冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清同型半胱氨酸与氧化高密度脂蛋白水平及其相关性研究

赵新秀，王仁萍，胡 松，贾韵平，毛拥军

冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)是威胁人类健康的主要疾病之一，目前对其危险因素的探寻和防治已成为预防该疾病的重要手段。作为惟一保护因素的血脂指标高密度脂蛋白(HDL)一旦发生氧化反应生成氧化高密度脂蛋白(OX-HDL)，便将丧失逆转胆固醇的作用，并可通过凝血、血小板聚集等多种途径促进动脉平滑肌细胞(SMC)增加，从而加速动脉粥样硬化[1-2]，因此OX-HDL成为CAD患者不可忽视的血脂监测指标。另外，血清同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)可通过多种机制导致动脉粥样斑块形成，是近年来研究较活跃的新的CAD事件评估危险因素[3]。目前国内外对于CAD血清Hcy与OX-HDL水平之间关系的研究甚少。本研究以CAD患者为研究对象，探讨血清Hcy与OX-HDL的水平及二者的相关性。

1 对象与方法

1.1 研究对象 (1)采用分层随机抽样方法，抽取2012年6月—2013年6月青岛大学医学院附属医院特需保健科、心内科行冠状动脉造影被确诊为CAD的患者115例为CAD组，按WHO诊断标准中典型的临床表现、心电图、心肌酶学等检查结果严格筛选患者；其中男65例，女50例；平均年龄(73.3±2.3)岁。选择冠状动脉造影正常者38例为对照组，其中男24例，女14例；平均年龄(69.3±11.9)岁。CAD组与对照组的性别构成、年龄比较，差异无统计学意义(χ2=0.517，P=0.300；t=0.93，P=0.350)。(2)依据2006年美国心脏协会(AHA)推荐，将血清Hcy水平>10 μmol/L定义为高同型半胱氨酸，将CAD患者分为Hcy正常组(28例)与Hcy异常组(87例)。Hcy正常组男17例，女11例；平均年龄(71.2±1.8)岁。Hcy异常组男48例，女39例；平均年龄(72.6±7.5)岁。Hcy正常组与Hcy异常组的性别构成、年龄比较，差异无统计学意义(χ2=0.265，P=0.386；t=1.12，P=0.270)。研究对象均签署知情同意书，并排除急慢性感染、血液系统疾病、恶性肿瘤、脑血管疾病、肝肾功能不全、自身免疫性疾病及服用激素等免疫抑制剂和维生素类药物者。

1.2 研究方法 患者于入院次日清晨空腹10 h后抽取肘静脉血2 ml，置于血清管中，以3 000 r/min离心15 min，离心半径为13.5 cm，离心后取血清，并用离心管分装置于-80 ℃冰箱中贮存待用。采用罗氏日立7600全自动生化分析仪测定血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、脂蛋白a(LP-a)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、尿酸(UA)、叶酸(FA)及维生素B12(VitB12)水平；血清Hcy、OX-HDL水平测定则采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒，严格按照说明书操作。

2 结果

2.1 两组Hcy与OX-HDL水平的比较 CAD组血清Hcy、OX-HDL水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05,见表1)。

2.2 Hcy正常组与Hcy异常组血脂指标水平的比较 Hcy异常组HDL水平低于Hcy正常组，OX-HDL、LDL水平高于Hcy正常组，差异均有统计学意义(P<0.05)；而两组的TG、TC、LP-a水平比较，差异无统计学意义(P>0.05，见表2)。

2.3 CAD患者Hcy、OX-HDL的秩相关分析 分别以Hcy和OX-HDL为因变量，FA、VitB12、TC、TG、UA、HDL、LDL为自变量进行Spearman秩相关分析，结果显示CAD组Hcy与FA、VitB12呈负相关，OX-HDL 与FA呈负相关(P<0.05，见表3)；同时对Hcy、OX-HDL做相关性分析，结果显示Hcy与OX-HDL呈正相关(r=0.772，P=0.000，见图1)。

表1 两组 Hcy与OX-HDL水平的比较〔M(QR)〕

注:CAD=冠状动脉粥样硬化性心脏病，Hcy=同型半胱氨酸，OX-HDL=氧化高密度脂蛋白

表2 Hcy正常组与Hcy异常组血脂指标水平的比较〔M(QR)〕

注：TG=三酰甘油，TC=总胆固醇,LP-a=脂蛋白a，HDL=高密度脂蛋白，LDL=低密度脂蛋白

表3 CAD患者Hcy、OX-HDL的秩相关分析

注：FA=叶酸,VitB12=维生素B12，UA=尿酸

图1 CAD患者血清Hcy与OX-HDL水平的相关性散点图

Figure1 Scatter plot of correlation between serum Hcy and OX-HDL levels in CAD patients

