新疆阿瓦提多脂鳞伞对不同碳氮比的利用能力*

刘 淼，林辰壹＊＊，阿依买木·沙吾提，刘玉芳，贾培松

(1.新疆农业大学林学与园艺学院，新疆 乌鲁木齐 830052;2.新疆农业大学设施农业研究所，新疆 乌鲁木齐 830052;3.塔里木大学植物科学学院，新疆 阿拉尔 843300;4.新疆农业科学院植物保护研究所，新疆 乌鲁木齐 830091)

多脂鳞伞Phonliota adiposa(Fr.)Quél.的子实体色泽鲜艳呈金黄色，菌盖、菌柄上布满黄褐色鳞片，又称作黄伞，富含蛋白质、碳水化合物、维生素及多种矿物质元素，可提神醒脑，并可预防、治疗肿瘤和葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎杆菌以及结核杆菌的感染。食之黏滑爽口，味道鲜美，风味独特，是1种食药兼优且具有较高商品价值的珍稀食用菌[1－3]。研究证明，碳氮比含量直接影响菌丝体正常生长，影响食用菌子实体发生时间和产量[4，5]。新疆多脂鳞伞主要分布于新疆天山、阿勒泰山山区的河谷阔叶林中，乌鲁木齐南山小渠子及精河河岸的杨、柳树林也有分布[6]。因此，为了获得最适合多脂鳞伞生长的碳氮比值，本文针对采摘于新疆阿瓦提县野生多脂鳞伞进行不同碳氮比利用能力研究，为生理活性物质代谢、分析与提取提供技术支撑，为新疆阿瓦提多脂鳞伞菌种生产及人工栽培提供理论基础和技术指导。

1 材料与方法

1.1 野生多脂鳞伞的获得与菌丝体活化

野生多脂鳞伞采自新疆阿瓦提县 (39°31′N、79°45′E、海拔1 028 m)拜什艾日克镇农田防护林中柳树的枯洞。经多代分离获得稳定菌株多脂鳞伞LL－01，试验菌株由新疆农业科学院植物保护所提供。以PDA加富培养基为活化培养基，灭菌后趁热倒平板，取大小为5 mm×5 mm菌种块接种，25℃黑暗条件下菌丝体活化培养。

1.2 多脂鳞伞LL－01碳氮比优化配方

准确称量磷酸二氢钾2 g、硫酸镁1 g、VB10.05 g、琼脂20 g，充分溶解后定容至1 000 mL，培养基为基本配方[7]。以本项目前期研究过程中获得适宜的碳源 (可溶性淀粉)和氮源 (硝酸铵)为依据，设置 10∶1、15∶1、20∶1、25∶1、30∶1、35∶1、40∶1七种碳氮比，以不加可溶性淀粉、硝酸铵为对照CK;加入20 g可溶性淀粉，不加任何的氮源为CK1;以加入2 g硝酸铵，不加任何碳源为CK2。各配方调pH至7，灭菌和接种方法同1.1所述。

1.3 指标测定与数据处理

菌丝长势:+++表示长势浓密、++表示长势一般、+表示长势差稀疏、—表示萎缩、－表示不生长。

菌落形态特征:□表示老化斑点、◎表示菌丝干缩、¤表示菌丝松散，同时观测菌丝生长圈、边缘特征、菌丝爬壁、菌丝吐水、菌落形状、中央隆起或倒伏、转色、气味和杂菌抑制线特点。

显微特征观察:在10倍×40倍Motic SFC－28显微镜下，观测菌丝粗细、分支、形状以及每视野下锁状联合特征等。

每天观测并记录菌丝生长量[8]，统计并计算平均满皿时间 (FT)，即菌丝体生长至培养皿直径大小所需天数 (d)、平均总生长量GT(mm)、平均生长速率SGT(mm·d－1)、最大日生长量Gmax(mm)及出现时间DGmax(d)，达到50%总生长量所需的平均生长天数G50(d)。

