高效液相色谱法测定通塞益脑口服液中β-细辛脑含量

王 争，王曙东，刘文雅，任海祥

（中国人民解放军南京军区南京总医院制剂科，江苏南京 210002）

高效液相色谱法测定通塞益脑口服液中β-细辛脑含量

王 争，王曙东，刘文雅，任海祥

（中国人民解放军南京军区南京总医院制剂科，江苏南京 210002）

目的建立测定通塞益脑口服液中石菖蒲所含 β-细辛脑含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为 Hedera-ODS-2 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 βm），流动相为甲醇-水（55∶45），检测波长257 nm。结果β-细辛脑质量浓度在10.5～105 βg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好（r=0.999 9），平均加样回收率为99.49%，RSD为2.45%（n=6）。结论该方法简便、快速、重复性好，分离度好，测定结果准确可靠，可用于通塞益脑口服液中β-细辛脑的含量测定。

通塞益脑口服液；高效液相色谱法；β-细辛脑

通塞益脑口服液是由石菖蒲及其他中药组成的复方制剂，源于南京军区著名老中医于德勇教授的临床经验方，具有开窍豁痰、醒脑益智等功效，用于急性缺血性脑损伤及中风的治疗，疗效肯定、安全可靠，深受患者欢迎[1～2]。方中石菖蒲具有免疫、抑菌、抗癌、抗突变等药理作用[3-4]。石菖蒲中的挥发油成分α-细辛脑具有镇静催眠、抗惊厥等作用，对心血管及呼吸系统均有活性[5]。本试验中建立了同时测定通塞益脑口服液中α-细辛脑含量的高效液相色谱法，供制剂的质量控制参考。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪，包括 Waters 1525型双泵，Waters 2487型紫外检测器，Waters 717型自动进样器，Waters Empower色谱软件；Mettler Toledo AE240型十万分之一电子天平；KQ2200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。通塞益脑口服液（南京军区南京总医院制剂科自制，批号为20130215，20130220，20130222）；α-细辛脑对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为100298-200001）；甲醇为色谱纯，水为双蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[6]

色谱柱：Hedera-ODS-2 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（55∶45）；检测波长：257 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：25℃；进样量：10 μL。理论板数按α-细辛脑峰计算不低于2 000。

2.2 溶液制备

取α-细辛脑对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含105 μg的对照品溶液。精密吸取样品5 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声30 min，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。另按处方量，称取除石菖蒲外的其余药材，按制剂工艺及供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验：取2.2项下3种溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，色谱图见图1。可见，在此色谱条件下，阴性对照品溶液对测定无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：精密吸取对照品溶液（105 μg/mL）1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取 10 μL，注入液相色谱仪，按2.1项下色谱条件进样测定峰面积，以峰面积积分值（A）对对照品溶液质量浓度（C）进行线性回归，得回归方程 A=89 402 414 C-58 941，r=0.999 9(n=6)。结果表明，α-细辛脑质量浓度在 10.5～105 μg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：取同一 α-细辛脑对照品溶液（42 μg/mL）10 μL，在相同色谱条件下重复进样测定6次。结果峰面积的 RSD为1.24%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：精密吸取同一批样品6份，依法制备供试品溶液并按拟订色谱条件进样测定。结果α-细辛脑平均含量的 RSD为2.24%（n=6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，10 h时依法进样测定。结果 α-细辛脑含量的 RSD为2.03%（n=6），表明供试品溶液在10 h内稳定。

加样回收试验：取已知含量的样品共6份，精密称定，置5 mL容量瓶中，分别加入对照品贮备液1.0，1.2，1.4 mL，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法进样测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 β-细辛脑加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

称取3批样品，精密称定，依法制备供试品溶液并以外标法测定峰面积，计算含量。结果批号为20130215，20130220，20130222的样品中α-细辛脑含量分别为39.45，39.29，39.11 μg/mL。

3 讨论

在国家标准[7]中，细辛脑的含量测定采用分光光度法，采用给定的吸收系数，根据吸光度值来测定含量。由于实验仪器和实验环境的差异，测得的含量存在较大误差，可靠性不如高效液相色谱法。

