TCT联合高危型HPV-DNA检测在宫颈病变筛查中的应用

何秋玲 刘冬艳

河池市第一人民医院，广西 河池 546300

宫颈癌是女性生殖道恶性肿瘤较为常见的一种类型，早期宫颈癌患者5年治愈率高达90%，所以宫颈癌的筛查引起了医学界的广大关注[1]。现已明确HPV(Human Papilloma-Virus，HPV)感染是宫颈癌发生的主要病因[2]，TCT是采用液基薄层细胞检测目前较为先进的一种宫颈癌细胞学检查技术。本研究分别对单纯TCT组及TCT联合HRHPV-DNA组进行对照研究，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2010年1月～2011年12月在本院妇科门诊行宫颈细胞学检查者2500例，年龄 19～67岁，平均 37.7岁，无内、外科合并症及免疫系统疾病等并发症。检查原因有：体检，白带增多，性交后出血，异常阴道出血等。随机分成单纯TCT和TCT联合HR-HPV-DNA两组，两组患者平均年龄、身体健康状况等一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05),具有可比性。

1.2 研究方法

检查前3d不使用阴道内药物，不做阴道冲洗，24h内禁止性行为，并在非经期检查。

①采用 TCT行宫颈细胞学检查将特制的宫颈“细胞刷”插入宫颈管内，达宫颈外口上方10mm左右，轻轻按顺时针方向旋转5周后取出，将集有宫颈口及颈管内脱落上皮细胞的宫颈刷洗脱于保存液的小瓶中固定，且将刷头直接放入保存液的瓶中，送检。经Mono GeneM2900系统处理后，制成直径为1.5cm的薄层细胞涂片，95%酒精固定，HE染色。细胞学诊断采用TBS分类法。

②HR-HPV-DNA检测对应用荧光定量PCR（FQ-PCR）技术对宫颈分泌物进行HPV16.18-DNA定量检测，检查时用阴道窥器暴露宫颈，用无菌生理盐水棉球擦去宫颈外分泌物，再用无菌棉拭子插入宫颈内，停10 s后旋动棉拭子采集宫颈分泌物，然后将棉拭子置入无菌试管内密闭送检。采用中山大学达安基因股份有限公司荧光定量检测试剂。仪器采用国产达安DA7600荧光定量PCR仪器，严格按说明书进行实验。样本实时定量检测结果≥500拷贝判为HPV阳性。

③病理学检查阴道镜下对病变最严重处多点取材活检，如无异常，则常规取移行带第 3、6、9、12点 4处。本研究以病理组织学结果为标准∶活检异常标准为 CIN（宫颈上皮内瘤变）Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈浸润癌。

1.3 统计与处理

采用χ2检验统计分析结果。

2 结果

经检验后，检出HPV阳性或TCT检测阳性，经病理检查证实为宫颈癌前病变或宫颈癌患者的病例见表1，由表1可见：TCT联合HR-HPV-DNA组检出率明显高于单纯TCT组，差异有显著性，（P＜0.01）。

3 讨论

近年来，宫颈癌发生率明显上升，且趋于年轻化，对妇女健康生命威胁甚大。国内外学者对宫颈癌的病因进行了大量的研究3。CIN是发生在癌前期的病变，因此对CIN要高度重视并积极对症处理[3]。TCT是国际上较为先进的一种宫颈癌细胞学检查技术，与常规制片方法比较，改善了样本收集率,并使细胞均匀分布在玻片上，提高了发现鳞状上皮低度和高度病变的敏感度。人乳头瘤病毒（HPV）属嗜上皮性病毒，现已确定HPV型别有110种，目前，国内外已公认HPV感染是导致宫颈癌的主要原因。感染了高危型的HPV就可能导致子宫颈癌。宫颈鳞癌中以HPV16型感染最为常见，而宫颈腺癌中HPV18型阳性率最高。HPV-DNA检测作为初筛手段可浓缩高危人群，是宫颈病筛查最佳方法，并对检查阳性者及时治疗是逆转宫颈炎及CIN病变、防治宫颈癌的关键措施[4]。只有持续的HPV感染才会发展成为不同级别的CIN或者是宫颈癌。如果细胞学和高危型HPV-DNA检测均为阴性者，表明其发病风险很低，可将筛查间隔延长到8～10年，细胞学阴性而高危型HPV阳性者发病风险较高，应定期随访[5]。高危型HPV-DNA检测均为阳性、细胞学阳性，或仅细胞学阳性者，均应行阴道镜检查及宫颈多点活组织检查。国内外开始将检测高危型HPV-DNA作为宫颈癌的一种筛查手段[5]。尽管TCT能提高宫颈细胞学的敏感度及减少假阴性，但由于脱落细胞与活体细胞的特征不完全相同，无组织结构，故脱落细胞不能作为最后的诊断依据。Olanyan[6]认为单独细胞学筛查宫颈病变是不够的。同样，单一的HPV-DNA检测显然有不足之处。本文资料显示，TCT联合HR-HPV-DNA法检出阳性结果与病理学符合率（94.87%）比单纯TCT法（81.46%）高，与朱晓琴[7]相近。因此，TCT联合HR-HPV-DNA法检测是一种先进的且可提高宫颈病变的阳性检出率最佳方案，值得推广。

表1 两组宫颈癌前病变或宫颈癌检测情况

[1]江俐.TCT联合HPV检测在诊断子宫颈疾病中的应用[J].医学研究杂志,2008,37(1)∶124.

[2]廖丹梅,黄明春,李惠珍,等.TCT联合 HPVDNA检测在宫颈病变中的诊断价值 [J].广西医科大学学报,2008,25(1)∶59.

[3]袁新荣，李红薇.TCT、HR－HPV检测及宫颈活检在宫颈早期病变中的诊断价值[J].中国医药导报，2007，4(14)∶13.

[4]来菊英.辛复宁治疗女性生殖道HPV感染临床研究[J].中国现代应用药学杂志，2008，25(8)∶786.

[5]乐杰.妇产科学[M].第7版.北京∶人民卫生出版社,2008∶408-409.

[6]Hesselink AT,Berkhor J,Heideman DA,et al.High-risk Human papillomavirus DNA load in a population-based cervical screening cohort in relation to the detection of high-grade cervical intraepithelial neoplasia and cervical cancer[J].Int J Cancer,2009,124∶381-386.

[7]朱晓琴.TCT联合HPV DNA检测对宫颈癌诊断的临床意义[J].齐齐哈尔医学院学报，2011,32(1)∶19.