伴有长期吸烟史食管癌患者中VEGF和Ki-67水平的临床意义

孙小莉 曹晓侠

食管癌(esophageal carcinoma)近年来已成为人群中常见的恶性肿瘤，发病率日趋明显，但发病的原因至今尚未完全清楚，可能和人们生活的环境、年龄的大小、饮食的习惯、生活的不同嗜好及遗传等因素有关。有学者研究表明食管癌患者中许多伴有长期的吸烟史，推测吸烟可能和癌变密切相关［1］。张芸等［2］通过实验表明血管内皮细胞生长因子(VEGF)在食管癌患者体内浓度表现出一定的变化性，导致食管癌细胞的异常增殖而促进癌变发展。蔡开贵等［3］通过研究表明增殖细胞核抗原Ki-67作为一种和细胞周期相关的蛋白，在食管等附近腺癌组织中显现出阳性的表达，而正常组织中则没有，说明Ki-67可能参与食管癌的发生与发展。本临床实验选取有长期吸烟史的食管癌患者作为主要研究对象，并对VEGF和Ki-67进行临床检测，并对比分析，试图探究这两指标在伴吸烟史食管癌患者中表达的临床意义，为临床检测预防治疗提供帮助。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2009年6月-2013年9月来我院经食管镜和病理检查确诊的食管癌患者并活检取材癌变组织标本和血样标本各80例，其中男性标本44例，30例有长期吸烟史，14例无吸烟史;女性36例，14例有吸烟史，22例无吸烟史。同时收集同期正常的食管组织和血清标本各20例，其中男性标本13例，女性标本7例，均无吸烟史。患者年龄34～65岁，平均(48.43±11.13)岁，均排除家族遗传史。

1.2 实验方法

血清标本来源:各组患者均于清晨6:00～8:00空腹静脉采血5 mL，2 h内于离心机4 000 r/min离心5 min，分离并收集血清后于-80℃保存。癌变组织标本来源:食管镜检查，通过食管镜镜头进入人体食道内观察，检查操作时头部应高出台面，将食管镜沿口腔右侧插入喉咽部右侧的梨状窝，将食管镜的远端逐渐移向中线，于杓状软骨之后将镜管口向前下推进即达食管口，当患者做吞咽动作时食管口自动张开，看清食管入口空隙后，立即将管端导入食管内，发现异常部位取少部分组织制作标本。采取酶联免疫分析法(ELISA)检测血管内皮生长因子(VEGF);采取免疫组化染色法测定增殖细胞核抗原Ki-67的阳性表达率。实验试剂:VEGF免疫分析试剂盒、鼠抗人Ki-67单克隆抗体、羊抗鼠标记二抗、DAB显色剂，免疫组化试剂盒，均购置于福州迈新生物科技有限公司。

1.3 判定标准

Ki-67阳性细胞:免疫组化染色后细胞核有明显棕黄色颗粒的出现视为阳性标准，胞质染成棕黄色不视为阳性，并且对肿瘤边缘非特异性染色予以排除。随机选取10个高倍视野计数，-表示胞核内无棕黄色颗粒或颗粒数≤5%;+表示阳性率为5%～25%;++表示阳性率为25%～50%;+++表示阳性率 ＞50%。阳性率越高说明癌细胞增殖越活跃。

1.4 统计方法

本临床试验数据中计数资料用统计分析软件SPSS 19.0处理，组间差异分析采用卡方检验，P＜0.05判定为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血管内皮细胞生长因子(VEGF)检测结果

食管癌患者血清中VEGF的表达水平明显高于正常对照组(P＜0.01)。伴有吸烟史的食管癌男性患者比起无吸烟史的男性患者，VEGF的表达水平明显升高(P＜0.05);伴有吸烟史的食管癌女性患者血清中VEGF含量明显高于无吸烟史的女性患者(P＜0.05);伴长期吸烟史的男性食管癌组和女性食管癌组之间，无吸烟史的男性食管癌组和女性食管癌组之间比较，差异性均不明显(P＞0.05)。血清VEGF水平的变化提示VEGF在食管癌的发病中扮演重要角色，且吸烟和食管癌的发生密切相关。见表1。

表1 血管内皮生长因子(VEGF)在血清中的表达水平(±s，pg/mL)

表1 血管内皮生长因子(VEGF)在血清中的表达水平(±s，pg/mL)

注:S代表伴长期吸烟史组，NS代表无吸烟史组。*为A和B比较P＜0.01;男S和男NS比较P＜0.05;女S和女NS比较P＜0.05;男S和女S比较P＞0.05;男NS和女NS比较P＞0.05。

