三种鸡马立克氏病疫苗的攻毒保护试验比较研究

孙玉章，代永联，吴光玉，衣服德，王永玲

（1.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛　 266032；2.青岛市畜牧兽医研究所，山东青岛　266100；3.科尔沁右翼中旗动物卫生监督所，内蒙古兴安盟　029400）

三种鸡马立克氏病疫苗的攻毒保护试验比较研究

孙玉章1，代永联2，吴光玉3，衣服德2，王永玲1

（1.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032；2.青岛市畜牧兽医研究所，山东青岛266100；3.科尔沁右翼中旗动物卫生监督所，内蒙古兴安盟029400）

为比较3种商品化马立克氏病疫苗的免疫效果，本研究将150只1日龄AA+肉鸡随机分为攻毒对照组、乾元浩疫苗组、梅里亚疫苗组、瑞普疫苗组和空白对照组5组，并按厂家说明剂量进行马立克氏病疫苗免疫。8日龄时进行马立克氏病超强毒Md5株攻毒，每天观察各组临床症状，对病死鸡进行剖检和病理组织学观察。根据免疫攻毒后的临床观察、剖检病变和病理切片等综合分析，梅里亚疫苗组的保护指数略高于乾元浩疫苗组和瑞普疫苗组，差异不显著（P ＞ 0.05），说明不同厂家生产的鸡马立克氏病疫苗对Md5超强毒株的攻击具有相似的保护效果。因此在生产中使用国产马立克氏病疫苗或进口马立克氏病疫苗均能对我国当前流行的马立克氏病有较好的保护效果。

马立克氏病；超强毒株；商品化疫苗；免疫效果；病理学观察

马立克氏病（Marek’s disease，MD）是由疱疹病毒科马立克氏病病毒（Marek’s disease virus，MDV）引起鸡的一种高度接触传染性T淋巴细胞增生性肿瘤疾病，以内脏器官、外周神经、性腺、虹膜、肌肉和皮肤单独或多发的淋巴样细胞浸润并形成大体肿瘤病变为特征［1-3］。该病存在于世界上所有养禽国家和地区，是一种严重危害集约化家禽养殖业的传染病。虽然MD的疫苗接种是兽医学成功控制家禽疫病的典型范例，但由于本病的意外暴发以及随着MDV毒力的不断增强可能导致的免疫失败和免疫抑制所造成的严重经济损失，本病仍然是全世界家禽养殖业关注的焦点［1］。

MDV是一群细胞结合性的α-疱疹病毒，但具有γ-疱疹病毒的嗜淋巴特性。根据免疫琼脂扩散试验、免疫荧光试验和型特异单克隆抗体可将MDV分离株分成І、Ⅱ和Ⅲ 3种血清型［3］。І型MDV包括强毒MDV分离株及其人工或自然致弱毒株；Ⅱ型为从鸡体分离的无致病性MDV毒株；Ⅲ型包括火鸡疱疹病毒（HVT）及其变异株。根据免疫鸡群攻毒保护试验，又可将І型MDV分为四种不同毒力的类型：温和型（mMDV）、强毒型（vMDV）、超强毒型（vvMDV）和特超强毒型（vv+MDV）。目前我国尚无vv+MDV的分离报道［4］。作为一种可用疫苗防治的肿瘤性疫病，1日龄接种疫苗是有效控制MD和减少经济损失的主要手段。本研究通过对3种商品化MD疫苗进行的免疫效力比较试验，旨在比较不同商品化MD疫苗的免疫效果，为当前我国MD的防控提供有益的借鉴。

1　材料与方法

1.1试验动物、疫苗和病毒株

1日龄AA+肉鸡由诸城外贸有限责任公司提供种蛋并孵化。鸡马立克氏病活疫苗（CVІ988/ Rispens株）分别由梅里亚动物保健有限公司和乾元浩生物股份有限公司生产；鸡马立克氏病Ⅰ、Ⅲ型二价活疫苗（CVІ988+FC126株）由天津瑞普生物技术股份有限公司生产；鸡马立克氏病超强毒Md5株由山东农业大学动物医学院提供，液氮保存。

1.2试验分组与攻毒

将150只1日龄AA+肉鸡随机分为5个组，分别为攻毒对照组、乾元浩疫苗组、梅里亚疫苗组、瑞普疫苗组和空白对照组，每组30只，分别隔离饲养。3种疫苗同时按厂家说明剂量接种免疫1日龄AA+肉鸡，8日龄时以1 500 PFU/只的剂量分别对试验组的AA+肉鸡腹腔注射马立克氏病超强毒Md5株，空白对照组腹腔注射等量生理盐水。所有AA+肉鸡分别在隔离器中饲养至67 d，分别于1 d、7 d、15 d和67 d称量体重并记录。攻毒后每天观察所有试验组鸡的精神状态，记录其发病和死亡情况。

