血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂减轻糖尿病肾间质巨噬细胞的浸润

李芳林 张凝宇 钦卓辉 李 辉 李智民

（深圳市职业病防治院，广东 深圳 518000）

血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂减轻糖尿病肾间质巨噬细胞的浸润

李芳林 张凝宇 钦卓辉 李 辉 李智民

（深圳市职业病防治院，广东 深圳 518000）

目的 探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对糖尿病肾脏的保护作用。方法 STZ尾静脉注射建立大鼠糖尿病模型。用免疫组化方法检测大鼠肾脏巨噬细胞的表达。比较血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂治疗组与非治疗组肾脏巨噬细胞的表达。结果 糖尿病成模后，巨噬细胞在肾间质的表达明显增加。血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂治疗组较非治疗组肾间质巨噬细胞的浸润减少加(P＜0.01)，伴随蛋白尿的减轻。结论 血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂可减轻糖尿病大鼠肾脏炎症浸润。

血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂；巨噬细胞；糖尿病

越来越多的证据显示，炎症在糖尿病及其并发症的发病中起重要作用[1]。无论1型还是2型糖尿病肾病，早期肾组织中均有单核/巨噬细胞的浸润。浸润的单核/巨噬细胞通过分泌细胞因子、炎性介质及产生氧自由基等造成肾组织结构的破坏，加速肾小球硬化的进程。尤其近年肾脏间质的病变在糖尿病肾病发展中的作用逐渐得到认可和重视。本人在以往的研究中也发现过巨噬细胞在糖尿病肾间质中的浸润[2]。血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（ARB）被证实具有独立于降压之外的肾保护作用[3]，国内对于血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对糖尿病肾病发病早期的巨噬细胞浸润作用却鲜有报道。因此本研究主要探讨了血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对糖尿病大鼠肾脏中巨噬细胞浸润的影响及与蛋白尿的关系。

1 材料与方法

1.1 糖尿病大鼠模型的建立

健康雄性SD大鼠24只（200～250 g）。随机分为正常对照组（NC组）8只，糖尿病组（DM组）16只。糖尿病组大鼠禁食不禁水12 h后，予一次性尾静脉注射链脲佐菌素（STZ，Sigma公司）50 mg/kg。48 h后尾静脉采血，快速血糖仪测随机血糖，1周后复测空腹血糖，以两次随机血糖＞16.7 mmol/L和空腹血糖＞13.9 mmol/L为糖尿病模型建立成功，建模成功后将糖尿病组随机分为2个亚组，1组为缬沙坦治疗组（DV组），1组为糖尿病对照组（DC组）。治疗组予50 mg/（kg·d）缬沙坦（北京诺华公司提供，160毫克/粒）灌胃，糖尿病对照组（DC组）和正常对照组（NC组）不予治疗。正常对照组予等量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液注射。在8周留取血、尿、组织标本。

1.2 组织学常规检查

肾组织石蜡切片行PAS和HE染色，观察肾组织肾小球硬化程度和肾小管损害程度。肾小球系膜区增宽程度按0～3分的半定量计分方法评价：0级为无系膜增宽，计0分；1级为轻度系膜增宽，计1分；2级为中度系膜增宽，计2分；3级为重度系膜增宽，计3分。每个动物至少评价30个肾小球，最终评分由所评价的动物所有肾小球计分的平均值得出，结果表示为均数±标准误。

1.3 免疫组织化学染色和量化

肾组织石蜡切片用小鼠抗-大鼠CD68抗体（识别大鼠巨噬细胞）（Serotec公司，UK）行免疫组织化学染色，最后套染无苏木素的PAS。分别计算20个连续非重叠的肾皮质区高倍镜视野下（×400）CD68+巨噬细胞数，除以高倍视野数，得每皮质高倍视野下的平均细胞数。数据以均数±标准误表示。

1.4 统计学分析

均数比较采用方差分析（ANOVA），P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠血糖、体质量及肾重/体质量变化

NC组大鼠随着时间的延长，体质量逐渐增加。而糖尿病大鼠随着时间的延长体质量无明显增加。DC组、DV组体质量均低于NC组体质量（P＜0.01）。DC组、DV组大鼠各时间点血糖较NC对照组明显增高（P＜0.01）。见表1。

