胃腺癌中细胞周期检测点激酶1、2和DNA双链断裂修复蛋白51的表达及意义

周文燕 (扬州友好医院内三科，江苏 扬州 225009)

胃腺癌发生发展过程不清楚。研究认为机体的基因和蛋白表达失常是促进肿瘤进展的重要因素。细胞周期检测点激酶(CHK1)1、2是细胞周期检测点(G1/S，S和G2/S)发挥作用的主要激酶，对维持机体基因组的稳定及基因的平衡有重要作用〔1，2〕。DNA双链断裂修复蛋白(RAD)51是一种高度保守和主要在同源重组中发挥作用的DNA修复蛋白〔3〕，3种蛋白异常表达对肿瘤发展及放疗反应均有一定影响。本文探讨胃腺癌CHK1、CHK2和RAD51的表达特征及其临床意义。

1 材料和方法

1.1 临床资料 近3年我院行胃腺癌根治手术的患者97例作为观察组，年龄50～83岁，平均65.6岁，其中男51例，女46例。纳入均经病理医师再次确诊，并符合WHO中的诊断标准。其中高分化20例，中分化15例，低分化62例。收集切端经病理证实为正常胃黏膜组织80例作为对照组，年龄51～82岁，平均65.3岁，其中男42例，女38例。两组一般临床资料无明显差别(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 免疫组化检测CHK1、CHK2和RAD51蛋白的表达CHK1、CHK2和RAD51蛋白均购自武汉博士德生物工程公司，均为浓缩液。对抗体进行不同比例的稀释，选择最理想的配比浓度用于正式实验。3种蛋白的检测均应用免疫组化SABC法，DAB染色。操作均由同一病理科主管技师进行，严格按实验步骤进行操作，严格质量控制。

1.3 CHK1、CHK2和 RAD51蛋白检测结果的判定方法CHK1和CHK2以细胞质和(或)细胞核出现棕黄色颗粒为阳性反应细胞，RAD51以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性细胞。每张切片观察5个肿瘤细胞(观察组)、上皮细胞(对照组)染色密集的区域(400倍)，取其平均值，以阳性细胞≥25%定为阳性，以阳性细胞＜25%定为阴性。

1.4 统计学方法 采用SAS6.12软件进行χ2或相关分析。

2 结果

2.1 两组CHK1、CHK2和RAD51表达阳性率的比较 观察组中CHK1、CHK2和RAD51表达的阳性率明显高于对照组(P＜0.000 1)。见表 1。

2.2 CHK1、CHK2和RAD51在观察组不同临床特征中的表达比较 观察组CHK1、CHK2和RAD51的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度和临床分期相关(P＜0.001)，而与淋巴结转移无明显相关性。见表2。

2.3 观察组CHK1、CHK2和RAD51表达的相关性 观察组CHK1 和 RAD51(r=0.42，P=0.042 3)、CHK2 和 RAD51(r=0.47，P=0.034 2)的表达具有正相关性。

表1 两组CHK1、CHK2和RAD51表达阳性率的比较〔n(%)〕

表2 CHK1、CHK2和RAD51在观察组不同临床特征中的阳性表达比较〔n(%)〕

3 讨论

促进胃肿瘤进展的主要是癌基因的激活和抑癌基因的失活，当基因和蛋白异常表达诱导肿瘤进展过程中，肿瘤细胞增殖活性升高，生长速度加快，侵袭能力更强〔4，5〕。CHK1 和CHK2是细胞周期检测中最关键的效应蛋白激酶〔6，7〕。其异常表达可以促进肿瘤的增殖过程，也对肿瘤治疗过程中治疗反应有一定的判断作用。RAD51是细胞DNA修复系统中的重要一员，因此其正常表达对维持其稳定性有重要意义。由于多种因素均能引起DNA损伤，其中最严重的是DNA双链断裂〔8〕，因此RAD51的正常表达对其修复有重要作用，而当其异常表达可以引起损伤或修复障碍。目前已知有重组修复和非同源末端连接两种机制参与DNA双链断裂的修复。虽然研究CHK1、CHK2和RAD51在肿瘤中的表达较多，但是学者发现其在不同肿瘤中的表达不一致。高丽丽等〔9〕认为CHK2在乳腺癌中高表达是促进肿瘤发生和发展的重要因素。申帅等〔10〕认为CHK1和RAD51在结肠癌中低表达进可以加速肿瘤的增殖过程。吴春等〔11〕认为CHK2在高级别浆液腺癌中高表达。邓年丰等〔12〕认为CHK1和RAD51在舌鳞癌中高表达。因此CHK1、CHK2和RAD51在不同肿瘤中的表达并不一致，且 CHK1、CHK2和RAD51可能在同一肿瘤中的不同临床特征或不同分化程度中的表达也不尽相同。

