HPLC法同时测定没食子提取物中没食子酸、没食子酸甲酯和没食子酸乙酯的含量

沈 华，王 正，李 蕾，郦红岩

（江苏吉贝尔药业有限公司，江苏镇江212009）

HPLC法同时测定没食子提取物中没食子酸、没食子酸甲酯和没食子酸乙酯的含量

沈 华，王 正，李 蕾，郦红岩

（江苏吉贝尔药业有限公司，江苏镇江212009）

目的建立高效液相色谱法测定没食子提取物中三种成分的含量方法。方法色谱柱：Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：甲醇－水（25∶75）（冰乙酸调pH至4.5）；流速为1.0 mL·min－1，柱温：30℃，检测波长：273 nm。结果没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯的回收率分别为99.79%、99.60%、99.45%；线性范围分别为0.2～3.2μg、0.002～0.16μg、0.010 8～0.54μg。结论结果准确，重复性好，可用于该产品的质量控制。

没食子提取物；没食子酸；没食子酸甲酯；没食子酸乙酯；含量测定；高效液相色谱法

没食子为壳斗科植物没食子树Quercus infectoria Olivier幼虫上由没食子蜂Cynipegallae－Tinctoriae Olivier寄生而形成的虫瘿，于成虫未逸出时采集。具有固气、涩精、敛肺、止血之功效。用于大肠虚滑，泻痢不止，便血，遗精，阴汗，咳嗽，咯血，齿痛，创伤出血，疮疡久不收口［1］。现代研究表明没食子虫瘿含土耳其没食子鞣质、没食子酸及并没食子酸、树脂等［2］，临床研究表明没食子具有抗菌、抗病毒，抗肿瘤等作用。本文参考相关文献［3～5］，采用高效液相色谱法对没食子提取物中的没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯进行测定，能够有效控制产品质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪，LC－20AT泵，SPD－20A紫外检测器（日本岛津公司）；RE－2000A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；Sartorius ALC－110.4电子天平（德国赛多利斯公司）；KQ－500DE数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；L－550离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；PHS－3C pH计（上海理达仪器厂）；HH－S恒温水浴锅（江苏金坛市医疗仪器厂）。

1.2 试药 没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110831－201204，供含量测定用）；没食子酸甲酯、没食子酸乙酯标准品（购自上海时代生物科技有限公司）；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。没食子提取物购自西安某生物科技公司（批号为120402、120501、120503）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：甲醇－水（25∶75）（冰乙酸调pH至4.5）；流速：1.0 mL·min－1；进样量：20μL；检测波长：273 nm；柱温：30℃。理论板数按没食子酸峰计算应不低于3 000，色谱图见图1。

2.2 对照品溶液与供试品溶液的制备 精密称取没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯对照品适量，加流动相制成每1 mL含没食子酸46μg、没食子酸甲酯70μg、没食子酸乙酯48μg的混合溶液，摇匀，作为对照品溶液。

取没食子提取物约0.5 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加石油醚（60～90℃）30 mL，加热回流30 min，弃去石油醚液，药渣挥干，加甲醇30 mL，加热回流30 min，滤过，滤渣再用甲醇30 mL，同法提取2次，合并滤液，减压回收溶剂，残渣用流动相溶解，转移至25 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL，置100 mL量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 线性关系的考察 精密称取没食子酸对照品0.025 0 g，于50 mL量瓶中，加流动相制成每1 mL含500μg的对照品溶液，分别精密吸取该对照品溶液1、3、5、9、16 mL，于50 mL量瓶中，加流动相定容至刻度，作为没食子酸对照品溶液。

精密称取没食子酸甲酯0.002 5 g，于100 mL量瓶中，加流动相制成每1 mL含25μg的对照品溶液，分别精密吸取0.2、4、6、10、16 mL，于50 mL量瓶中，加流动相定容至刻度，作为没食子酸甲酯对照品溶液。

精密称取没食子酸乙酯0.005 4 g，于100 mL量瓶中，加流动相制成每1 mL含54μg的对照品溶液，分别精密吸取0.5、2、5、10、25 mL，于50 mL量瓶中，加流动相定容至刻度，作为没食子酸乙酯对照品溶液。

标准曲线的绘制：精密吸取不同浓度的对照品溶液注入液相色谱仪，以进样量（μg）为横坐标（X），以峰面积积分值A为纵坐标（Y），进行线性回归绘制标准曲线，计算得回归方程，见表1。结果表明没食子酸在0.2～3.2μg、没食子酸甲酯在0.002～0.16μg、没食子酸乙酯在0.010 8～0.54μg范围内呈良好的线性关系。

表1 对照品的标准曲线

图1 HPLC色谱图

2.4 精密度试验 精密吸取同一浓度对照品溶液，依法测定，连续进样6次，测定峰面积，其精密度良好，没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯的RSD分别为1.98%、1.73%、1.65%。

2.5 稳定性试验 取同一样品供试液，分别在0、2、4、8、12、24 h测定峰面积，其RSD分别为2.21%、2.03%、1.96%，表明样品在24 h内具有良好的稳定性。

2.6 重复性试验 取同一批样品分别精密称取6份，依法处理，测定，结果样品中没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯的平均含量分别为81.3、5.2、72.1 mg·g－1，RSD分别为2.11%、1.89%、1.78%。2.7 回收率试验 精密称取已知含量的样品（批号：120402）6份约0.5 g，分别加入没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯对照品溶液，按“供试品溶液制备”项下的方法依法处理，得供试品溶液。依法测定，结果见表2。

2.8 样品测定 分别精密称取不同批次的没食子提取物样品，按供试品溶液制备方法制备，如法测定，结果见表3。

Simultaneous determ ination of gallic acid，methyl gallate and ethyl gallate from gallnut extracts by HPLC

SHEN Hua，WANG Zheng，LILei，LIHong-yan
（Jiangsu Jibrier Pharmaceutical Co.，Ltd.，Zhenjiang 212009，China）

ObjectiveTo establish amethod for the simultaneous determination of gallic acid，methyl gallate and ethyl gallate from gallnut extracts.M ethodsHPLCwas used to quantitative analysis.The Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm，5μm）was used，and mobile phase was composed ofmethanol－water（25∶75）（adjust pH to 4.5 with acetic acid）.The detection wavelength was273 nm at30℃.The flow ratewas1.0mL·min－1.ResultsThe gallic acid，methyl gallate and ethyl gallate′s spotting recovery were 99.79%，99.60%，99.45%，and the linear ranges were 0.2～3.2μg，0.002～0.16μg，0.010 8～0.54μg，respectively.ConclusionThe results were accurate and the reproducibility was good.The method can be used for the quality control of the product.

Gallnut extracts；Gallic acid；Methyl gallate；Ethyl gallate；Determination；HPLC

R927.2

A

2095－5375（2014）11－0631－003

沈华，女，研究方向：药品生产、生产工艺以及产品质量控制，E－mail：shua5330＠163.com

郦红岩，男，研究方向：新药制剂及质量标准，Tel：0511－88888404，E－mail：lhy707＠126.com