Nd:YAG激光对根管内粪肠球菌杀菌效果的实验研究*

邢 莉,柳志文,孙早喜,杜永秀,蔡秋雁,黄 茜,潘英瑜

(1.中南大学湘雅医学院附属海口市人民医院口腔中心，海口 570208；2.中南大学湘雅医学院附属第二医院口腔中心，长沙 410011；3.海南医学院附属医院外科，海口 570102)

·经验交流·

Nd:YAG激光对根管内粪肠球菌杀菌效果的实验研究*

邢 莉1,柳志文2△,孙早喜3,杜永秀1,蔡秋雁1,黄 茜1,潘英瑜1

(1.中南大学湘雅医学院附属海口市人民医院口腔中心，海口 570208；2.中南大学湘雅医学院附属第二医院口腔中心，长沙 410011；3.海南医学院附属医院外科，海口 570102)

目的分析脉冲型Nd:YAG激光对根管内粪肠球菌的杀伤效果。方法将感染3周的32颗牙随机分为A、B、C、D共4组。A、B、C组的激光照射剂量分别为1.5、2.1、2.1 W，单次照射30 s，A、B组均照射1次，C组照射3次，每次间隔15 s；D组为2.5%NaOCl冲洗的对照组。各组选2个标本进行电镜分析。结果A、B组根管内细菌量明显减少，但有少量细菌存留于牙本质小管内；C组根管腔内细菌大部分被杀灭，无细菌存留于牙本质小管内；D组根管腔内细菌大部分被杀灭，较多细菌存留于牙本质小管。结论脉冲型Nd:YAG激光照射可有效地杀灭根管内的粪肠球菌，特别是重复照射效果更好。

肠球菌，粪；激光；根食疗法

研究表明，粪肠球菌是顽固性或继发性根管内感染的主要致病菌，是评价各种感染清除措施时常用的目标菌种[1-5]。传统的粪肠球菌清除方法的研究主要集中于机械预备清除和不同种类化学药物的冲洗，如次氯酸钠、氯已定等杀菌。Nd:YAG激光因具有良好的灭菌、去除玷污层、封闭牙本质小管的作用而被广泛研究[6-7]。本实验用不同剂量、不同作用时间的脉冲Nd:YAG激光进行根管粪肠球菌消毒，并以电镜分析Nd:YAG激光的杀菌效果。

1 材料与方法

1.1 材料 离体上颌中切牙32颗，单根管、根尖孔发育完全，无近髓龋坏死或充填体，未做过牙髓治疗，牙根无裂痕。粪肠球菌标准菌株ATCC29212(中国微生物菌种保藏中心)。

1.2 主要仪器 脉冲Nd:YAG激光治疗仪(HSM-Ⅲ型，四川航天制导公司)，S-3000N型扫描电子显微镜(日本Hitachi公司)。

1.3 粪肠球菌根管感染模型 将准备好的上颌中切牙进行高温、高压灭菌(121 ℃、15 MPa、15 min)。取样本用BHI肉汤培养48 h，确定根管内灭菌彻底。以BHI血琼脂增菌培养ATCC29212共24 h。取McFarland为2(6.0×108CFU/mL)的菌液接种于无菌根管内(40 μL /根管)，37 ℃培养，隔日更换新鲜菌液共21 d。取样本进行电镜检查，观察根管粪肠球菌感染情况。

1.4 分组与治疗 被感染的32颗离体上颌中切牙随机分为4组，各组均8颗。A、B、C组脉冲Nd:YAG激光照射剂量分别为1.5、2.1、2.1 W，每次照射时间为30 s；A、B组均照射1次，C组照射3次，每次间隔15 s；D组为对照组，以2.5% NaOCl冲洗消毒。

1.5 电镜标本的制备 用2.5%戊二醛磷酸盐缓冲液4 ℃固定治疗前后的标本4 h并保存。金钢砂车针沿标本牙根长轴纵行劈开牙根，暴露根管内牙本质壁。以乙醇梯度脱水、丙酮脱水后，CO2临界点干燥，离子溅射仪喷金。

