高效液相色谱法测定复方樟脑搽剂中苯酚的含量

谷 娜，郭胜才

复方樟脑搽剂为医院制剂，用于夏季皮炎、痱子、瘙痒等症。其主要成分为樟脑、苯酚等。苯酚在常温下不稳定(易氧化和挥发)，为保证制剂的质量和疗效，有必要在制备和储存过程中控制其含量。该制剂的质量标准中无含量测定项，且文献中苯酚的鉴别检验方法不灵敏、操作不方便，难以得出呈正反应的结果［1-2］。本文参考有关文献［3］，利用高效液相色谱法测定制剂中苯酚的含量，该方法简单、操作方便，结果准确、可靠，重现性好，可作为该制剂的含量测定方法和质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 惠普1100系列高效液相色谱仪(包括脱气机、四元泵、光电二极管阵列检测器和色谱工作站);FA(N)/JA(N)电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司)。

1.2 试药 苯酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号:200902，含量99.90%)，甲醇为一级色谱纯，水为纯净水，复方樟脑搽剂为本院自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:ZORBAX Eclips XDB-C18(4.6 mm ×200 mm，5 μm);流动相:甲醇-水(70∶30);流速:0.8 mL/min;柱温:室温;检测波长:270 nm，进样量:20 μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取苯酚对照品45.12 mg，置100 mL量瓶中，用无水甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液。精密量取储备液1 mL，置10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，制得45.12 μg/mL的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取样品溶液1 mL，置 50 mL 量瓶中，用甲醇-水(70∶30)溶液稀释至刻度，再精密量取此稀释液1 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇-水(70∶30)溶液稀释至刻度，作为供试品溶液。

2.3 专属性考察 按所测样品的处方组成配制不含苯酚的空白溶液，按文中所述含量测定方法操作，结果空白溶液色谱图中与苯酚对照品相同保留时间处，未出现相应的色谱峰，表明样品中其他成分对苯酚测定无干扰。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪测定。结果表明，理论塔板数以苯酚计大于11 500，色谱峰峰形良好，保留时间适中。液相色谱图见图1。

2.4 标准曲线制备 精密量取对照品溶液0.10、0.25、0.5、1.0、1.5、2.5 mL，分别置10 mL 量瓶中，用流动相稀释至刻度，制备成苯酚系列标准溶液，按上述条件进样，测定峰面积，以峰面积为纵坐标、苯酚浓度为横坐标，进行线性回归。结果显示，苯酚在4.51～112.8 μg/mL范围内线性关系良好，其回归方程为:A=19.786 7 C+0.063 2，r=0.999 9。

2.5 精密度试验 取浓度均为0.045 mg/mL的苯酚对照品的混合溶液，连续进样5次，记录峰面积，计算相对标准差，苯酚的RSD为0.53%(n=5)。

图1 空白溶液(A)、苯酚(B)和样品(C)的色谱图注:1.苯酚(phenol)

2.6 重现性试验 精密量取同一批供试品溶液(批号:20110323)5份，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备，依法测定，计算相对标准差，结果苯酚的RSD为0.65%，表明此方法的重现性良好。

2.7 稳定性试验 取同一批供试品溶液(批号:20110323)，按供试品溶液制备方法制备，室温放置，分别于 0、2、4、6、8 h 时取 20 μL 进样，测定苯酚的峰面积，计算相对标准差，结果苯酚的RSD为0.88%(n=5)，表明主药成分在8 h内稳定。

2.8 加样回收试验 精密量取已知含量的供试品(批号:20110323)溶液1 mL，置50 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，再精密量取此稀释液1.0 mL，置 20mL量瓶中，分别精密加入0.451 2 mg/mL苯酚对照品溶液 0.7、0.9、1.1 mL，加流动相至刻度，照样品测定项下测定，每个浓度水平平行做3次。结果平均加样回收率(n=3)为99.93%，RSD为0.89%。苯酚的3个浓度水平的平均回收率和相对标准差见表1。

表1 回收率测定结果(n=9)

2.9 样品含量测定 按“2.2”项配制对照品溶液及复方樟脑搽剂的供试品溶液，按“2.1”项色谱条件进行测定，外标法以色谱峰面积计算含量，即得。测定了3批复方樟脑搽剂溶液样品，结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1 检测波长的选择 对苯酚的对照品溶液进行紫外光谱扫描，结果表明，苯酚在270 nm波长处有最大吸收，且无其他物质对测定的干扰。故选用270 nm作为色谱实验的检测波长。

3.2 流动相的选择 在实验中考察了流动相组成及配比对苯酚的分离度、色谱峰形和出峰时间的影响，发现甲醇-水比例为 70∶30，流速为0.8 mL/min时苯酚的色谱峰形良好，保留时间适宜，经对流动相中甲醇和水的不同比例的考察，发现在此配比下保留时间最为适宜，故选用此流动相配比和流速。

高效液相色谱法测定制剂中的苯酚含量，一些文献采用甲醇-醋酸盐缓冲液系统［4-5］。用盐类缓冲溶液作流动相，易引起色谱系统堵塞，色谱柱寿命下降。本试验发现，用甲醇与水混合作流动相，不加缓冲溶液，完全能满足对样品的分析测试要求，而且操作简单。本方法操作简便，结果准确可靠，灵敏度高，重现性好，已应用于复方樟脑搽剂的含量测定、稳定性考察和质量控制，结果满意。

［1］ 中国人民解放军总后勤部卫生部.中国人民解放军医疗机构制剂规范［S］.北京:人民军医出版社，2002:130，133.

［2］ 陈新善，姜春来，车慧.复方樟脑搽剂中苯酚鉴别方法改进［J］.解放军药学学报，2005，21(6):480.

［3］ 荆凡波，程显隆，马双成，等.高效液相色谱法测定复方硼砂溶液中苯酚的含量［J］.药物分析杂志，2010，30(1):155-156.

［4］ 毛桂福.HPLC法测定水杨酸苯酚洗剂中苯酚和水杨酸的含量［J］.药学实践杂志，2005，23(4):226-227.

［5］ 刘道平，金克宁，葛新.HPLC测定水杨酸苯酚搽剂中水杨酸及苯酚的含量［J］.华西药学杂志，2005，20(4):355-356.