气相色谱法测定破壁灵芝孢子粉类保健食品中8种残留溶剂

高文超，李启艳，咸瑞卿，于海英，王小兵

（山东省食品药品检验研究院，山东济南250101）

气相色谱法测定破壁灵芝孢子粉类保健食品中8种残留溶剂

高文超，李启艳，咸瑞卿，于海英，王小兵

（山东省食品药品检验研究院，山东济南250101）

目的建立直接进样气相色谱法测定破壁灵芝孢子粉类保健食品中8种有机溶剂残留量。方法采用Agilent DB－624（30 m×0.53 mm，0.3μm）毛细管柱，氢火焰离子化检测器，柱温箱程序升温，对破壁灵芝孢子粉类保健食品中甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、苯、正丁醇、二乙烯基苯的残留量进行检测。结果8种残留溶剂在19 min内得到较好分离。各残留溶剂在0.003 4～4.505 0 mg·mL－1范围内线性良好，相关系数均大于0.999 7。各残留溶剂的回收率在93.00%～117.91%。结论该方法简便、快速、准确，适用于检测破壁灵芝孢子粉中8种有机溶剂的残留。

直接进样气相色谱法；溶剂残留；破壁灵芝孢子粉

灵芝孢子（Ganoderma Lucidum Spore）是灵芝的生殖细胞，灵芝生长成熟后从菌盖弹射出来的颗粒。灵芝孢子粉具有灵芝的全部遗传活性物质，富含蛋白质和氨基酸类、糖肽类、三萜类物质［1］。近几十年来的科学研究表明，灵芝孢子粉具有抗肿瘤、免疫调节、保肝和降血糖等功能。市场对灵芝孢子粉的需求也越来越多。灵芝孢子的孢壁是由几丁质和葡聚糖两种成分构成的两层结构，质地坚硬，不易被人体消化吸收［2］。目前普遍采用生物法、化学法、物理法、机械法和综合法［3］进行破壁处理。其中化学法包括溶剂浸泡，酸、碱降解等方法，以达到破壁效果，而溶剂浸泡后可能会有溶剂残留在灵芝孢子粉中。目前国内尚无关于破壁灵芝孢子粉中溶剂残留检测的报道。本文建立了直接进样气相色谱法同时检测破壁灵芝孢子粉中8种有机溶剂残留的方法，结果表明该方法快速、准确、分离度良好、精密度高，适用于破壁灵芝孢子粉类保健食品中残留溶剂的检测。

1 仪器与试剂

Agilent 7890A气相色谱仪（配置FID；Agilent ChemStations软件）；Mettler Toledo MS电子天平；甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、苯、正丁醇、二乙烯基苯均为色谱纯；溶剂N，N－二甲基甲酰胺（DMF）为色谱纯；实验用水为超纯水。灵芝破壁孢子粉为5个不同厂家产品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Agilent DB－624毛细管柱（30 m× 0.53 mm，0.3μm）；载气为高纯氮气（≥99.99%），恒压模式；进样口温度：200℃，检测器温度为230℃；氢气流速：30 mL·min－1，空气流速：400 mL·min－1，尾吹流速：28mL·min－1；柱温升温程序：50℃为初始柱温，保持10 min，再以30℃·min－1的升温速率升至200℃，保持4 min，最后以30℃·min－1的降温速率使柱温降至50℃，并保持2 min。进样量：1.0 μL；分流比为10∶1。

2.2 溶液的配制

2.2.1 标准储备液的配制 分别精密称取甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、苯、正丁醇、二乙烯基苯，置100 mL量瓶中。用N，N－二甲基甲酰胺稀释至刻度，作为标准储备液；其中，甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、苯、正丁醇、二乙烯基苯的浓度分别为3.953 0、3.955 0、3.935 2、3.437 7、4.491 5、4.400 6、4.055 0、4.505 0 mg·mL－1。

2.2.2 标准曲线溶液的配制 分别精密量取标准储备液0.01、0.04、0.2、1、2、10 mL，置10 mL量瓶中，加N，N－二甲基甲酰胺至刻度，作为标准曲线溶液，精密量取1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，典型色谱图见图1。

2.2.3 供试品溶液的配制 精密称取混匀后的灵芝破壁孢子粉，每份约1.0 g，于10 mL具塞比色管中，加溶剂N，N－二甲基甲酰胺8 mL，超声提取15 min，冷却后用溶剂定容至刻度，摇匀，进样前样品用0.45μm有机滤膜滤过，精密量取续滤液1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，以标准曲线定量，典型色谱图见图1。

2.3 线性范围及标准曲线 将“2.2.2”项下所配溶液按顺序进样，以峰面积（A）对试样浓度（C）进行线性回归，结果见表1。二乙烯基苯的峰面积为四种同分异构体峰面积之和。

2.4 回收率试验 取破壁灵芝孢子粉0.5 g，精密称定于10 mL比色管中，平行制备9份。精确加入“2.2.2”项下标准曲线第5点的溶液50、100、500 μL，每个浓度3份，按供试品处理方法处理，进样气相色谱仪。以各组分峰面积求得浓度，计算回收率，结果见表2。二乙烯苯回收率按四种同分异构体峰面积加和计算。

