7细胞建立了HCV连续复制模型。Wakita等［22］以HCV全基因组复制子细胞(JFH1)转录本RNA体外转染Huh7细胞从而建立了细胞模型，该细胞模型能稳定地支持HCV RNA复制。

2.2.2 HCV基因片段转染细胞模型

Dubuisson等［23］应用重组的痘病毒和辛德比斯病毒暂时表达载体，传染人HEPG2、PK－15和BHK－21细胞系，分别研究了HCV－1株和BK株包膜蛋白的表达。Matsuura等［24］应用重组的杆状病毒表达载体(AC316)和表达质粒(PSR316)转染昆虫细胞和猴肾COS细胞，研究了HCV包膜蛋白的真核表达。

3 中药HCV靶向治疗药物的研究

由于干扰素治疗的副作用大，治疗费用高，且疗效不理想。近年来，筛选有效的抗HCV中药成为了研究热点。中药在保护肝细胞、退黄降酶、抗肝纤维化方面有着独到的优势，且中药治疗HCV是多靶点，多角度的，尽管中药与干扰素治疗丙型肝炎的近期疗效相似，但从远期疗效上看，中药抗病毒效果更为持久、稳定，中药治疗无不良反应或较少，对比干扰素治疗具有明显的优势。

3.1 专方专病

中医药治疗HCV大多采用固定方治疗，且对症下药。目前，治疗HCV的复方主要有丙肝灵、丙肝汤、丙肝宁、小柴胡汤、甘露消毒丹、健脾补肾方、肝舒胶囊、苦参素制剂、蚁珠汤、益尔肝汤、加味三参汤、清补饮、益肝饮等。洪宁［25］观察丙肝I号与α－干扰素对照治疗HCV6个月后表明，两者临床疗效相似，有显著降低患者ALT和AST作用，并可抑制病毒的复制，具有较好的远期病毒学应答。杨沈秋［26］应用肝乐胶囊治疗慢性丙肝60例，总有效率为93.3%。殷杰［27］使用丙肝宁冲剂治疗慢性丙型肝炎，有明显抗丙型肝炎病毒疗效，且耐受性好，无严重不良反应。黄朝阳［28］使用丙肝康治疗丙型肝炎32例，总有效率96.8%。刘秀英［29］使用松栀丸治疗慢性丙型肝炎，血清学标志物阴转作用明显;ALT复常率及临床有效率高，服用安全，无毒副作用。李晓霞［30］采用健脾补肾方治疗慢性丙型肝炎20例，结果表明，健脾补肾方治疗慢性丙型肝炎有恢复肝功能的作用，而且在抗纤维化方面具有优势。牛桂玲［31］用益肝饮治疗慢性丙型肝炎，结果表明，益肝饮对慢性丙型肝炎的保肝，降酶，抗纤维化作用较好。

3.2 中西药联合治疗

采用中药对干扰素治疗进行干预，可减少副作用，提高疗效。王晓忠［32］利用复方小柴胡汤对长效干扰素α－2a不良反应进行干预，结果表明，小柴胡汤能显著减轻长效干扰素不良反应。王丽［33］用苦参素和干扰素联合治疗丙型肝炎，结果表明，苦参素能明显提高干扰素抗病毒疗效，且苦参素能减少干扰素致粒细胞下降的不良反应。杜伟［34］采用加味甘露消毒丹联合干扰素α－2b治疗慢性丙型病毒性肝炎，结果表明，加味甘露消毒丹联合干扰素可以更好的改善丙肝患者的临床症状体征，加强肝功能的修复，恢复肝损害，增强干扰素抑制丙肝病毒的作用。

目前，对于HCV的靶向研究大多为单靶点研究，病毒容易突变发生耐药性，从而影响药物的治疗效果，采用联合疗法可以尽量减少病毒的耐药性，提高治疗效果，使HCV筛选模型取得了较大进展。中西药联合治疗丙型肝炎，可以进一步提高机体清除病毒能力，促进肝功能的改善和修复，调节机体免疫能力，抗肝纤维化，降低复发率，减少干扰素毒副作用。中西医结合治疗丙型肝炎效果肯定，值得临床推广应用。

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