结肠腺癌组织中COX－2和PTEN蛋白表达与临床病理特征的相关性分析

李 璐 李 琛 吴民华

（广东医学院组织学与胚胎学教研室，湛江524023；1广东医学院附属医院检验科，湛江524001）

研究表明，多种肿瘤中存在环氧化酶－2（Cyclooxy genase－2，COX－2）与磷酸酶和张力蛋白同源物基因（phosphatase and tension homology detected onchromosome ten，PTEN）的表达异常，其表达与肿瘤的发生、发展有着密切的关系。本研究旨在分析COX－2和PTEN在结肠癌中的表达情况，探讨两基因表达与临床病理因素的关系，为结肠癌早期诊断、治疗以及预后评估提供实验依据。

材料和方法

1.一般资料

收集2010年1月至2012年4月在我校附属医院因结肠癌而行根治手术切除的组织标本56例，术后均在本院病理科诊断为结肠腺癌。病例包括男39例、女17例；年龄35－81岁，平均（59.2±6.4）岁；所有患者术前均未行放化疗及免疫治疗。结肠癌Duke分期：A期9例，B期17例，C期27例，D期3例；组织学分级：高分化17例，中分化27例，低分化12例；淋巴结转移39例。同期在该院内镜室行结肠镜下活检15例非肿瘤结肠黏膜组织作为对照。

2 免疫组化方法

COX－2兔抗人单抗、PTEN鼠抗人单抗、S－P染色试剂盒和DAB试剂盒均购自北京中山生物技术公司。采用免疫组织化学SP法，简述如下：4μm切片脱蜡水化，高压锅抗原修复3min，自然冷却。切片加入3%过氧化酶阻断剂10分钟，PBS液洗。加入一抗室温孵育30min，PBS液洗。加入二抗室温孵育15min，PBS液洗。DAB显色，苏木素复染，封片。以PBS替代一抗做阴性对照。

3 染色结果判断

COX－2棕黄色颗粒主要位于胞质或核周，PTEN棕黄色颗粒位于胞质或胞核。采用染色强度和阳性细胞百分比半定量方法进行评判。染色强度评分标准：细胞未着色为0分、染色部位呈浅黄色为1分、染色呈棕黄色为2分、染色呈棕褐色为3分。阳性细胞百分率评分标准：阳性细胞小于5%为0分、5%－25%为1分、26%－50%为2分、51%－75%为3分、大于75%为4分。结果判定：染色强度评分与阳性细胞百分率评分的乘积5分以上者判为阳性，4分及4分以下者判为阴性。

4 统计学处理

采用SPSS17.0统计学软件，两基因表达与各病理因素的相关性采用χ2检验，两个基因之间表达关系采用spearman相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

1.COX－2和PTEN在结肠腺癌中的表达

COX－2定位于胞浆或核周，PTEN定位于胞浆或胞核，见图1。COX－2、PTEN在结肠腺癌组织中阳性表达率分别为82.14%（46／56）、51.79%（29／56），正常结肠黏膜组织中COX－2和PTEN阳性表达率分别为13.33%（2／15）、100.00%（15／15）。结肠腺癌中COX－2、PTEN表达率与正常结肠黏膜组织的表达率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.结肠癌组织中COX－2和PTEN表达的相关性

56例结肠癌组织中，COX－2和PTEN同时阳性表达者20例（35.7%），同时阴性表达者1例（1.8%），仅COX－2表达者26例（46.4%），仅 PTEN表达者9例（16.1%），COX－2和PTEN表达呈明显负相关（r＝－0.357，P＝0.007）。

2.COX－2、PTEN表达与结肠癌临床病理特征间的关系

COX－2及PTEN的表达与结肠腺癌Duke分期和有无淋巴结转移有关，而与性别、年龄和组织学分型无明显相关。见表1。

图1 A.COX－2在结肠癌中的阳性表达（SP法×200）； B.PTEN在结肠癌中的阳性表达（SP法×200）；Fig.1A：Positive expression of COX－2 in colon adenocarcinoma（SP method×200）Fig.1B：Positive expression of PTEN in colon adenocarcinoma（SP method×200）

