VEGF 与Ki-67在结肠癌组织中的表达及意义

徐秀花

(大同市第二人民医院，山西大同 037005)

结肠癌为消化道常见的恶性肿瘤，它的形成及发展受多种因素的影响，其中一个重要的因素是血管的形成，血管内皮生长因子VEGF被认为是最重要的血管形成因子[1]，有了血管的滋养，肿瘤才能不断的生长，血管形成越多，肿瘤生长越快，患者的预后可能就越差。Ki-67是一种反映细胞分裂和增殖活性的标志物，Ki-67在肿瘤组织中表达越高，表明肿瘤细胞增殖越活跃，提示肿瘤生长越快[2]。本研究应用免疫组化法检测VEGF和细胞增殖核抗原Ki-67在肿瘤细胞中的表达情况，以期为结肠癌患者术后的临床治疗和预后评估提供依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集山西省大同市第二人民医院病理科2010年2～6月间结肠癌石蜡标本55例，HE染色，所有患者均经两位病理学专家诊断证实为结肠腺癌，其中男性26例，女性29例，年龄37～79岁，中位年龄57岁，肿瘤直径中位数5.1 cm，发生淋巴结转移21例，按分化程度将其分为高、中、低三个级别，按照TNM分期标准进行分类，Ⅰ期0例，Ⅱ期15例，Ⅲ22例，Ⅳ期18例，病理参数见表1。

表1 VEGF与Ki-67在结肠癌组织中的表达与临床病理参数的关系Table 1 Relationship between Expression of VEGF and Ki-67 in Colon CanceRand Clinical Pathology Parameter

1.2 免疫组织化学

采用EnVision法，VEGF及 Ki-67单克隆抗体及EnVision试剂盒购自北京中杉生物工程有限公司。步骤按试剂说明书进行。

1.3 结果判读标准

VEGF以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性，Ki-67以细胞核内出现棕黄色或棕褐色颗粒即为增殖细胞，光镜下随机选取10个高倍视野，每个视野计数100个细胞，共计数1 000个细胞，计算阳性细胞百分率，阳性细胞数超过肿瘤细胞总数的10%为阳性，小于10%为阴性。

1.4 统计学处理

所有数据用SPSS11.5统计软件进行分析。采用χ2检验和Pearson相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 VEGF及Ki-67表达与结肠癌临床病理参数的关系

55例结肠癌组织中，VEGF阳性表达36例，阳性率65.5%，VEGF阳性表达与患者年龄、性别、肿瘤直径、分化程度及TNM分期无相关性(P＞0.05)，而与淋巴结转移有相关性(P＜0.05)，见表1，图1。

图1 VEGF在结肠癌中的表达Fig 1 Expression of VEGF in Colon Cancer

Ki-67阳性率为54.5%，Ki-67阳性表达也与患者年龄、性别、肿瘤直径、分化程度及TNM分期无相关性(P＞0.05)，与淋巴结转移有显著相关性(P＜0.05)，见表1，图2。

图2 Ki-67在结肠癌中的表达Fig 2 Expression of Ki-67 in Colon Cancer

2.2 结肠癌中VEGF与Ki-67表达之间的相关性分析

VEGF与Ki-67均阳性表达者24例，均阴性者13例，经Pearson相关性分析，二者呈显著正相关(r=0.335，P=0.012)。见表 2。

表2 结肠癌组织中VEGF与Ki-67表达的相关性分析 例Table 2 Analysis of Expression of VEGF and Ki-67 in Colon CanceRTissue case

3 讨论

结肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一，位居恶性肿瘤的第4位，且发病率呈逐年上升趋势[3]。形成肿瘤的原因可能与肿瘤血管形成、凋亡抑制及肿瘤细胞的克隆性增殖等有关，而这些原因可能是导致结肠癌手术失败和患者死亡的主要原因，同时也是影响患者术后生存率的重要因素，因此研究结肠癌术后的复发或转移对判断患者的预后及制定治疗方案有重要的临床意义。

