解酒护肝颗粒脂溶性成分提取工艺的优化

郑 飞，越 皓，戴雨霖，李 晶，刘淑莹，2*

（1.长春中医药大学，长春 130117;2.中国科学院长春应用化学研究所，长春 130022）

解酒护肝颗粒脂溶性成分提取工艺的优化

郑 飞1，越 皓1，戴雨霖1，李 晶1，刘淑莹1，2*

（1.长春中医药大学，长春 130117;2.中国科学院长春应用化学研究所，长春 130022）

目的 优选解酒护肝颗粒中脂溶性成分的提取工艺。方法 采用正交设计法，以总皂苷含量为指标，选取乙醇体积分数、加醇量、提取时间及提取次数为考察因素，优选解酒护肝颗粒中脂溶性成分的提取工艺。结果 脂溶性成分最佳提取工艺为加8倍量70%乙醇，提取2次，每次1 h。结论 确定了解酒护肝颗粒脂溶性成分的最佳提取工艺，简便易行，适合工业化生产。

解酒护肝颗粒;总皂苷;提取工艺;正交试验

解酒护肝颗粒是由葛花、人参、灵芝等药材配伍而成，具有疏肝利胆，解酒醒脾，辅助保护酒精性肝损伤的作用［1-3］。《本经逢源》中记载，“葛花，能解酒毒，葛花解酲汤用之，必兼人参”［4-5］。为了更好的发挥疗效，本试验以总皂苷的含量为考核指标，采用正交试验法确定其脂溶性成分的最佳提取工艺，为工业化生产提供工艺参数。

1 实验材料与仪器

人参、葛花、灵芝（吉林省宏检医药药材有限公司，经长春中医药大学王淑敏教授鉴定为正品）;人参皂苷Re对照品（中国食品药品检定研究院，批号:110754-201324）;香草醛（上海海曲化工有限公司）;甲醇、乙醇、石油醚、高氯酸、冰醋酸均为分析纯（北京化工厂）;JA5301N型电子精密天平（上海民桥精密科学仪器有限公司）。

2 实验方法与结果

2.1 总皂苷的含量测定［6-7］

2.1.1 对照品溶液的配制 取人参皂苷Re对照品约0.010 g，精密称定，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液的配制 取干燥粉末约2.0 g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流3 h，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入100 mL锥形瓶中，精密量取加入水饱和正丁醇50 mL，密塞，放置过夜，超声处理（功率250 W，频率50 kHz）30 min，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液15 mL，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.3 显色方法 取上述续滤液置磨口带塞试管中，水浴挥干甲醇，加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2 mL，使残渣溶解，再加入高氯酸0.8 mL，充分振摇混匀后置60℃恒温水浴上加热10 min，立即用冰水浴冷却10 min，加入冰醋酸5.0 mL，摇匀，以试剂作空白，于560 nm波长处测定吸收度。

2.1.4 线性关系考察 分别精密量取人参皂苷Re标准溶液 60，80，100，120，140 μL 置磨口带塞试管中，按“2.1.3”项下进行测定，以对照品含量（X）对吸光度（Y）进行线性回归，得回归方程为Y=4.85X+0.004 6，r=0.999 6，结果表明总皂苷含量在含量为0.060 2～0.140 6 mg范围内线性关系良好。

2.2 提取工艺的优化［8-9］

2.2.1 乙醇体积分数的考察 分别按处方量称取葛花、人参等药材3分，每分50 g，分别加入8倍量体积分数分别为50%，60%，70%，80%，90%的乙醇溶液提取2次，每次1 h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，干燥至恒重。按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，测得总皂苷的提取率分别为2.85，3.42，3.92，3.65，3.30 mg/g。综合考虑大工业生产乙醇浓度不宜过高，故确定乙醇体积分数为60% ～80%。

2.2.2 正交设计试验 以预试验结果为基础，采用乙醇回流提取法，选择乙醇浓度（A）、加醇量（B）、提取时间（C）、提取次数（D）为考察因素，采用L9（34）的正交设计进行试验，以总皂苷含量为考察指标进行试验，分别取9分处方量的所需乙醇提取的药材，按因素水平表设计条件进行乙醇回流提取，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.25～1.28（80℃）的稠膏。正交试验表及结果见表1。

