GC法测定中药黄芪中五氯苯胺和灭蚁灵的残留量

汪海宣程庆兵姜 丽

（1 安徽省合肥市食品药品监督检验所，安徽 合肥 238000；2 安徽省巢湖市今辰药业有限公司，安徽 合肥 238000）

GC法测定中药黄芪中五氯苯胺和灭蚁灵的残留量

汪海宣1程庆兵1姜 丽2

（1 安徽省合肥市食品药品监督检验所，安徽 合肥 238000；2 安徽省巢湖市今辰药业有限公司，安徽 合肥 238000）

目的 立测定栽培黄芪中五氯苯胺和灭蚁灵的残留量的一种毛细管柱气相色谱的分析方法。方法 样品经有机溶剂超声萃取、以浓硫酸磺化后，采用不分流进样方式，用HP-5弹性石英毛细管柱经柱程序升温技术分离，并用电子捕获检测器检测。结果 五氯苯胺和灭蚁灵三水平的平均回收率分别为75.31%～106.31%，RSD分别为2.51%～6.98%；五氯苯胺的标准曲线为：y=194465x+209.21（r=0.9996）、灭蚁灵的标准曲线为：y=88626x+209.21（r=0.9995），五氯苯胺和灭蚁灵的线性范围：2～0.02 μg/mL。结论 该法简便，精密度、重复性及净化效果好，可用于黄芪中五氯苯胺和灭蚁灵的残留检测。

黄芪；五氯苯胺和灭蚁灵残留量；气相色谱法

近年来，回归大自然的潮流使人们对绿色药品更为关注，世界各国对天然药物的需求日益扩大。有机氯农药是用于防治植物病、虫害的组成成分中含有有机氯元素的有机化合物。其化学性质稳定，脂溶性大，残效期长，易在脂肪体内蓄积，造成慢性中毒，严重危及人体健康[1]。我国出口的中草药在欧美等国市场上多次因农药残留超标等原因被查扣，农药残留污染已成为中药材走向世界的障碍，成为当前中药材生产中急待解决的重要问题[2]。尽管我国已在1983年禁止使用六六六、滴滴涕等有机氯农药，但由于其残效期长，至今在土壤、地下水等环境中仍有残存。而药材的种植期较长，尤其是多年生的根类药材，易受有机氯农药的污染。对甘草中有机氯农药的残留量做了分析研究，呼吁有关方面对农药污染中药材的问题引起重视，确保中药材的质量。

1 实验材料

1.1 药材

黄芪（批号：20130101、20130212、20130401，上海海虹实业（集团）巢湖今辰药业有限公司提供），于60 ℃干燥4 h，冷至室温后，粉碎，过三号筛，放入具塞锥形瓶中备用。

1.2 仪器

Agilent 7890A气相色谱仪，附电子捕获检测器及自动进样器；HP-5毛细管柱；XP-5电子天平；RV10旋转蒸发器（IKA）。

1.3 试剂

农药标准品：五氯苯胺标准储备液（农业部环境保护科研监测所提供，浓度为200 μg/mL）；灭蚁灵标准储备液（农业部环境保护科研监测所提供，浓度为200 μg/mL）；丙酮、石油醚（沸程60～90 ℃）、二氯甲烷均为分析纯，且全部经过重蒸。

2 实验方法[2,3]与结果

2.1 溶液的配制

2.1.1 标准溶液的配制

精密量取五氯苯胺和灭蚁灵标准储备液各1 mL，置于100 mL容量瓶中，用石油醚（60～90 ℃）稀释至刻度（2 μg/mL），作为标准使用液。

2.1.2 供试品溶液的配制[4]

精密称取细粉4 g，置100 mL具塞锥形瓶中，加水20 mL浸泡过夜，精密加丙酮40 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠6 g和二氯甲烷30 mL，称定重量，超声处理15 min，直至氯化钠完全溶解，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置使水相与有机相完全分层，将有机相迅速移入装有无水硫酸钠10g的100 mL具塞锥形瓶中，脱水4 h，精密量取35 mL，置100 mL旋转蒸发瓶中，40 ℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚（60～90 ℃）如前反复操作至二氯甲烷与丙酮除净，用石油醚（60～90 ℃）溶解并转移至10 mL具塞刻度离心管中，加石油醚（60～90 ℃）精密稀释至5 mL，小心加入硫酸1 mL，振摇1 min，离心（3000 r/min）10 min，精密量取上清液2 mL，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2 色谱条件

载气：高纯氮（纯度＞99.999%），流速为1.0 mL/min；进样口温度：280 ℃，进样量为1 μL，不分流进样；ECD检测器温度为300 ℃；程序升温：初始温度90 ℃，保持1 min然后以40 ℃/min升至170 ℃，保持5 min；再以3 ℃/min升至230 ℃，保持3 min。在此色谱条件下，2 μg/mL的标准使用液中五氯苯胺和灭蚁灵的出峰顺序见图谱1。