血管内皮生长因子VEGF可以通过促进结肠癌中血管的生成而促进癌的不断生长、浸润甚至转移，其表达程度的高低与结肠癌的生物学行为密切相关，它的过表达可能是结肠癌预后的不良因子[4]。本研究结果显示，VEGF在结肠癌组织中表达阳性率为65.5%，其表达程度与患者的年龄、性别、分化程度及TNM分期均无关，尤其从与分化程度及TNM分期比较中可知，VEGF在肿瘤的生长期均参与了血管的形成，无论肿瘤分化程度如何或者肿瘤位于第几期。

本组患者中发生淋巴结转移21例，其中20例VEGF呈阳性表达，发生淋巴结转移的患者其阳性表达显著高于无转移的患者，两者比较差异有统计学意义，提示在结肠癌进展过程中，VEGF可能对结肠癌的侵袭转移起了一定的促进作用。有文献报道，与结肠癌肿瘤相关的巨噬细胞有分泌VEGF-C、D的功能，它可通过自身分泌一些因子而影响肿瘤细胞内淋巴管生成因子的表达，然后对结肠癌肿瘤局部淋巴管的生成和转移起到一定的促进作用[5]，可知VEGF家族在结肠癌淋巴结转移过程中可能起着一定的作用，由此可提示抑制VEGF的促血管生成作用，可能会减慢或抑制肿瘤的进展。已有研究显示，一些药物能够抑制结肠癌肿瘤血管的形成，抑制VEGF的释放，使其发生坏死以及减少肿瘤浸润及转移的作用[6，7]。张晓雨等研究也认为VEGF在结直肠癌组织中的表达可以作为判定患者病情进展的标志之一，并且认为VEGF阳性表达的患者其生存时间显著低于阴性表达的患者[8]。研究中发现19例VEGF阴性表达的患者，有1例直径大于5.1 cm，已发生淋巴结转移并且存在坏死，所以建议对该患者应密切随访，观察病情变化。同样无发生淋巴结转移而VEGF阳性表达的16例，其中3例为肿瘤直径小于5.1 cm，TNMⅡ期患者，提示这类患者虽然还未发生淋巴结转移但是患者应该引起注意，定期检查。

Ki-67是反映细胞分裂和增殖活性的标记物，其确切功能目前尚不清楚，研究表明，它与多种肿瘤的发生发展、转移及预后密切相关[9]，已成为检测肿瘤细胞增殖活性的有效指标之一[10]。在结肠癌中，Ki-67表达升高与结肠癌的浸润深度和淋巴结转移有关，Ki-67表达高的患者预后较差[11，12]。本研究均采用较新鲜标本，目的就是能够使Ki-67的核表达更佳，结果显示Ki-67阳性表达与患者年龄、性别、肿瘤直径、分化程度及TNM分期无相关性，只与淋巴结转移有关，提示发生淋巴结转移的患者细胞的增殖活性较高，21例中有19例发生淋巴结转移的患者Ki-67核增殖指数大于10%，表明这类患者预后可能较差，对未发生淋巴结转移的11例增殖指数高的患者进行分析，发现2例为TNMⅡ期患者，因此建议对其密切随访。

对VEGF和Ki-67表达患者进行分析，发现二者有共同阳性患者24例，共同阴性13例，统计学分析表明二者间有显著相关性，该结果与在乳腺癌中的表达[13]相似，在结肠癌中尚未见报道。因此推测肿瘤在生长过程中，由于肿瘤细胞要不断的生长，导致其不断分泌VEGF进而刺激血管的形成，这样加快了肿瘤的进一步增殖，肿瘤细胞增殖活性增强，又导致肿瘤的不断生长，这种周而复始的恶性循环引起肿瘤发生侵袭或转移，从而导致患者的预后较差，因此认为VEGF和Ki-67共同表达患者预后相对更差，术后应该引起足够的重视。所以二者联合检测对结肠癌的预后判断有一定的价值。

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