2.4 CAD影响因素的多因素Logistic回归分析 采用多因素Logistic回归分析，以CAD为因变量，年龄、性别、体质指数(BMI)、2型糖尿病病史、高血压病史OX-HDL、Hcy、UA、TG、TC、HDL、LDL、LP-a为自变量，采用逐步法筛查CAD的影响因素。结果显示高血压病史、OX-HDL、Hcy是CAD发生的危险因素(见表4)。

3 讨论

Hcy通过氧化应激使血管内皮功能发生障碍，直接导致血管内皮损伤。此外,Hcy还可促使血管平滑肌细胞增殖,促进炎性反应，增加血小板的黏附性和聚集性,促进血栓的发生和血管钙化，导致凝血和纤溶异常等[4]；其还可通过促进血脂紊乱导致动脉粥样硬化。Hcy含有活性巯基，可形成二硫键使许多蛋白质分子在

表4 CAD影响因素的多因素Logistic回归分析

注：BMI=体质指数

内质网内发生错误折叠，从而使蛋白质分子不能顺利地从内质网转运至高尔基复合体，也就不能分泌到细胞表面，而在内质网中大量聚集造成应激状态，而内质网应激可加剧心脑血管细胞脂质调节紊乱。用氧化型HDL单克隆抗体或串联质谱法，均可在人体动脉粥样硬化斑块和CAD患者的血清中检测到OX-HDL[5]。本研究OX-HDL的测定采用ELISA试剂盒，对照组和CAD组的OX-HDL水平分别为125.64(48.00)μg/L和198.29(48.38)μg/L，与Nakajima等[6]人的研究结果近似。体外试验发现OX-HDL可减少巨噬细胞、成纤维细胞、SMC中胆固醇的流出，并抑制其与HDL受体连接，与天然HDL相比，OX-HDL可使巨噬/泡沫细胞内胆固醇及胆固醇酯的堆积增加[7]。另外OX-HDL还能通过凝血、纤溶、血小板聚集和活化途径加速血栓形成、促进SMC增殖、发生炎性反应、导致内皮细胞损失[8]，从而加速动脉粥样硬化的形成。本研究结果显示，CAD组血清Hcy、OX-HDL水平均高于对照组，且多因素Logistic回归分析结果显示Hcy、OX-HDL是CAD发生的危险因素。提示Hcy与OX-HDL可通过炎性反应、氧化应激、内皮损伤、凝血异常等机制参与动脉粥样硬化的形成。

研究证实，LDL在体内可被多种机制氧化修饰，促进动脉粥样硬化的发生[4]。如血液循环中的Hcy发生自身氧化产生活性氧(ROS)，抑制NO的合成及其生物利用度[9]，使细胞膜上的LP-a发生氧化反应，导致LDL被氧化成OX-LDL，OX-LDL被巨噬细胞吞噬，从而加速细胞内胆固醇的聚集和泡沫细胞的形成[10]。近年来国内外研究发现具有抗动脉粥样硬化作用的HDL同LDL一样能被体内外多种因素如脂加氧酶、髓过氧化物酶、超氧阴离子、NO、内皮细胞、巨噬细胞等氧化修饰，形成OX-HDL后不但丧失抗动脉粥样硬化作用，反而有致动脉粥样硬化的作用[11]。有研究者采用同位素稀释液相质谱/串联质谱研究发现，人动脉粥样硬化病变存在OX-HDL，在CAD患者粥样病变内，HDL的 3-氯络氨酸、3-硝络氨酸[12-13]和氨甲酰赖氨酸[14]水平高于HDL水平，表面髓过氧化物酶(MPO)氧化人动脉壁内的HDL。为探讨HDL能否像LDL一样被Hcy氧化成OX-HDL，本研究搜集115例CAD患者血清，检测Hcy、OX-HDL水平并最终得出二者呈正相关，但其相关性是否能证明Hcy是致动脉粥样硬化的机制之一及其具体机制还有待通过动物实验深入研究。同时本研究发现，CAD组Hcy与FA、VitB12呈负相关。OX-HDL 与FA呈负相关，提示补充FA、维生素对于降低Hcy、OX-HDL水平存在一定作用，但其具体机制还有待于进一步研究。

综上所述，血清Hcy、OX-HDL是CAD的危险因素，可发挥疾病诊断和病情评估作用，并且二者在CAD中存在相关性，可为今后探究OX-HDL的产生及致病机制提供线索。另外，熊向晖[9]和戴瑞等[10]的相关研究得出Hcy与冠状动脉病变严重程度相关，因此，对于今后的研究还有待于采用Gensini积分评价冠状动脉病变程度，比较不同Gensini积分患者血清Hcy水平，探讨Hcy水平评价动脉粥样硬化斑块稳定性及疾病严重程度的价值。本研究由于从外周静脉采血，可能不能充分反映CAD患者冠状动脉内各类因子的变化，如果经冠状窦采血可能更为准确；并且由于观察时间较短，样本量不足，故今后将进一步扩大样本量进行深入研究；鉴于研究对象为CAD患者且为研究初级阶段，因此尚待进行Hcy、OX-HDL的相关因子受体拮抗剂干预试验。

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