图1 五氯苯胺和灭蚁灵混合对照溶液的色谱图[保留时间（min）：11.518-五氯苯胺、25.700-灭蚁灵]

2.3 精密度试验

取2 μg/mL标准使用液连续进样5次，按2.2色谱条件进行测定，五氯苯胺和灭蚁灵的峰面积值的RSD（%）分别为1.6%、2.0%。

2.4 标准曲线的绘制

精密量取标准使用液，用石油醚制成每毫升中分别含2.00 μg、1.00 μg、0.40 μg、0.20 μg、0.08 μg、0.04 μg、0.02 μg的溶液。分别进样1 μL，按2.2色谱条件进行测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得到五氯苯胺的标准曲线为：y=194465x+209.21（r=0.9996）、灭蚁灵的标准曲线为：y=88626x+209.21（r=0.9995）。

2.5 稳定性试验

取2 μg/mL标准使用液分别在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h进样，按2.2色谱条件进行测定，五氯苯胺和灭蚁灵的RSD（%）分别为：2.1、1.3。可知五氯苯胺和灭蚁灵在12 h内稳定。

2.6 方法检出限

首先用标准使用液配制一系列低浓度标准溶液，以石油醚为溶剂，然后按2.2色谱条件进样，再以信噪比（S/N=3）时相应浓度确定检出限。五氯苯的检出限为0.40 ng/mL，灭蚁灵的检出限为0.16 ng/mL。

2.7 重复性试验

精密称取批号为20130101的黄芪样品6份，按2.1.2对样品的处理方法进行提取、净化，然后按2.2色谱条件进行测定，计算其峰面积的RSD，结果表明，该方法重复性良好。

2.8 供试品的测定

精密称取不同批号的黄芪样品各3份，按上述方法对黄芪样品进行提取、净化，然后按2.1.2色谱条件进样分析，测定五氯苯胺和灭蚁灵的含量。结果表明：黄芪中没有与灭蚁灵标准品相对应的峰出现，故该三批样品中未检出灭蚁灵，含五氯苯胺的分别为1.110-4ng/g、2.110-4ng/g和2.3×10-4ng/g。

2.9 加样回收率试验

精密称取批号为20130101的黄芪样品9份，分别加入标准混合对照品，三个添加水平，每个水平份样，混匀，按2.2.1对样品进行提取、净化和测定，所得结果扣除相应样品的各农药含量后，计算各水平加样回收率，用0.08 μg/mL标准混合对照品溶液做了随行标准。结果表明，测定方法的准确度良好。

3 结论与讨论

3.1 结论

由结果可知，本实验的回收率、精密度及重现性试验结果均符合农药分析的要求。《中国药典》2005年版均规定黄芪中五氯苯胺（五氯硝基苯的降解产物）不得高于100 ng/g，本实验中药材黄芪中农药五氯苯胺的残留量在1.55×10-4～2.3×10-4ng/g，符合标准。

3.2 讨论

本实验采用丙酮水溶液超声波提取，加入氯化钠和二氯甲烷，利用盐析的原理使有机相和水相很好的分层[5]。同时使农药由水相进入有机相，取出部分有机相浓缩、净化，溶液的分配不需要在分液漏斗中进行，这样可以减少提取的次数。再在旋转蒸发仪水浴蒸至近干，浓缩后的有机相放在带有可读的离心管中，稀释到所需刻度，然后加硫酸进行净化处理，而且用硫酸磺化的步骤是在带有刻度的离心管中进行，离心后取部分上清液作为待测液进行测定。另外，采用磺化法对于中草药的干扰成分净化非常完全，无干扰峰的存在。根据加样回收率实验和精密度实验的结果可以看出，本法也符合国家关于农药残留检测的要求且本法简化了提取和净化操作，减少了损失，提高了效率。

[1] 荣维广,郭华,杨红.我国中药材农药残留污染研究现状[J].农药,2006,45(5):305-306.

[2] 朱日然,瀚海洋,朱宗民.黄芪中有机氯类农药残留量的毛细管气相色谱测定[J].齐鲁药事,2009,28(11):663-664.

[3] 孟辉,刘晨明.中药材黄芪中农药残留量检测方法研究[J].辽东学院学报(自然科学版),2009,16(1):23-24.

[4] 中华人民共和国药典(一部)[M].2010年版.北京:中国医药科技出版社,2010:附录57.

[5] 蒋开年,宋学伟,崔志斌,等.气相色谱法测定黄芪甘草中有机氯农药残留量[J].西南民族大学学报(自然科学版),2008,34(1): 120-123.

R282.710.3

B

1671-8194（2014）18-0091-02