讨 论

恶性肿瘤的发生和发展是一个多因素、多阶段和多基因的多步骤变化过程。研究表明，COX－2和PTEN在调节肿瘤细胞的生长、分化、凋亡、浸润和转移等各方面均起了重要作用［1－2］。

COX－2是花生四烯酸分解过程中的重要限速酶，细胞受到各种刺激因素时可迅速合成，涉及多种病理生理变化［3］。研究表明，COX－2参与了多种恶性肿瘤的发生与发展［4－5］。本研究结果显示 COX－2在结肠腺癌组织中高表达，其表达与患者性别、年龄和组织学分级无明显相关，但在Duke分期C、D组及淋巴结转移组中表达明显增高，表明COX－2对结肠腺癌的局部侵袭和远处转移具有促进作用，与文献报道一致［6－7］。

PTEN是一种具有双特异性磷酸酯酶活性的抑癌基因，可使3，4，5－三磷酸磷脂酰肌醇（PIP3）去磷酸化，抑制PI3K／Akt通路，从而阻断了Akt及其下游激酶的活性，抑制细胞增殖、迁徙和黏附，促进细胞凋亡［8］。本研究结果显示PTEN在结肠腺癌组织中表达明显低于正常结肠组织，PTEN蛋白表达与性别、年龄和组织学分型无明显相关，而与Duke分期和淋巴结转移呈负相关，表明PTEN的表达缺失与结肠腺癌的的发生发展及侵袭、转移有着密切的关系。

本研究结果显示，结肠腺癌组织中PTEN与COX－2呈明显负相关，有研究认为PTEN可能通过调控Akt通路抑制了COX－2的表达，当PTEN缺失时，Akt通路上调，COX－2的表达则明显增高［9］。PTEN和COX－2可能协同参与了结肠癌的发生和发展过程，PTEN表达缺失和COX－2的高表达预示肿瘤组织侵袭和转移能力增强。

综上所述，结肠癌组织中COX－2和PTEN异常表达与肿瘤的发生发展、浸润和转移有关，两者之间存在调控机制，两指标联合检测有助于结肠癌的早期诊断及预后判断。

［1］Li P，Zhang ST，Yu ZL，et al.Effects of cyclooxygenase－2 non－selective and selective inhibitors on proliferation inhibition and apoptosis induction of esophageal squamous carcinoma cells.Dis Esophagus，2009，22（1）：21－31

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［3］Menczer J.COX－2 expression in ovarian malignancies：a review of the clinical aspects.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2009，146（2）：129－132

［4］Wang D，Dubois RN.The role of COX－2 in intestinal inflammation and colorectal cancer.Oncogene，2010，29（6）：781－788

［5］Sharma－Walia N，Paul AG，Bottero V，et al.Kaposi＇s sarcoma associated herpes virus（KSHV）induced COX－2：a key factor in latency，inflammation，angiogenesis，cell survival and invasion.PLoS Pathogens，2010，6（2）：e1000777

［6］王淑强，李秀娟，李鹏等.COX－2基因在大肠癌的表达及其意义.中国老年学杂志，2010，30（12）：1638－1639

［7］邬黎青.大肠癌组织 VEGF－C，COX－2，Flt－4及nm23表达与淋巴管生成及淋巴结转移的关系.细胞与分子免疫学杂志，2010，26（6）：597－598

［8］谢文君，李晓虹，付天红等.大肠癌组织中PTEN蛋白的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系.中国药物与临床，2012，12（1）：46－47

［9］Covey TM，Edes K，Fitzpatrick FA.Akt activation by arachidonic acid metabolism occurs via oxidation and inactivation of PTEN tumor suppressor.Oncogene，2007，26（39）：5784－5792