高白细胞性急性髓系白血病M2a的临床特性及免疫表型研究

孟予城 杜昊 杨淑莲 李宝生 雷蕊 周振环 郑秀颖 崔元 王东侠 张文艺 徐文江

高白细胞性急性白血病(hyperleukocytic acute leukemia，HLAL)通常是指患者外周白细胞计数＞100×109/L的急性白血病。发病率占急性白血病的5% ～20%［1］，是急性白血病中预后较差的一类，其病情发展进展迅速，缓解率低，易并发DIC，颅内出血等严重的并发症，导致患者早期死亡，本文对高白细胞性急性髓系白血病M2a的临床特征及免疫表型进行了研究，旨在为此型HLAL的临床诊疗和研究提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 高白细胞性急性髓系白血病M2a(HLAMLM2a)患者20例(HLAML-M2a组)为2002年4月至2009年12月河北省廊坊市中医医院住院患者，其中男11例，女9例;年龄5～71岁，中位年龄39岁;同时期住院的非高白细胞性急性髓系白血病M2a(HLAML-M2a)患者37例为对照组，其中男17例，女20例;中位年龄36岁。

1.2 免疫表型分析 无菌操作，抽取骨髓肝素钠抗凝，常规分离骨髓单个细胞，采用直接/间接免疫荧光法标记，单克隆抗体选择以 CD2、CD5、CD7为 T 系标记，以 CD13、CD14、CD15、CD33为髓系标记，以CD10、CD19、CD20为 B系标记，以 CD41为巨核系标记，以CD34、HLA-DR为干/祖系标记，以美国 Conlter公司 EPICS-XL型流式细胞仪进行检测，相关试剂购自法国Immunotech公司，所有患者检测前均未做任何治疗。

1.3 结果判定 白血病细胞群表面抗原，淋系≥30%，髓系及CD7≥20%，CD34≥10%，HLA-DR≥20%为阳性标准。

1.4 诊断标准 所有病例均经细胞形态学、细胞组织化学、免疫表型等综合确诊，免疫表型的诊断依照白血病免疫学特征欧洲协作组(EGIL)推荐的积分标准进行［2］。除外双表型及双系列白血病，对伴有淋系抗原阳性，但又不够诊断为双表型或和双系列白血病的，视为伴淋系抗原表达的AML(L+AML)。

1.5 化疗方案 以DA为主(柔红霉素+阿糖胞苷)，其他方案有MA(米托蒽醌+阿糖胞苷)，HA(三尖杉酯碱+阿糖胞苷)TA(吡柔比星+阿糖胞苷)，2组均于2个疗程结束后，以骨髓评价缓解情况。疗效判断依据1987年苏州会议标准［2］。

1.6 统计学分析应用SAS 6.12统计软件，计量资料以表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，单向有序2×K表资料进行Wlcoxon秩和检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HLAML-M2a的主要临床特征 高白细胞性M2a与非高白细胞性M2a相比较，主要临床指标，除外周血白细胞数显著增高外，无明显差异(P＞0.05)，HLAML-M2a发病至确诊的时间，明显短于非高白细胞性M2a(P＜0.01)。见表1。

表1 HLAML-M2a与NHLAML-M2a主要临床特征分析

2.2 缓解情况比较 HLAML-M2a组中有3例放弃治疗，2例死亡，15例完成2疗程化疗，其中2例缓解，缓解率为11.76%。NHLAML-M2a组中有3例放弃治疗，34例完成化疗，其中16例缓解，缓解率为47.05%。2组比较，差异有统计学意义(χ2=6.182，P ＜0.01)。

2.3 2组骨髓增生情况分析 2组骨髓增生情况Wilcoxon分析结果显示，2组间差异有统计学意义(u=2.2477，P＜0.05)，HLAML-M2a组骨髓增生与NHLAML-M2a组相比较更为活跃。见表2。