图1 DMF溶剂气相色谱图

表1 残留溶剂的线性关系

2.5 检出限测定 分别精密称取甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、苯、正丁醇、二乙烯基苯适量，于容量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺溶解并稀释成适宜浓度的溶液。用相同气相色谱条件测定，S／N＝3时作为检出限，检出限依次为0.3、1.2、1.2、1.2、1.3、0.3、1.2、0.3 ng。

表2 回收率测定结果

2.6 样品测定 实验中选用了5批不同厂家的产品进行测定。其中5批均检出甲醇和乙醇，甲醇含量在0.003 24%以下，乙醇含量在0.003 74%以下。其中两批检出乙酸乙酯，含量为0.002 62%、0.002 49%。一批检出正丁醇，含量为0.002 12%。其他可能存在的溶剂均未检出。5批样品中有机溶剂残留量均符合《中国药典》2010年版（二部）对残留溶剂限度的要求。

3 讨论

3.1 直接进样相比顶空进样操作简单，直接，适合于高沸点化合物的分析。但待测样品易对色谱分析系统造成污染［4，5］。顶空进样气相色谱法检测溶剂残留方法［6，7］相比直接进样方法增加了实验步骤和时间。本实验中比较了顶空气相色谱法与直接进样气相色谱法对于破壁灵芝孢子粉样品中溶剂残留检测的影响，破壁灵芝孢子粉样品本身为粉状样品，品质较为均匀细腻，实验中用N，N－二甲基甲酰胺对其中的有机溶剂进行提取即可达到较高的准确性和重复性。实验证明，直接进样法在标准品及供试品中均没有引入干扰组分，故实验中采用了简单快捷的直接进样方式。

3.2 待分析成分中，甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、苯、正丁醇的沸点均较低，且区分度不大。正丁醇与二乙烯基苯沸点相差较大，分别为117.7℃和195℃，选择沸点为153℃的N，N－二甲基甲酰胺作为溶剂，在本方法中不会干扰其他溶剂的测定，使8种成分得到很好的分离，不额外增加检验时间。因此本文选用N，N－二甲基甲酰胺为溶剂。

3.3 本文建立了一种利用直接进样气相色谱法对破壁灵芝孢子粉中溶剂残留的快速检测方法。本方法精密度高，回收率良好，8种组分分离度均符合要求，具有很好的应用前景。

［1］洪亮，杨开，邵平，等.破壁灵芝孢子粉的制备及体外抗氧化活性研究［J］.浙江食用菌，2009，17（4）：55－58.

［2］黄晓兰，吴惠勤，黄芳，等.破壁与不破壁灵芝孢子粉多糖的分析［J］.中草药，2006，37（6）：813－816.

［3］张守勤，朱俊洁，王长征，等.灵芝孢子食用方法与破壁技术研究进展［J］.农业机械学报，2004，35（2）：160－162.

［4］魏京京，张启明，朱维华.毛细管气相色谱直接进样检测34种残留溶剂［J］.药物分析杂志，2008，28（10）：1767－1770.

［5］郑静，王小兵，徐志洲.气相色谱法测定吡喹酮及片剂的残留溶剂［J］.药学研究，2014，33（3）：145－147.

［6］马新荣，史雪莲，孔令艳.顶空气相色谱法测定拉米夫定中残留溶剂［J］.药学研究，2013，32（4）：205－207.

［7］邓桂凤，戴伟东，姚彤炜.顶空气相色谱法测定淫羊蕾提取物中的残留有机溶剂［J］.药物分析杂志，2008，28（11）：1955－1960.

Determination of residual solvents in broken cellular wall ganoderma lucidum spore powder by DI－GC

GAOWen-chao，LIQi-yan，XIAN Rui-qing，YU Hai-ying，WANG Xiao-bing
（Shandong Institute for Food and Drug Control，Jinan 250101，China）

ObjectiveTo establish a novel strategy of8 kinds of residual solventbased on direct injection gas chromatography（DI－GC）.MethodsThe eight residual solventswere separated by Agilent DB－624 capillary column（30m× 0.53 mm，0.3μm）with FID detector.The 8 kinds of residual solvents in ganoderma lucidum spore powderwith broken cellular wallweremethanol，ethanol，acetone，hexane，ethylacetate，benzene，n－butanol，divinyl－benzene.The column temperature was programmed.ResultsThe eight resident solvents were excellently separated within 19 minutes.The calibration curve of residual solventswas linear in the concentration range of0.003 4～4.505 0 mg·mL－1.The correlation coefficient r＞0.999 7.The recoveries of resident solvents were between 93.00%～117.91%.ConclusionThe established method was simple，rapid，accurate.It can be used for the detection of resident solvents in broken cellular wall ganoderma lucidum spore powder.

DI－GC；Resident solvents；Broken cellular wall ganoderma lucidum spore powder

R927.11

A

2095－5375（2014）11－0642－003

高文超，女，研究方向：保健食品化妆品检验，E－mail：15106919596＠163.com

王小兵，男，主管药师，研究方向：餐饮食品保健食品化妆品检验，Tel：0531－81216585，E－mail：wangxiaobing81＠163.com