1.3剖检和病理组织学检测

对试验期间死亡的鸡只逐只剖检，观察并记录心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、腺胃和肌胃等组织器官的大体病变。试验期结束后（67日龄），对所有实验组的鸡只分别取血并进行常规血相观察。将所有试验组的鸡只全部剖杀后，取疑似病变组织器官经甲醛溶液固定、常规法石蜡包埋制片、HE染色后光镜下观察各组织器官的病理组织学变化。

2　结果

2.1试验组的临床症状

攻毒对照组的鸡只在攻毒后第2周开始出现厌食、精神萎顿、羽毛蓬乱和体型消瘦，攻毒对照组攻毒后第67天的平均体重相比空白对照组体重平均减少10%～20%，比免疫攻毒组平均减少7%～15%（数据未发表）。攻毒对照组的鸡只眼观可见关节肿大，后期可观察到马立克氏病比较典型的劈叉症状（图1A）。攻毒对照组的鸡只最早于攻毒后第21天发生死亡，死亡高峰期集中出现在攻毒后第32～50天，病死率为86.67%（26/30）。免疫攻毒组的鸡只均有不同程度的出现关节肿大和体型消瘦，在攻毒后第6周开始出现零星死亡的鸡只，其中梅里亚疫苗组的病死率（6.67%）略低于乾元浩疫苗组（13.33%）和瑞普疫苗组（10.00%），差异不显著（P ＞ 0.05）。

图1 攻毒对照组的临床症状和病理剖检

2.2病理解剖

攻毒对照组在攻毒后第3周开始出现死亡病例，剖检未见明显的眼观肿瘤病变，可见肝、肾、脾和法氏囊等不同程度的肿大，肺轻度淤血，腺胃黏膜肿胀，轻微出血。攻毒后第6～7周出现的死亡病例剖检可见肝、脾、肾等肿大，肝脏出现多个白色结节状肿瘤（图1B），腺胃肿胀出血，肌胃角质膜易剥离。免疫攻毒组在攻毒后出现的死亡病例剖检虽可见肝、脾、肾等轻度肿大，腺胃壁增厚，但大体病变轻微，均未出现坏死和肿瘤。

2.3血相与病理组织学观察

攻毒对照组的鸡只血细胞中淋巴细胞数量明显增多；免疫攻毒组的血细胞中嗜酸性粒细胞也较空白对照组多（图2）。免疫攻毒组肝脏切片均可见较小的炎性灶，攻毒对照组肝细胞变性、坏死，淋巴细胞大量集聚，出现较多的炎性灶（图3A）。免疫攻毒组肾脏均出现零星的炎性灶，攻毒对照组可见肾小管局部坏死，梅里亚疫苗组有轻微的淤血和炎性细胞浸润（图4C）；免疫攻毒组肺脏均有炎性浸润，梅里亚疫苗组有轻微淤血，瑞普疫苗组炎性灶最少（图5D）。

图2 攻毒各组鸡的血液学检验

图3 攻毒各组鸡的肝组织的病理学特征（HE，200 ×）

图4 攻毒各组鸡的肾组织的病理学特征（HE，200 ×）

图5 攻毒各组鸡的肾组织的病理学特征（HE，200 ×）

3　讨论与分析

由于3种血清型的MDV之间具有一定的交叉保护，因此从上世纪70年代以来，火鸡疱疹病毒（herpes virus of turkey，HVT）、HVT+SB-1双价疫苗和CVІ988/Rispens株弱毒活疫苗等都曾先后成为有效预防MD的疫苗。但广泛使用疫苗也促进了MDV的进化，从上世纪90年代开始欧美地区陆续出现CVІ988/Rispens株弱毒活疫苗都不能完全保护的超强毒株和特超强毒株［5］，给世界养禽业造成巨大损失。由于我国的养禽情况更为复杂，如MDV野毒株毒力的不断增强、幼仔鸡的早期感染、MD疫苗的使用不当以及大环境生物安全措施的缺位等，MD的流行每年给中国的养禽业造成的损失数以百亿计。

