乙酰肝素酶蛋白表达与肝癌侵袭转移关系的研究

干惠珠，张学文，孙步彤，王世宝

(吉林大学中日联谊医院 1.肿瘤血液科；2.肝胆外科，吉林 长春130033)

乙酰肝素酶(heparanase，HPSE)是一种葡糖苷酸内切酶，能特异性降解硫酸肝素多糖的硫酸肝素侧链，破坏细胞外基质和基底膜，乙酰肝素酶与肿瘤血管形成、侵袭转移密切相关。我们采用免疫组织化学法检测HPSE蛋白在肝细胞肝癌、癌旁肝组织及正常肝组织中的表达，探讨HPSE蛋白与肝癌临床病理特征的关系。

1 临床资料

1.1一般资料收集2012年1月-2013年12月在我院手术切除并经病理学检查证实的70例肝细胞肝癌和癌旁组织标本，癌旁组织为距肿瘤2 cm处肝组织。另取手术切除的肝脏良性疾病的正常肝组织20例作正常对照。本组病例男性50例，女性20例；年龄35-70岁，平均52.5岁；癌灶长径≤5 cm 45例，>5 cm 25例；甲胎蛋白(AFP) 阳性55例、阴性15例；高转移复发组：有癌栓、肝内播散即卫星癌灶和(或) 淋巴结转移的30例，低转移复发组：无癌栓、无肝内卫星癌灶和(或) 淋巴结转移的40例；高分化20例，中分化28例，低/未分化22例，癌灶包膜完整38例、不完整32例；肝癌BCLC临床分期极早期、早期45例、中晚期25 例。肝脏良性肿瘤20例中男性12例，女性8例；年龄30-60岁，平均45岁，其中肝血管瘤16例、肝局灶性结节性增生4例。

1.2免疫组织化学染色方法及结果判定标本常规甲醛固定取材、脱水、石蜡包埋后做4 μm连续切片，按SP 免疫组织化学染色试剂盒染色步骤进行，用已知的阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。HPSE染色阳性为胞浆呈棕黄色颗粒，在光镜下观察5 个高倍视野，计算阳性细胞数，阳性细胞数≤10%为阴性表达，>10%为阳性表达。

1.3统计学处理采用t检验及χ2检验，由SPSS11.5软件进行统计学分析。

2 结果

2.1HPSE蛋白在肝癌组织中的表达免疫组织化学染色显示乙酞肝素酶HPSE主要表达在肝癌细胞的胞质，胞膜亦有表达，棕黄色，呈散在、片状或灶状分布。70例肝癌组织HPSE蛋白表达阳性率58.5%(41/70)，癌旁组织HPSE蛋白表达阳性率8.6%(6/70)，正常肝组织表达阳性率5.0%(1/20)；肝癌与癌旁组织、正常肝组织的HPSE蛋白表达差异有显著性(P<0.05)。

2.2HPSE蛋白表达与肝癌临床病理特征的关系肝癌组织中HPSE蛋白表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、甲胎蛋白(AFP)值均无显著相关性(P>0.05)，而与肿瘤包膜受侵、肝内和(或)淋巴结转移、BCLC临床分期有关(P<0.05)(表1)。

表1 HPSE表达与肝细胞癌临床病理特征的关系

3 讨论

乙酰肝素酶基因是1999年克隆鉴定的新基因，是一种葡糖苷酸内切酶[1]。HPSE 通过破坏细胞外基质和细胞基底膜组成的天然屏障，促进肿瘤细胞向周围浸润、扩散，并抑制免疫监视，实现肿瘤细胞向远处转移[2-4]。研究表明，乙酰肝素酶是肿瘤发生、浸润和转移过程中的关键酶之一，乙酰肝素酶在转移的恶性肿瘤中普遍存在，并且在肝癌、结肠癌、乳腺癌高转移肿瘤细胞中高表达[5,6]。

本研究检测70 例肝细胞肝癌标本HPSE蛋白的表达情况，45例肝癌组织中HPSE蛋白表达阳性，占总数的64.2 %；结果显示，肝癌组织HPSE蛋白的表达显著高于癌旁肝组织及正常肝组织(P<0.05)，与文献报道一致。HPSE 表达与肝癌的包膜受侵、肝内和(或)淋巴结转移以及BCLC临床分期有关。HPSE表达在高转移复发倾向组和低转移复发倾向组表达率有明显差异，初步表明乙酰肝素酶与肝癌侵袭转移相关，在转移复发组和无转移复发组表达率亦有显著性差异；进一步提示HPSE 表达阳性肝癌有较高的侵袭性；乙酰肝素酶有可能成为HCC术后转移复发有价值的预测指标。

作者简介：干惠珠(1972-)，女，副主任医师，副教授，硕士研究生导师，主要从事恶性肿瘤发病机制及基因治疗的研究。

参考文献：

[1]Vlodavsky I,Friedmann Y,Elkin M,et al.Mammalian heparanase:gene cloning,expression and function in tumor progression and metastasis[J].Nat Med,1999,5:793.

[2]González-Alva P,Kikuchi K,Miyazaki Y,et al.Expression of heparanase:a possible role in invasiveness and aggressive clinical behavior of ameloblastomas[J].J Oral Sci,2010,52:39.

[3]Dong S,Wu XZ.Heparanase and hepatocellular carcinoma:promoter or inhibitor? World J Gastroenterol,2010,16:306.

[4]charia E,Jia J,Zhang X,et al.Newly generated heparanase knock-out mice unravel co-regulation of heparanase and matrix metalloproteinases[J].PLoS One,2009;4:e5181.

[5]Chen G,Dang YW,Luo DZ,et al.Expression of heparanase in hepatocellular carcinoma has prognostic significance:a tissue microarray study[J].Oncol Res,2008,17:183.

[6]Liu CJ,Lee PH,Lin DY,et al.Heparanase inhibitor PI-88 as adjuvant therapy for hepatocellular carcinoma after curative resection:a randomized phase II trial for safety and optimal dosage[J].J Hepatol,2009,50:958.