关于流动相的确定，曾尝试了流动相为乙腈-水（44∶56），结果α-细辛脑于18 min左右出峰，但与相邻两色谱峰的分离度较低。考虑换成甲醇溶液以改善峰形[8-13]，调整流动相为甲醇 -水（55∶45），此时峰形变窄、分离良好，且峰形对称、重复性好。

方法学考察表明，所建立的方法具有良好的线性、精密度、重复性、稳定性，且回收率高，可对通塞益脑口服液中α-细辛脑的含量进行有效、准确地定量，从而对产品进行有效的质量控制。

[1]苏全胜，赵文新.通塞益脑口服液治疗脑梗塞的疗效观察[J].中成药，1997，19(6)：23-25.

[2]蔡松泉，苏全胜.通塞益脑液治疗急性脑梗塞的临床研究[J].江苏中医，1991，12(11)：10-11.

[3]王爱芹.实用中西医结合妇科学[M].北京：北京出版社，1996：142.

[4]张迎春，邵冬珊.中药人工周期疗法治疗不孕症研究进展[J].吉林中医药，1991，11(5)：39-40.

[5]王 争，王曙东，侯中华.石菖蒲的成分及药理作用的研究[J].中国药业，2012，21(11)：1-3.

[6]柯雪红，魏 刚，方永奇.HPLC测定石菖蒲药材中β-细辛醚、β-细辛醚的含量[J].中成药，2002，24(10)：791-792.

[7]吴 闯.细辛脑研究进展[J].中国药学杂志，1997，32(3)：129-132.

[8]王 勤，袁小龙.HPLC测定增液承气口服液中梓醇含量[J].中国中医药信息杂志，2014，21(1)：83-87.

[9]郝少君，李文俊，范莉莉，等.HPLC法测定康肾口服液中人参皂苷的含量[J].天津中医药，2014，31(3)：181-183.

[10]柳梦婷，方 婧，吴宏伟，等.高效液相色谱法同时检测石菖蒲中β-细辛醚、β-细辛醚的含量[J].中国实验方剂学杂志，2014，20(19)：75-78.

[11]贾树娟.HPLC测定细辛脑注射液有关物质的含量[J].中国医药指南，2013，16(11)：114-115.

[12]李晓光，于彩岩，李志杰.HPLC法测定β-细辛脑的含量[J].内蒙古石油化工，2009，35(20)：21-22.

[13]成 丹.反相高效液相色谱法测定注射用细辛脑的含量[J].医药导报，2004，23(8)：587-588.

Content of α-Asarone in Tongsaiyinao Oral Solution by HPLC

Wang Zheng,Wang Shudong,Liu Wenya,Ren Haixiang
(Department of Preparation,Nanjing General Hospital of Nanjing Military Area Command,Nanjing,Jiangsu,China 210002)

Objective To establish a method for the content determination of α-asarone in Tongsaiyinao Oral Solution.M ethods The Hedera-ODS-2 C18culumn(250 mm×4.6mm,5 μm）column was used.The mobile phases consisted of methanol and water(55∶45) and the detection wavelength was at 257 nm.Results α-asarone showed a linear relationship within the concentration range of 10.5～105 μg/mL(r=0.999 9).The average recovery was 99.49%,and RSD=2.45%(n=6).Conclusion The proposed method appered to be simple,rapid,reliable,sensitive and accurate.It is available to the content determination of Tongsaiyinao Oral Solution.

Tongsaiyinao Oral Solution;HPLC;α-asarone

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)19-0044-02

王争(1989-)，女，江苏南京人，大学本科，药师，现从事中药制剂研究工作，(电话)025-8086316(电子信箱) wangzheng198921＠163.com；任海祥，硕士研究生，副主任药师，现从事中药制剂研究工作，本文通讯作者，(电话)025-80861297 (电子信箱)RHX1111＠sin.com。

2015-01-27；

2015-03-30)