免疫攻毒试验结果表明，超强MDV病毒株的感染可以造成严重的免疫器官衰竭和明显的免疫抑制，通过反复发生溶细胞性感染引发淋巴器官受损，产生转化感染并诱发肿瘤形成［6］。CVІ988/ Rispens株疫苗仍是目前预防MD超强毒株感染效果最好的疫苗之一，能够比其它MD疫苗提供更好的免疫保护力，有效地预防大多数MDV流行毒株的侵袭。本研究中不同厂家生产的鸡马立克氏病疫苗均能够对MD超强毒Md5株的攻击起到相近的保护效果。因此在生产中使用国产MD疫苗或进口MD疫苗均能对我国当前流行的MD有较好的保护效果。但也有研究指出，MDV强毒株感染和CVІ988/Rispens株在鸡体内的复制是相互独立的［7］，使用CVІ988/Rispens株疫苗也会造成机体免疫器官或非免疫器官出现不同程度的淋巴细胞浸润，因此可能会对鸡的生长和免疫产生一定的影响［8］。在本研究中，3组免疫攻毒组均出现了与攻毒对照组相似的病变，尽管剖检未发现肿瘤病变，但疫苗的毒力效应不可忽视。因此有必要开发MD新型弱毒疫苗或基因缺失苗，对于我国预防和控制MD的发生和减少养禽业的损失具有重要意义。同时应该意识到，疫苗的使用不能从根本上阻断MDV的感染和传播，必须采取培育新型遗传抗性品种［9］和加强养禽场的生物安全防控［10］等措施来控制MD的发生和流行。

［1］Saif Y M. 禽病学［M］. 苏敬良，高福，索勋，译. 12版. 北京： 中国农业出版社，2012： 522-599.

［2］白文彬，于康震. 动物传染病诊断学［M］. 北京： 中国农业出版社，2002： 228-233.

［3］韦平，秦爱建. 重要动物病毒分子生物学［M］. 北京： 科学出版社，2008： 107-132.

［4］崔治中. 中国鸡群病毒性肿瘤病及防控研究［M］. 北京：中国农业出版社，2012.

［5］Haq K，Fear T，Іbraheem A，et al. Іnfluence of vaccination with CVІ988/Rispens on load and replication of a very virulent Marek's disease virus strain in feathers of chickens ［J］. Avian Pathol，2012，41（1）： 69-75.

［6］贺君君，滕丽琼，韦平，等.马立克氏病病毒体内复制动力学研究进展［J］. 中国家禽，2011，33（5）： 47-51.

［7］Davison F，Nair V. Use of Marek’s disease vaccines： could they be driving the virus to increasing virulence？ ［J］. Expert Rev Vaccines，2005，4（1）： 77-88.

［8］郑永胜，张艳萍，李志杰，等. 鸡马立克氏病病毒疫苗株对强毒株的复制抑制作用［J］. 中国预防兽医学报，2014，36（1）：7-10.

［9］ 金元昌，陈壮，李玉峰，等. 抗性选育协同疫苗免疫对鸡羽囊马立克病毒载量的影响［J］. 畜牧兽医学报，2015，46（5）：836-840.

［10］ 周蛟. 我国当前禽病流行概况及防控对策［J］. 兽医导刊，2014，（12）： 37-38.

（责任编辑：胡藕祥）

Comparison of Vaccine Eff cacy in Chickens Challenged with Very Virulent MDV Strain Md5

Sun Yuzhang1，Dai Yonglian2，Wu Guangyu3，Yi Fude2，Wang Yongling1
（1. China Animal Health & Epidemiology Center，Qingdao，Shandong 266032；2. Qingdao Іnstitute of Animal Husbandry & Veterinary Science，Qingdao，Shandong 266100；3. Horqin Right Wing Middle Banner Іnstitute of Animal Health Supervision，Xing'an League，Іnner Mongolia 029400）

The present study was conducted to compare the vaccine efficacy in AA+ chickens challenged with very virulent MDV strain Md5. 150 AA+ chickens were randomly divided into 5 groups： challenge control group，QYH vaccine group，Merial vaccine group，Ringpu vaccine group and unvaccinated control group. Chickens were vaccinated with each three types of MD vaccine at 1 day old，and were challenged with Md5 strain at 8 days old. During 60 days after challenge，all dead chickens were collected and dissected for histopathology examination. The result showed that there was no obvious difference in immune-protection among the three MD vaccines （P ＞ 0.05），and the domestic MD vaccine was as efficient as imported MD vaccine. Nevertheless，it is still necessary to develop novel non-toxicity vaccines or gene-deleted vaccines in the future.

Marek's disease；very virulent strain；commercial vaccine；vaccine efficacy；histopathology

S859.79+7

B

1005-944X（2015）11-0087-04

中央财政农业技术推广项目（CA201403025）；山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金（SDAІT-13-011-13）

王永玲