协日音·汤质量标准研究

李郁英高钢徐华

协日音·汤质量标准研究

李郁英1高钢2徐华2

目的建立协日音·汤的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别制剂中的苦地丁，采用高效液相色谱法测定处方中秦艽的成分龙胆苦苷。结果采用薄层色谱法鉴别制剂中的苦地丁；采用高效液相色谱法测定龙胆苦苷，在0.2104～0.7364µg范围内呈良好的线性关系，回归方程为Y=12838X+18492，r=1；平均加样回收率为99.07%（N=9，RSD=0.98%）。结论方法可行，重现性好，能准确监控该制剂的质量。

苦地丁，协日音·汤，龙胆苦苷

协日音·汤为蒙医院常用的蒙药制剂，由苦地丁、秦艽、麦冬等五味药组成，治疗由“协日”引起的各种黄疸病。为有效的控制该制剂的质量，本试验采用TLC法对处方中的苦地丁进行定性鉴别；采用HPLC，以龙胆苦苷为定量指标，建立处方中龙胆苦苷的测定方法。该标准操作简单、方法可行，重现性好，能准确监控该制剂的质量。

1 仪器与材料

岛津LC—10ATvp泵， SPD-10Avp型检测器，岛津工作站，惠普上分6010紫外分光光度仪。

苦地丁对照药材(批号:990-9401)、龙胆苦苷（110770-200308，供含量测定用）：购自中国药品生物制品检定所。协日音.汤（批号：090512、090620、090726）由包头市蒙中医院提供；模拟样（20091120）自制；甲醇为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 苦地丁薄层色谱鉴别

2.1.1 样品溶液制备：取样品5g，加丙酮30ml，超声（150W，40KHZ）处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮1ml使溶解，作为样品溶液。

2.1.2 阴性对照溶液的制备：取同工艺制备的不含苦地丁的样品4.5g，加丙酮30ml，超声（150W，40KHZ）处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮1ml使溶解，作为阴性对照溶液。

2.1.3 苦地丁对照药材溶液的制备：取苦地丁药材1g，加丙酮30ml，超声（150W，40KHZ）处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮1ml使溶解，作为对照药材溶液。

2.1.4 样品测定：吸取上述3种溶液各10µl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G簿层板上，以环己烷—丙酮（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。见图1、2。

2.1.5 试验结果：在色谱中，样品溶液在与苦地丁对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。而阴性对照溶液在此处未出现斑点；故此方法专属性强，可作苦地丁的鉴别方法。

1 2 3 41、阴性对照溶液 2、样品溶液（090726）3、苦地丁药材 4、苦地丁对照药材图1 苦地丁薄层色谱鉴别方法学研究

1 2 3 4 51、模拟样品 2、样品（090726）3、样品（090512）4、样品（090620） 5、苦地丁对照药材图2 三批样品的薄层色谱鉴别

2.2 龙胆苦苷的HPLC测定

2.2.1色谱条件:

2.2.1 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱[Agilent Tc-C18（5µ，4.6×250mm）]；流动相：甲醇—水（30：70）；检测波长：254.0nm；柱温：25℃；流速：1ml·min-1；理论板数按龙胆苦苷峰计算应不低于3000。

2.2.2 提取溶剂及提取效率的考察

2.2.3 提取溶剂的选择：参照《中国药典》2005年版一部“秦艽”项下的龙胆苦苷含量测定方法，选用甲醇作为提取溶剂。

2.2.4 提取效率的考察：以甲醇作为提取溶剂进行超声提取（功率300W,频率50kHz），为保证被测成分提取完全，实验中考察了超声提取20分钟、30分钟和40分钟不同超声提取时间对提取效率的影响， 结果：三份样品分别超声处理（功率300W，频率50KHz）30、40、50分钟后，含量基本一致。含量分别为1.055、1.104、1.099。

2.2.5 专属性

2.2.5.1对照品溶液的制备：取龙胆苦苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.5.2样品溶液的制备：取样品约2.5g，精密称定，加入甲醇20ml，超声（300W，40KHZ）处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为样品溶液。

2.2.5.3阴性对照溶液制备：取同工艺制备的不含苦地丁的样品约2.3g，精密称定，加入甲醇20ml，超声（300W，40KHZ）处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为阴性对照溶液。

2.2.5.4测定：分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、样品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，测得结果为：阴性对照色谱图中在与龙胆苦苷对照品以及供试品色谱图相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其他组分龙胆苦苷的测定无干扰。

2.2.6 线性关系考察：取龙胆苦苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，精密量取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml，分别置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10μl注入色谱仪测定。结果：在0.2104～0.7364µg浓度范围内，浓度与检测峰面积呈线性。回归方程为:Y=12838X+18492，r=1。

2.2.7 稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别在0h、4h、6h、8h、12h进行测定，其检测峰面积的RSD为0.41%，说明龙胆苦苷在12小时内的峰面积积分值基本稳定不变。

2.2.8 精密度：取样品（批号：090512）6份，每份约2.5g，精密称定，加入甲醇50ml，超声（300W，40KHZ）处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为样品溶液；另精密称取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；分别精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定。结果：6次测定的平均值为1.101mg/g，RSD为0.26%。

2.2.9 加样回收率测定：取样品（批号：090512，含量为1.101mg/g）约0.6g、0.7g、0.8g各3份，精密称定，分别精密加入龙胆苦苷对照品，加入甲醇25ml，超声（300W，40KHZ）处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为样品溶液；另精密称取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；分别精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定。结果：平均回收率为 99.07%。RSD（%）为0.98%。

2.2.10 样品含量测定：取样品约2.5g，精密称定，加入甲醇50ml，超声（300W，40KHZ）处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为样品溶液；另精密称取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；分别精密吸取10ul，注入液相色谱仪，测定。结果见表2。

2.3 讨论

在苦地丁的薄层色中，展开后立刻置紫外光灯（254nm）下检视，斑点显蓝色，放置一定时间后显黄色。参照中国药典2005年版，采用HPLC法测定样品中的龙胆苦苷；药典的方法是对样品进行热提取而本法采用超声处理，经两种方法比较试验，测得结果基本一致。该方法操作简单。

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1包头医学院职业技术学院，内蒙古包头014030

2包头市药品检验所，内蒙古包头014030