钱草硝石颗粒提取工艺研究

范卓文，张娜，于海龙，武斌，张巍

(1.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040;2.哈尔滨市食品药品检验检测中心，黑龙江 哈尔滨 150525;3.哈药集团三精制药股份有限公司，黑龙江 哈尔滨 150069)

钱草硝石颗粒是由金钱草、石韦、海金沙、瞿麦等九味中药制成的复方制剂，具有清热化湿，利尿排石，通淋止痛，软坚散结之功效，主要用于泌尿系统结石的治疗［1］。本试验优化了水煎煮工艺参数，确定了钱草硝石颗粒的最佳提取工艺。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪(Waters1515，美国Waters公司);紫外检测器(Waters2487，美国Waters公司);电子天平(JD1000－2，沈阳龙腾电子称量仪器有限公司)。

1.2 试药

槲皮素对照品、山奈酚(山奈素)对照品(中国药品生物制品检定所);所用药材经检查，符合《中国药典》2005年版一部、卫生部药品标准或地方标准的有关各项规定。

2 方法与结果

2.1 工艺路线拟定

根据处方中各药味所含有效成分的理化性质及临床应用等特点，拟定提取制备工艺:金钱草、瞿麦、石韦、车前子、冬葵子选用水煎煮提取，本文只对此部分进行考察研究。

2.2 正交试验设计

影响水煎煮提取的因素主要有煎煮时间、加水量和提取次数，故设计对煎煮时间、加水量、提取次数三个因素，分别选择3个水平，按L9(34)正交表进行正交试验，以药材中所含有的有效成分槲皮素和山奈酚的总含量为测定指标，因素水平设计表见表1。

表1 提取因素

2.3 测定方法

色谱条件:色谱柱为 Shim－pack VP－ODS(150mm ×4.6mm，5μm);流动相:甲醇 －0.4%磷酸溶液(50∶50);检测波长:360nm;柱温:室温;流速:1.0ml/min。

2.4 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品及山奈酚对照品适量，加80%甲醇制成每1ml含槲皮素4μg、含山奈酚20μg的溶液，即得。

2.5 供试品溶液的制备 取1/30处方量的药材，按正交试验表进行试验，提取液滤过，合并，适当浓缩，定溶于200ml容量瓶中。精密量取15ml药液，精密加入甲醇10ml，盐酸5ml，置90℃水浴中加热水解1h，取出迅速冷却，转移至50ml溶量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得。

2.6 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即可。

2.7 结果与分析

试验结果见表2，方差分析结果见表3。

表2 正交试验结果

表3 方差分析表

由表3可知，C因素具有显著性意义，A、B因素差异不显著，极差A＞B，故影响试验结果的因素依次为:C＞A＞B。C因素中C3＞C2＞C1，A因素和B因素无显著性差异，为次要因素，根据节省时间的原则B因素选B1水平，A因素选A3水平。确定最佳工艺为A3B1C3，即加水量分别为12倍，10倍，10倍，煎煮3次，每次1h。

2.8 验证试验

以处方量为一份，共三份。按A3B1C3条件进行重复验证试验，槲皮素和山奈酚的总含量结果表明，该提取工艺正交优化的条件稳定、重现性好。见表4。

表4 重复验证实验结果

3 讨论

3.1 以槲皮素和山奈酚的总含量为评价指标，根据正交试验结果，确定钱草硝石颗粒最佳提取工艺为:加水量第一次为12倍，第二次和第三次分别为10倍，煎煮3次，每次1h。

3.2 从钱草硝石颗粒剂的处方组成来看，植物药材金钱草中含有槲皮素、山奈酚［2－3］;从石韦叶中亦可分离得到山奈酚、槲皮素［4］。故以槲皮素和山奈酚总含量为评价指标是合理的。

3.3 根据处方中各药味所含有效成分的理化性质及临床应用等特点，对金钱草、瞿麦、石韦、车前子、冬葵子选用水煎煮提取，浓缩干燥后与其余四味药合并制成颗粒。

［1］李均展，李刚.尿石病证治举隅［J］.中医药学报，2009，37(6):78－80.

［2］沈联德，姚福润.金钱草化学成分的研究［J］.华西药学杂志，1988，3(2):71 －75.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.一部.北京:化学工业出版社，2005:152.

［4］宋立人.现代中药学大辞典［M］.北京:人民卫生出版社，2001:552.