组别例数 VEGF表达水平 P值正常组(A)20男13 106.34 ±31.54＜0.01*女7 98.12 ±19.22 22 346.43 ±23.84食管癌组(B)80男(S)30 434.20 ±21.61＜0.05男(NS)14 351.41 ±24.14女(S)14 420.25 ±31.67＜0.05女(NS)

2.2 增殖细胞核抗原Ki-67的检测结果

Ki-67在20名正常患者中仅有3例表达，表达率为15.0%;Ki-67在80名食管癌患者中有66例表达，表达率为82.5%;食管癌患者癌变组织中Ki-67的阳性表达率明显高于正常对照组，差异有统计学意义(P＜0.01)。伴有吸烟史的食管癌男性患者比起无吸烟史的男性患者，整体阳性率分别为83.3%和78.6%，无明显差异，但＞50%的阳性表达率分别为36.7%和21.2%，伴吸烟史的Ki-67的表达水平明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05);伴有吸烟史的食管癌女性患者比起无吸烟史的女性患者，整体阳性率分别为85.7%和81.8%，无明显差异，但＞50%的阳性表达率分别为35.7%和22.7%，伴吸烟史的Ki-67的表达水平明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05);伴长期吸烟史的男性食管癌组和女性食管癌组之间，无吸烟史的男性食管癌组和女性食管癌组之间比较，差异性均不明显，无统计学意义(P＞0.05)。见表2。

表2 食管癌组织中Ki-67的阳性表达/例

3 讨论

食管癌主要表现为食管黏膜上皮细胞病变性的恶性肿瘤，发病部位主要为局部病变，在我国发病的人群主要是50～69岁的中老年人，而且发病的趋势日益增加，发病的原因日趋复杂，临床常见进行性吞咽梗阻，胸骨后闷胀和疼痛等症状［4］。虽然对于食管癌发病原因还未完全探明，但是大量研究证明，长期的吸烟史是食管癌一个很重要的诱发性因素。Kaneko等［5］通过研究吸烟对食管细胞发育障碍的影响，表明烟草中的致癌物质有可能被食管吸收后而直接作用于食管局部，从而引发病变。现已发现香烟的烟和焦油含有多种致癌物，这些物质可直接攻击细胞的脂肪、蛋白质和核酸等成分，引起细胞损伤和病变的发生。Kapur等［6］印度学者通过对烟草和槟榔常接触地区的人们的食管癌风险率的研究，发现长期接触烟草或长期咀嚼槟榔的人群有染色体基因片段的改变，出现了细胞加速增殖和分化，癌病病灶的高速扩增，进而影响着食管癌的发生发展。本实验在此基础上研究伴有长期吸烟史的食管癌患者中VEGF和Ki-67因子变化，旨在探究吸烟和食管癌的具体联系和作用机制。

血管内皮生长因子(VEGF)作为一种血管内皮细胞特异性的肝素结合因子，能直接作用于血管内皮细胞促进血管内皮细胞增殖，增加血管通透性，从而诱导体内血管的重新生成。肿瘤内新生的血管和淋巴管都是通过血管的生成和淋巴管的生成实现的，并且在肿瘤的生长和扩散中起着非常重要的作用，因此VEGF在促进肿瘤血管形成同时促进了肿瘤的生长和转移。贺春雨等［7］通过重组血管内皮抑制素，研究其对食管癌细胞株体外生长和血管内皮生长因子的影响作用，发现抑制素不但能抑制癌细胞的增殖，而且下调了血管内皮生长因子的水平，表明可能通过血管生长因子而间接影响癌细胞增殖。吴如芳等［8］通过对食管癌患者血清中VEGF的表达水平的检测，显示食管癌患者血清中 VEGF表达率明显高于正常体检者，表明VEGF可能与食管癌的发生有关。由此可见食管癌的发生和VEGF呈密切正相关的关系。

增殖细胞核抗原Ki-67作为一种细胞相关的核抗原，和细胞的有丝分裂直接相关，在细胞增殖中不可缺少，但其作用于细胞增殖的诱导因素和确切机制尚不完全清楚。临床研究中Ki-67抗原是多种恶性肿瘤研究中的热门生物指标，通过对Ki-67抗原的检测可以了解恶性癌变细胞增殖活动。杨爱萍等［9］通过对Ki-67和食管鳞癌的发病联系的研究，发现Ki-67在癌病灶中阳性率明显高于正常组织，并随着癌变组织浸润程度的加深表达率明显上升，从而证明Ki-67可以反映癌变细胞的增殖情况。姜功前等［10］通过对48例癌变患者和正常患者中Ki-67的临床检测对比研究，发现癌组织中Ki-67 mRNA的表达水平显著高于正常组织，Ki-67 mRNA的表达情况在高分化组、中分化组、低分化组显示出了不同的表达率，并且与食管癌分化程度密切相关。由此可见Ki-67在食管癌的发病中有重要意义，可作为一项重要临床检测指标。