方差分析结果表明，以总皂苷含量为考察指标，影响提取工艺的因素作用顺序为:乙醇浓度＞提取次数＞提取时间＞加醇量。乙醇浓度和提取次数的影响有显著性差异，综合考虑选用最常规的方案，最佳工艺为A2B1C1D2，即加8倍量的70%乙醇，提取2次，每次1.0 h。

表1 正交实验表及实验结果

2.2.3 验证试验 取处方量比例葛花、人参药材200 g，共3分，按正交试验结果优选最佳提取工艺条件进行验证试验，结果总皂苷平均提取量为8.47 mg/g，RSD为1.83%，表明该工艺稳定可行。

3 小结

本课题前期工作中，通过快速分离液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用仪（RRLC-Q-TOF）对葛花化学成分及与人参配伍作用进行研究，结果显示人参可以促进葛花中的异黄酮类成分溶出，同时人参中的人参皂苷含量比人参单煎液中的含量有所增加;可能是由于分子之间结构导致溶出度增大。通过对葛花与人参配伍和其机制的研究，为开发安全有效的解酒护肝产品提供基础理论支撑。

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［1］王胜鹏，陈美婉，王一涛.葛花化学成分和药理活性研究进展［J］.中药药理与临床，2012，28（2）:193-196.

［2］朴松兰，金玟成.解酒利胆汤对酒精性脂肪肝大鼠肝氧化应激状态的影响［J］.长春中医药大学学报，2010，26（4）:648-649.

［3］胡鹏，詹珂，张利，等.天然解酒药物及食物的研究［J］.长春中医药大学学报，2010，26（4）:137-138.

［4］杨昌金.清解酒毒化瘀散结法治疗酒精性肝病体会［J］.长春中医药大学学报，2010，26（4）:520-521.

［5］古今，马尧遥.解酒药物的研究进展［J］.中国药物应用与检测，2010，7（6）:371-373.

［6］万玉华，戴洁，黄春静.紫外分光光度法测定参须中人参总皂苷的含量［J］.中国中医药现代远程教育，2012，10（24）:146-147.

［7］王治宝，李焕芬，边永玲.葛花中总皂苷的含量测定［J］.河北北方学院学报:自然科学版，2008，24（2）:30-32.

［8］边永玲，李焕芬，张颖，等.葛花总皂苷的提取及总皂苷和总黄酮的含量测定［J］.四川中医，2008，26（7）:41-43.

［9］桂双英，周亚球.正交试验法优选人参总皂苷的提取工艺［J］.时珍国医国药，2003，14（10）:591-592.

Optimization of extraction technique of liposoluble constituent in Hangover Liver Granule

ZHENG Fei1，YUE Hao1，DAI Yulin1，LI Jin1，LIU Shuying1，2*
（1.Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun 130117，China;2.Changchun Institute of Applied Chemistry，Chinese Academy of Sciences，Changchun 130022，China）

ObjectiveOptimized the extraction techniques of liposoluble constituent in Hangover Liver Granule.MethodsTaking the content of total saponins as index，with extraction time，extraction times，ethanol concentration and amount as factors，extraction technology of total saponins was optimized by orthogonal test.ResultsOptimal extraction technology of liposoluble constituent was as following:extracted 2 times with 8 times the amount of 70%ethanol，1h per time.ConclusionTo determine optimized extract technology of liposoluble constituent in Hangover Liver Granule，suitable for large-scale industrial production.

Hangover Liver Granule;total saponins;extraction technology;orthogonal test

R285.5

A

2095－6258（2014）05－0813－02

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.05.019

国家科技支撑计划项目（2011BAI03B00）。

郑 飞（1987－），女，硕士，研究实习员。研究方向:新剂型新技术研究与新产品开发。

刘淑莹，女，博士，研究员，电子信箱:syliu@ciac.jl.cn。

2014－04－16）