HIV抗体快速检测在自愿咨询检测中的应用

施玉华，苏莹珍，方清艳，陈敏，崔文庆，陈会超，苏兴芳，马艳玲

HIV抗体快速检测在自愿咨询检测中的应用

施玉华，苏莹珍，方清艳，陈敏，崔文庆，陈会超，苏兴芳，马艳玲

目的在AIDS自愿咨询检测（voluntary counselling and testing,VCT）中应用快速检测，并与免疫印迹试验（western blotting,WB）结果比较，探讨进一步缩短确证时间及提高HIV感染者CD4+T淋巴细胞检测率的措施。方法用2种快速试剂进行筛查，对一阴一阳或双阳性样本进行WB确证检测，并比较和评价检测结果，同时采集患者血样行CD4+T淋巴细胞检测。结果1435份样本中，1种或2种快速试剂检测结果为阳性有398份，经WB检测确证377份阳性，符合率94.7%；2种快速试剂检测结果均为阳性的有379份，WB检测确证376份阳性，符合率99.2%；2种快速试剂检测结果为阴性的有1037份，经PCR检测未发现HIVRNA阳性样本。结论在VCT及各种应急检测时，可用快速试剂进行筛查，然后WB确证，以缩短等待时间，提高CD4+T淋巴细胞检测率。同时为保证检测质量，以防漏检，推荐使用2种质量优良的快速试剂同时筛查。

HIV抗体；印迹法，蛋白质；咨询

HIV抗体筛查试验有多种，目前国内应用最广泛的是酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA），其灵敏度和特异度较高，价格便宜，适用于临床血液筛查等大样本量检测[1]。但其需要相应的仪器设备及受过特殊培训的技术人员，检测反应也需要一定的时间，每次检测须设置5～6个对照，基层医疗机构通常会将样本积攒到一定量再进行检测，影响检测结果的及时性。对于许多检测资源有限，样本量较少的HIV/AIDS自愿咨询检测（voluntary counselling and testing,VCT）场所和小型实验室来说，操作简单、快速且无需特殊仪器设备，可进行单份样品检测的快速检测法（rapid test,RT）更适用。为探讨RT诊断HIV感染的可行性及其应用中应注意的问题，我们用2种RT试剂对本中心VCT门诊服务对象行HIV抗体筛查，结果为一阴一阳或双阳的样本以免疫印迹试验法（western blotting,WB）确证，双阴样本行PCR检测，并就RT与WB检测结果的一致性进行比较。现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料1435份样本为2010年10月—2011年4月云南省疾病预防控制中心VCT门诊提供。

1.2 试剂

1.2.1 筛查试剂①RT试剂1（RT1）：SD人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒，胶体金法，SD STANDARD DIAGNOSTICS，INC公司（韩国）生产；②RT试剂2（RT2）：Determine人类免疫缺陷病毒（HIV）1┼2型抗体诊断试剂盒，胶体硒法，Inverness Medical有限责任公司（日本）生产。

1.2.2 确证试剂采用WB确证，试剂由MP生物医学亚太私人有限公司（新加坡）生产。

1.2.3 PCR检测试剂采用NucliSENSEasyQ®HIV-1 v1.0，生物梅里埃有限公司（法国）生产。所有试剂符合国家标准并在有效期内使用，严格按照试剂盒说明书进行操作，同时参考《全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）》[2]判定结果。

1.3 方法用2种RT试剂进行筛查，对一阴一阳或双阳性样本行WB确证，比较并评价检测结果。对2种试剂检测结果均为阴性的样本，使用PCR检测是否有HIV RNA阳性样本。计算RT与WB的阳性符合率。

2 结果

2.1 RT阳性样本与WB确证结果比较结果见表1。

表1 RT阳性与WB确证结果比较Table 1 Com parison of the positive results between RT and WB

2.2 阳性符合率1435份样本中，2种RT试剂检测结果均为阳性的样本379份，经WB确证376份阳性，阳性符合率99.2%；单阳或双阳398份，经WB确证377份阳性，阳性符合率94.7%；单独1种RT试剂检测为阳性的样本数分别为388和389份，经WB确证分别有376和377份阳性，阳性符合率均为96.9%。