本研究结果提示3种蛋白高表达是促进肿瘤发生的重要因素。CHK1和CHK2作为ATM和ATE的下游效应基因，如果细胞的DNA受到损伤或破坏时，被ATM和ATR活化的CHK2通过其下游的底物磷酸酶CDC25和14-3-3蛋白来激活细胞检测点关卡，使细胞周期阻滞在G1/S转折处、S期和G2/M转折处，此时发挥DNA修复的作用，如果其表达过高或明显异常，则细胞增殖活性出现异常，此时可以引起细胞的异常增生，也使肿瘤细胞明显活化，癌化过程明显。也有学者认为CHK1和CHK2的功能还有激活转录、调节肿瘤细胞黏附的作用〔13，14〕。同源配对是重组修复的关键步骤，RAD51作为催化源配对的关键酶，通过对链配对和链交换的影响发挥作用。也有研究〔15〕认为RAD51可以刺激源重组和姐妹染色体的交换，引起基因的不稳定。本文结果提示3种蛋白参与了肿瘤的进展。CHK1、CHK2和RAD51高表达时，肿瘤的侵袭增强，此时肿瘤细胞的生长活跃，细胞繁殖快，使肿瘤的体积增大。由于肿瘤的浸润深度、分化程度和临床分期均为肿瘤预后的重要指标，因此三者高表达时可能提示预后不良。CHK1、CHK2和RAD51可能在同一通路上起调节作用，其作用的间接途径可能有对增殖和血管生成的调节，但是具体机制及作用途径有待证实。

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2 Wang WJ，Wu SP，Liu JB，et al.MYC regulation of CHK1 and CHK2 promotes radioresistance in a stem cell-like population of nasopharyngeal carcinoma cells〔J〕.Cancer Res，2013;73(3):1219-31.

3 Pal J，Fulciniti M，Nanjappa P，et al.Targeting PI3K and RAD51 in Barrett's adenocarcinoma:impact on DNA damage checkpoints，expression profile and tumor growth〔J〕.Cancer Genomics Proteomics，2012;9(2):55-66.

4 刘爱东，庞久玲，刘士生.胃癌中基质金属蛋白酶-9和CD105表达关系的研究〔J〕.中国老年学杂志，2009;29(4):886-7.

5 刘爱东，李 青，要瑞莉，等.MMP-14 mRNA在胃腺癌中的表达及意义〔J〕.重庆医学，2012;41(5):439-41.

6 Huang M，Miao ZH，Zhu H，et al.Chk1 and Chk2 are differentially involved in homologous recombination repair and cell cycle arrest in response to DNA double-strand breaks induced by camptothecins〔J〕.Mol Cancer Ther，2008;7(6):1440-9.

7 Bahassi EM，Ovesen JL，Riesenberg AL，et al.The checkpoint kinases Chk1 and Chk2 regulate the functional associations between hBRCA2 andRad51 in response to DNA damage〔J〕.Oncogene，2008;27(28):3977-85.

8 Wilk A，Waligorska A，Waligorski P，et al.Inhibition of ERβ induces resistance to cisplatin by enhancing Rad51-mediated DNA repair in human medulloblastoma cell lines〔J〕.PLoS One，2012;7(3):e33867.

9 高丽丽，朱长乐.乳腺癌中CHK2、P53和RAD51的表达及意义〔J〕.临床与实验病理学杂志，2014;30(3):308-10.

10 申 帅，李树根.CHK1、RAD51在结肠癌中的表达及意义〔J〕.中国现代医药杂志，2009;11(4):1-3.

11 吴 春，郭 庆，韦 玮，等.卵巢浆液性腺癌组织CHK2和RSF1蛋白表达临床意义研究〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2013;20(19):1517-9.

12 邓年丰，冯云枝.舌鳞癌组织中CHK1和RAD51的表达及临床病理意义〔J〕.口腔颌面外科杂志，2012;22(6):393-4.

13 马全富，黄晓园，高庆蕾，等.CHK1/2和PLK1蛋白在子宫内膜癌中的表达〔J〕.肿瘤防治研究，2008;35(6):424-6.

14 王玉祥，祝淑钗，王 鑫，等.CHK1和CHK2在食管癌组织中的表达〔J〕.肿瘤防治研究，2006;33(3):171-3.

15 Liu Q，Jiang H，Liu Z，et al.Berberine radiosensitizes human esophageal cancercells by downregulating homologous recombination repair protein RAD51〔J〕.PLoS One，2011;6(8):e23427.