表2 2组骨髓增生情况分析 例

2.4 高白组与对照组非淋系抗原的表达 在HLAML-M2a组非淋系抗原阳性率最高是CD33有17例(85%)，其余依次为CD1313例(80%)、CD348例(40%)、HLA-DR 6 例(30%)、CD14、CD15各1例(5%)。在NHLAML-M2a组中非淋系抗原的阳性率最高的是CD3335例(94.59%)，其余依次为CD1330例(81.08%)、CD3426 例(70.27%)、HLA-DR 16 例(43.24%)、CD155 例(13.51%)、CD143 例(8.1%)。两者比较，CD34的表达差异有统计学意义(χ2=4.492，P ＜0.05)，其余差异无统计学意义(P ＞0.05)。

2.5 HLAML-M2a组与对照组中CD7抗原的表达 在本组病例中，共有 17例表达 CD7抗原，阳性率为 29.82%，其中HLAML-M2a组中CD7有4例阳性(20%)，NHLAML-M2a组中有13例阳性(35.14%)，两者间差异无统计学意义(χ2=0.790，P ＞0.05)CD7+M2a的平均外周血白细胞数为(52±56)×1012/L，CD7-M2a组的平均外周血白细胞数为(72±79)×109/L，2 组差异无统计学意义(t=1.0785，P ＞0.05)。

3 讨论

急性白血病是造血干细胞恶性克隆性增生所导致的疾病，具有高度的异质性，高白细胞性急性白血病是其中的高危类型。本组20例HLAML-M2a除外周血白细胞计数显著增高外，其余主要临床指标与对照组相比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。但是，该组患者由自觉不适，到确诊的时间明显短于对照组，提示本组患者病情进展迅速。而且，HLAML-M2a组的缓解率明显低于对照组，提示本组患者对化疗药物不敏感，预后不良，这与国内外学者的研究结论相一致［3，4］。

HLAML-M2a与NHLAML-M2a比较骨髓增生更为活跃。这应是造成HLAML-M2a患者外周血白细胞计数异常增高的重要原因之一。

本研究2组中，膜分化抗原表达阳性率依次CD33、CD13、CD34、HLA-DR，与国内研究者报道的阳性率差别不大［5，6］。在CD13、CD33阳性率次序，不同实验室的结果略有不同，应与各实验室试验方法、试剂的选择有关。本组HLAML-M2a患者CD34的表达阳性率显著低于对照组，差异有统计学意义(χ2=4.492，P ＜0.05)。CD34是人类造血干/祖细胞标志，属于钙黏蛋白家族，通过调节干细胞与骨髓外基质细胞或与基质细胞的黏附，在造血过程中发挥作用［5，8］。研究认为 CD34表达，可作为髓系白血病预后不良的指标［9－11］。在本组病中CD34的阳性率在 HLAML-M2a中较低而在 NHLAML-M2a组中较高，而HLAML-M2a的缓解率又明显低于对照组。由于对高白细胞性急性白血病免疫表型方面的研究极少，具体到HLAML-M2a则国内未见相关的大样本研究，因此CD34在HLAML-M2a中的表达，以及与HLAML-M2a发生、发展的关系有待于进一步探讨。

CD7是一种单链跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族，基因定位于17q25，分子量40 kDa，表达于胸腺细胞、T细胞及NK细胞表面，可作为T系早期的标志，用于T系淋巴细胞白血病的诊断，但特异性不强，部分AML细胞表面也有CD7的表达，阳性率在不同研究中差异较大，文献报道在10% ～58%［12，13］。本组研究的阳性率也在此范围之内。文献报道的对于AML外周血白血病计数的影响存在争议［14，15］。本组研究结果与胡晓梅等［16］的研究结论一致，CD7在HLAML-M2a中的表达与HLAML-M2a的发生无关。

综上所述，HLAML-M2a与NHLAML-M2a相比，起病急、进展快。T系抗原CD7在M2a型白血病的表达与HLAML-M2a的发生关系不大。在HLAML-M2a中CD34的表达阳性率低于NHLAML-M2a，其原因尚需进一步探讨。

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