表1 大鼠血糖、体质量和24 h尿蛋白排泄量的测定

2.2 24 h尿蛋白排泄量

DC组随着时间的延长，24 h尿白蛋白的排泄量逐渐升高，各时间点统计学上有显著差异（P＜0.01）。与NC组比较，DC组各时间24 h尿白蛋白的排泄量明显升高，统计学上有显著差异。DV组与DC组比较，蛋白尿有减轻趋势，在8周时DV组较DC组尿白蛋白排泄率减少（P＜0.05）。

2.3 光镜病理学变化

在DM组大鼠可以看到：肾小球体积增大，肾小球囊腔缩小，系膜区增宽，基底膜增厚以及肾小管肥大。而NC组无以上变化，DC组上述变化较DV组严重。8周时DC组与DV组肾小球系膜增宽半定量评分分别为（2.16±0.12） 和（1.74±0.40） （P＜0.01）。

2.4 肾脏巨噬细胞浸润

免疫组化染色显示在NC组大鼠肾间质偶尔见到个别巨噬细胞浸润。DC组肾间质内有明显巨噬细胞浸润，而在DV组巨噬细胞浸润情况较DC组减轻。DC组与DV组8周肾间质巨噬细胞浸润数分别为（13.9±3.3）个/HPF和（8.3±2.7）个/HPF（P＜0.01）。见图1。

图1 肾间质CD68+巨噬细胞免疫组化染色(×200；a：DC组；b：DV组)

3 讨 论

在本研究中，我们探讨了血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对链脲菌素诱导的糖尿病大鼠肾间质中的巨噬细胞浸润的影响，及其在糖尿病早期肾损害中的保护作用。结果显示：在糖尿病大鼠肾脏中，肾间质可见巨噬细胞浸润，血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂可明显减轻巨噬细胞的浸润和蛋白尿水平，伴随光镜病理学的变化。

在糖尿病肾病早期，肾小球表达过量单核细胞趋化蛋白-1、血管细胞黏附分子-1、细胞间黏附分子-1等，导致组织局部单核/巨噬细胞浸润，浸润的单核/巨噬细胞通过分泌细胞因子，炎性介质及产生氧自由基等造成肾组织结构的破坏，加速肾脏病变进程。尽管糖尿病肾病在以往被强调为肾小球疾病，但是近年肾脏间质的病变在糖尿病肾病发展中的作用得到认可和重视[4]。控制这一间质炎症过程，有可能延缓糖尿病的肾损害进程。

我们通过免疫组化发现，在糖尿病成模后8周，此时肾脏中巨噬细胞的浸润显著，而肾小球只有个别巨噬细胞。在血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂治疗组，肾间质巨噬细胞的浸润明显减轻，肾小球系膜增宽程度减轻。这些提示缬沙坦可能通过减少巨噬细胞浸润，减轻肾脏病理改变，减少尿蛋白排出，从而有效防止或延缓糖尿病肾病的进展。

血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂为什么能减轻肾间质巨噬细胞的浸润？这可能与血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂选择性与血管紧张素Ⅱ受体结合有关。血管紧张素Ⅱ（AgnⅡ）无法与受体结合，因而AgnⅡ诱导的单核细胞趋化蛋白分泌减少，从而使单核巨噬细胞的浸润减少[5]。

综上所述，我们证实了血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对糖尿病大鼠肾脏炎性细胞浸润的减轻作用。但是，血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂是如何参与肾脏保护尚需深度研究。对炎症浸润的拮抗有望成为延缓糖尿病肾病的新靶点之一。

[1] King GL.The role of inflammatory cytokines in diabetes and its complications[J].J Periodontol,2008,79(8 Suppl):1527-1534.

[2] Li F.Increased expression of toll-like receptor 2 in rat diabetic nephropathy[J].Am J Nephrol,32(2):179-186.

[3] Tan F.Dual blockade of the renin-angiotensin-aldosterone system is safe and effective in reducing albuminuria in Asian type 2 diabetic patients with nephropathy[J].Singapore Med J,2010,51(2):151-156.

[4] Nagao T.Osteopontin plays a critical role in interstitial fibrosis but not glomerular sclerosis in diabetic nephropathy[J].Nephron Extra,2012,2(1):87-103.

[5] Chawla T.Role of the renin angiotensin system in diabetic nephropathy[J].World J Diabetes,2010,1(5):141-145.

R587.1

B

1671-8194（2014）18-0083-02

国家职业病临床重点专科建设项目（编号：WY2011873）