2.3 漏检情况1435份中，2种RT试剂检测结果均为阴性的有1037份，经PCR检测全部为阴性。

3 讨论

近年来，随着发病和死亡人数大幅增加，AIDS疫情波及范围逐渐扩大，态势日益严峻，HIV感染诊断对遏止AIDS流行的重要作用也日益突显。HIV感染的确诊主要依靠实验室诊断，而实验室诊断又主要依赖HIV抗体检测结果，因而选择适合的HIV抗体检测试剂及策略十分重要。目前，我国筛查HIV抗体最常见的是ELISA、颗粒凝集法和其他RT方法，随后用WB确证[2]。ELISA因其灵敏度高，特异性强，结果易保存等优点被广泛使用[3]。然而ELISA所需时间较长，受检者等待时间过长，从而导致随访率下降，CD4+T淋巴细胞检测率低等现象[4]。

RT因其操作简单、快速等优点被很多机构和医疗单位用于HIV抗体初筛[5]。但其灵敏度和特异度略低于ELISA，不可避免地会出现一些假阳性和假阴性结果[6]。从本次研究结果来看，2种RT试剂检测均为阳性的样本与WB确证结果的符合率（99.2%）高于单用1种RT试剂检测为阳性的样本与WB确证的符合率（96.9%）。对2种RT试剂检测均为阴性的1037份样本进行PCR检测，阴性符合率为100%。由此得出，使用2种RT试剂平行检测可尽可能降低假阳性和假阴性率。本研究有1份经WB确证结果为阳性的样本，2种RT试剂检测为一阴一阳。提示在实际工作中，推荐使用2种质量优良的RT试剂平行进行筛查检测，以提高阳性检出率。

本研究还得出，2种RT试剂检测均为阳性的样本与WB确证的阳性符合率为99.2%，低于高危人群的VCT替代检测策略（2种筛查试剂阳性，第3种ELISA试剂阳性且S/CO≥6.0，与WB检测阳性符合率为100%）[7]。因此2种RT试剂检测阳性的样本，仍存在一定的假阳性可能。下一步将对3种RT试剂与WB检测的符合性进行评价，探讨高危人群VCT替代策略。

有研究报道，与ELISA相比RT更适用于偏远地区血液筛查、临床做侵入性检查及现场急救检测等，一般不作为常规方法[8]。但随着HIV感染者的增多、预防AIDS宣传及健康教育工作的开展、人群AIDS防治措施知晓率的提高以及各地VCT工作的逐步开展，人们对HIV检测需求越来越大[9]。研究表明RT在男男同性恋人群的现场检测中可取得较好的效果，极大地消除了HIV感染者被发现后得不到及时、有效控制和管理的隐患[10-11]。RT在VCT工作中的应用同样具有重要的意义，咨询者往往希望在最短时间内知道自己的感染状况，等待时间过长易导致咨询者脱失[12]。而提供咨询者也希望根据结果提供及时的咨询服务，并及时提供CD4+T淋巴细胞检测及后续的转介治疗等服务。RT具有快速、可检测单份样本、不需额外仪器设备和操作简便等优点，可减轻检测者在等待结果期间的焦虑，增加检测后咨询的人数。采用RT检测与WB确证相结合进行HIV感染诊断，可缩短反馈时间，提高阳性结果告知率及CD4+T淋巴细胞检测率（本中心VCT室自采用该策略以来，初次采血至确证结果告知从3～5个工作日缩短至2～3个工作日，获取CD4+T淋巴细胞检测结果从7个工作日缩短至2～4个工作日，CD4+T淋巴细胞检测率从约85%提高到99%以上），有利于在资源有限地区扩展VCT服务，减少HIV的传播机会，尽多和尽早发现感染者，在经济欠发达且AIDS流行严重地区有较大的应用前景。同时，为保证检测质量，以防漏检，推荐使用2种质量优良的RT试剂同时进行筛查。

本研究为保证VCT门诊工作质量，避免漏诊，所用的2种RT试剂均为进口试剂。与进口试剂相比，目前部分国产试剂质量有待提高。国产RT试剂与WB确证相结合进行HIV感染诊断的可靠性及可行性有待进一步探讨。

[1]陈爱华，刘永梅.两种HIV试剂的联合应用在无偿献血者HIV初筛中的价值研究［J］.国际检验医学杂志，2013，34(3):356-357.