本实验选取近年来发病率日趋升高的食管癌患者作为研究对象，通过检查得知大多数人都伴有长期的吸烟史，并通过对患者分组鉴别并检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)和癌变组织中增值细胞核抗原Ki-67的阳性表达水平，结果显示出食管癌患者血清中VEGF的表达水平明显高于正常对照组(P＜0.01)，证明VEGF的表达水平在食管癌患者的发病进程扮演重要角色，可能通过直接或间接的方式加速局部组织血管的新生导致癌变的快速扩展;伴有吸烟史的食管癌男性患者比起无吸烟史的男性患者，VEGF的表达水平明显升高(P＜0.05)，提示吸烟可以诱导食管癌病变的发生发展，并且44例男性观察对象中伴吸烟史的有30例，比例为68.2%，可见吸烟是男性发病人群中的非常关键的因素;伴有吸烟史的食管癌女性患者血清中VEGF含量明显高于无吸烟史的女性患者(P＜0.05)，提示女性人群中吸烟也能加速癌变的发展并且癌变的程度和血清中VEGF显示出正相关趋势;伴长期吸烟史的男性食管癌患者和伴长期吸烟史女性患者之间，无吸烟史的男性食管癌组和无吸烟史女性食管癌组之间比较，基本无差异(P＞0.05)，提示食管癌的发病率和性别无直接关系。Ki-67的阳性表达率在食管癌患者癌变组织中明显高于正常对照组(P＜0.01)，提示Ki-67和食管癌病变的发生有密切关系，显示出正相关的关系;伴有吸烟史的食管癌男性患者比起无吸烟史的男性患者，整体阳性率分别为83.3%和78.6%，无明显差异，但＞50%的阳性表达率分别为36.7%和 21.2%，显示出明显的差异(P＜0.05)，提示男性患者吸烟对食管癌的发生起到重要作用，尤其能加速癌变的发展进程，导致癌变程度的加重;伴有吸烟史的食管癌女性患者比起无吸烟史的女性患者，整体阳性率分别为85.7%和81.8%，无明显差异，但＞50%的阳性表达率分别为35.7%和22.7%，显示出明显的差异(P＜0.05)，提示女性患者吸烟同样能加速癌变发展;伴长期吸烟史的男性食管癌组和伴长期吸烟史女性食管癌组之间，无吸烟史的男性食管癌组和无吸烟史女性食管癌组之间比较，差异性均不明显(P＞0.05)，提示性别和癌变发生发展无关，且性别对患者癌变组织中Ki-67的阳性表达率影响不大。

本研究通过临床观察并检测伴有长期吸烟史的食管癌患者血清中血管内皮生长因子(VEGF)和癌变组织中增殖细胞核抗原Ki-67的表达水平，分析得出癌变的发展程度与VEGF和Ki-67呈现出正相关的趋势，并且吸烟在食管癌疾病的发生和发展中起到重要的作用，尤其在癌变的发展中可加快癌变组织的恶化程度。

［1］万 瑛.CHEK2基因多态性与食管癌淋巴结转移危险因素的研究〔D〕.江苏大学，2013.

［2］张 芸.缺氧对食管癌Eca109细胞系VEGF和Survivin表达的影响〔D〕.哈尔滨医科大学，2012.

［3］蔡开贵.MCM2、Rb、Ki-67在喉鳞癌组织中的表达及意义〔D〕.南昌大学医学院，2008.

［4］王 茜，景学安，李 栋.食管癌危险因素流行病学研究进展〔J〕.泰山医学院学报，2007，28(12):999-1002.

［5］Kaneko K，Murakami Y，Katagiri.Does daily alcohol and/or cigarette consumption cause low-grade dysplasia，a precursor of esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Journal of Clinical Gastroenterology，2010，44(3):173-179.

［6］Kapur S.Genome-wide analysis of chromosomal alterations in patients with esophageal squamous cell carcinoma exposed to tobacco and betel quid from high-risk area in India〔J〕.Mutation Research，2010，696(2):130-138.

［7］贺春雨，胡晓娜，王 雯，等.重组血管内皮抑素对人食管癌细胞株抑制及对乏氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子表达的影响〔J〕.中华实验外科杂志，2015，32(2):361-363.

［8］吴如芳.血清DLL4与 VEGF水平与食管癌的相关性研究〔J〕.大家健康，2015，9(4):55-56.

［9］杨爱萍，姜 藻，陈 静，等.Musashi-1，Ki-67的表达与食管鳞癌的临床意义〔J〕.中国现代医生，2009，47(32):57-60.

［10］姜功前.SYK和Ki-67在食管鳞状细胞癌中的表达与意义〔D〕.郑州大学，2011.