每个处理重复5次。25℃黑暗条件下恒温培养7 d，每天同一时间观测菌丝长势。试验数据用DPS 7.05进行差异显著性分析，用平均值±标准差表示。

2 结果与分析

多脂鳞伞LL－01菌丝体在供试的7种以可溶性淀粉和硝酸铵为碳氮比试验中，接种后第1天菌丝体恢复生长，菌丝体气味正常且都有爬壁现象、菌丝成辐射状生长、菌丝体污染率低、抗杂菌能力强。通过多脂鳞伞LL－01在供试的7种碳氮比中菌丝体长势、生长圈、锁状联合数量、生长速度的比较分析，多脂鳞伞LL－01对不同碳氮比种类的利用能力存在显著 (p＜0.05)和极显著 (p＜0.01)差异，具有碳氮比选择性利用特征。结果见图1、图2、表1、表2。

表1 可溶性淀粉和硝酸铵为碳氮比条件下多脂鳞伞LL－01菌落形态特征

表2 可溶性淀粉和硝酸铵为碳氮比条件对多脂鳞伞LL－01菌丝生长的影响

由图1、图2、表1、表2可见，当C/N=30∶1时，菌丝长势强、1 d～7 d内菌丝体生长一直处于增长期，FT＜7 d，GT、SGT达到最大生长量，到达G50的时间为4 d～5 d。GT生长量是碳氮比10∶1和40∶1处理的109.89%和117.95%，Gmax出现时间比碳氮比为10∶1和40∶1处理滞后了1 d，是多脂鳞伞LL－01生长适宜的碳氮比。

当C/N=25∶1时，菌丝长势稀疏、生长速度缓慢、生长边缘不完整，FT＞7 d，GT分别是碳氮比30∶1处理、CK、CK1、CK2的 82.49%、146.12%、124.21%、124.16%。Gmax出现时间比碳氮比30∶1处理、CK分别滞后了2 d。菌丝长势、GT、SGT随着碳和氮的添加量而增大。这充分表明碳和氮添加量以及适宜的碳氮比浓度，对多脂鳞伞LL－01菌丝生长有着显著影响。

3 讨论与结论

碳氮比过高或过低都不利于菌丝生长。前人对采自吉林的野生多脂鳞伞驯化过程中认为，葡萄糖/蛋白胨为40∶1是菌丝体生长的适宜碳氮比[9]，本研究结果显示，新疆阿瓦提多脂鳞伞菌丝在可溶性淀粉/硝酸铵=10∶1～40∶l的范围内均有生长现象，当C/N为30∶1时菌丝长势强，菌丝生长量、生长速率均达到最大值，阐明阿瓦提多脂鳞伞对碳氮比要求有其特殊性，与北冬虫夏草[10]、花脸香蘑[11]的碳氮比研究结果一致，说明与其它食用菌种类一样，多脂鳞伞存在适宜的碳氮比需求和不同的利用能力。

本研究运用多脂鳞伞的最适碳源 (可溶性淀粉)和最适氮源 (硝酸铵)进行不同梯度的碳氮比试验，与以葡萄糖为碳源、以硝酸钾为氮源的经典碳氮比配方研究相比较[12]，可溶性淀粉含碳量高于葡萄糖，硝酸铵的含氮量高于硝酸钾，且铵盐比硝酸盐更易被食用菌利用[1]，说明以可溶性淀粉和硝酸铵为碳氮比的试验能够为多脂鳞伞提供更多的碳氮营养物质。前人以最适碳源 (蔗糖)和最适氮源 (蛋白胨)进行了鲍鱼菇的适宜碳氮比研究[13]，而以可溶性淀粉为碳源和以硝酸铵为氮源的碳氮比研究是多脂鳞伞适宜碳氮比研究的首次报道。

本研究证实，可溶性淀粉和硝酸钾碳氮比为10∶1～40∶1之间均能显著影响新疆阿瓦提多脂鳞伞菌丝体的生长，当C/N=30∶1，菌丝体表现出生长速度快、活力强、长势整齐。多脂鳞伞表现出对不同浓度碳氮比利用速率和利用效率的差异。

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