[2]中国疾病预防控制中心.全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）［EB/OL］.［2013-06-15］.http://wendang.baidu.com/view/ e1d0cf05cc1755270722082a.html.

[3]王琰.酶联免疫吸附法检测HIV（1+2）抗体时的影响因素［J］.解放军医学院学报，2013，34(3):233-239.

[4]钱留军，张喜梅.VCT项目617例血清HIV-Ab检查结果分析［J］.中外医学研究，2011，17(9):52-53.

[5]贾学慧，刘玉艳，周文婕，等.快速检测HIV抗体诊断实验的系统评价［J］.中国现代医学杂志，2012，22(12):28-32.

[6]张月娟，褚国方.ELISA法和胶体硒法在高危人群抗-HIV检测中的应用［J］.职业与健康，2008，24(9):846-847.

[7]施玉华，马艳玲，杨莉，等.HIV抗体检测替代策略Ⅱ在云南省应用的可行性探讨［J］.中国艾滋病性病，2008，14(3):223-225.

[8]彭庭海，陈慧萍，汤恒，等.硒标快速法检测HIV_(1+2)抗体效果及应用分析［J］.公共卫生与预防医学，2005，16(2):50-51.

[9]孙晓丰，吕钢.沈北新区2008-2011年艾滋病检测结果分析［J］.中国保健营养，2012，14(8):2876-2877.

[10]周斌.HIV快速检测在MSM人群现场监测中的运用［J］.中国艾滋病性病，2013，19(3):216.

[11]郑毓芳，潘承恩，刘莉，等.上海地区2640例自愿检测HIV抗体者队列研究［J］.诊断学理论与实践，2011，10(5):440-443.

[12]林麒，卫大英，段松，等.HIV传统检测和快速检测对随访率影响的研究［J］.中国艾滋病性病，2010，16(2):160-163.

（2013-06-28收稿 2013-09-25修回）

（责任编委 赵敏 本文编辑 陈玉琪）

App lication of HIV antibody rapid test to voluntary counselling and testing

SHIYu-hua,SU Ying-zhen,FANG Qing-yan,CHEN Min,CUIWen-qing,CHEN Hui-chao,SU Xing-fang,MA Yan-ling*
Yunnan Center for Disease Control and Prevention,Kunming,Yunnan 650022,China
*Corresponding author,E-mail:ynaidslab@126.com

Objective To explore the way to further shorten the waiting time for confirmed results and improve the detection rate of CD4+T lymphocytes for HIV infections by applying HIV rapid test(RT)to voluntary counselling and testing(VCT),and comparing the consistency of resultsbetween RTand western blotting(WB).M ethods Two reagentsofRTwere used for HIV screening, and WB was used for confirming test in positive samples found by one or two RT.The resultswere compared and evaluated.At the same time,blood samples were collected for the detection of CD4+T lymphocytes.Results Among 1435 samples,398 were found positive by one or two RT reagents.Among these 398 samples,377 were confirmed positive by WB,with a consistent rate of 94.7%; 379 sampleswere found positive by two RT reagents,and 376 were confirmed positive by WB,with a consistent rate of 99.2%;1037 samples were found negative by two RT reagents,and among them HIV RNA positive sample was not found by pooling PCR. Conclusions The strategy of RT used for HIV screening and WB used for confirming can be applied to VCT and other urgent tests, which can shorten the waiting time for confirmed results and improve the detection rate of CD4+T lymphocytes for HIV infections.In addition,two RT reagents with high quality are suggested to be used together in HIV screening,so as to ensure test quality and avoid missing positives.

HIV antibodies;blotting,western;counselling

R392.116

A

1007-8134(2014)01-0029-03

650022昆明，云南省疾病预防控制中心（施玉华、苏莹珍、方清艳、陈敏、崔文庆、陈会超、苏兴芳、马艳玲）

马艳玲，E-mail:ynaidslab@126.com