1.6 电镜分析 电镜下观察治疗前后根管中1/3牙本质壁表面、管壁纵剖面及牙本质小管内的粪肠球菌情况。由于标本纵剖面存在高低不平区域，非均一平面，为取得清晰的观察影像，在1.5～5.5 K不同倍数下观察。

2 结 果

2.1 脉冲型Nd:YAG激光照射前 根管腔内细菌大量生长，细菌形成集落群，细菌间以丝状纤维联接成生物膜(图1A)，细菌以链条式侵入牙本质小管深处(图1B)。

A:3.0 K×;B:3.5 K×。

图1 激光照射前

2.2 A组治疗后 根管内细菌生物膜结构破坏，细菌量明显减少，但仍可见较多散在的细菌(图2A)，而牙本质小管内仅观察到少量细菌存留(图2B)。

A:3.5 K×;B:5.5 K×。

图2 A组治疗后

2.3 B组治疗后 根管腔内细菌生物膜结构被破坏，细菌量明显减少(图3A)，牙本质小管内少量细菌存留(图3B)。

A:5.0 K×;B:1.5 K×。

图3 B组治疗后

2.4 C组治疗后 根管腔内绝大部分细菌被裂解(图4A)，牙本质小管内未观察到细菌(图4B)。

A:5.0 K×;B:3.5 K×。

图4 C组治疗后

2.5 2.5%NaOCl冲洗组情况 根管腔内细菌大部分溶解(图5A)，牙本质小管深处见较多细菌(图5B)。

A:2.0 K×;B:3.0 K×。

图5 NaOCl冲洗后

3 讨 论

牙髓病、根尖周病的主要病因之一是混合细菌感染，有效地清除根管内细菌可提高治疗效果。清除根管内细菌的方式通常是机械预备、化学冲洗和药物消毒。尽管机械预备和化学冲洗能去除根管内大部分细菌、坏死牙髓组织，但无法清除牙本质小管深处等细微结构内的细菌及其毒素。氢氧化钙制剂虽然具有良好的杀菌性、安全性，刺激性小，但溶解性较差，发挥效能的钙离子与氢氧根离子释放的速度缓慢，是慢性消毒剂[8-12]。因此，学者们不断地探索新的根管消毒方法：微波消毒、高频电刀消毒、激光等。脉冲Nd:YAG激光具有柔韧精细的光纤输出末端，方便口腔环境的临床操作，能够插入根管至根尖孔区，对根管起到消毒、清理、成形、封闭牙本质小管口、减轻术后疼痛反应并促进根尖周组织的愈合等，在根管治疗中独具优势[4,6-7，9]。

实验发现Nd:YAG激光和次氯酸钠溶液均能破坏根管腔内粪肠球菌生物膜结构，起到杀菌效应,与国内外学者研究的结果基本一致[4,6-7,11,13]。激光重复照射时，其杀菌效果更佳，特别是对牙本质小管深处细菌的作用效果强，如C组的Nd:YAG激光治疗效果优于A、B组。尽管2.5%次氯酸钠冲洗治疗也具有根管腔内细菌杀菌效果，但对牙本质小管深处细菌的杀灭效果差，如D组治疗后，牙本质小管深处仍有较多细菌，而A、B组较少。激光剂量与杀菌效果无明显关系，如激光剂量为1.5、2.1 W单次治疗时，A、B组根管内牙本质小管内可观察到仅有少量细菌存留，而D组牙本质小管深处可观察到仍存留有较多的细菌。此外，激光杀菌快速、便捷，不良反应少，而次氯酸钠具有较强的刺激性和腐蚀性，冲出根尖孔时对细胞有损害。由此可见，使用激光进行根管消毒、根管内感染的控制较次氯酸钠具有一定的优越性。

脉冲Nd:YAG激光可快速、有效地杀灭感染根管内生物膜状态下的粪肠球菌，激光穿透力强，可作用于根管深部，对侵入牙本质小管深处的细菌杀灭效果更佳,在根管治疗中具有广阔的应用前景[6-7，9]。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2015.26.027

海口市重点科技计划项目(2009-049-4)。

：邢莉(1973-)，硕士，副主任医师，主要从事口腔基础与临床研究。△

，E-mail:Liuzw5048@aliyun.com。

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1671-8348(2015)26-3682-03

2015-03-08

2015-05-16)