良性甲状腺疾病患者血清IgE、FcεRIα及其抗体水平分析

王玉萍,　崔泽林,　蔺丽慧,　王　娟,　李　佳,　彭　霞,　谢国钢,　李　莉

良性甲状腺疾病患者血清IgE、FcεRIα及其抗体水平分析

王玉萍,崔泽林,蔺丽慧,王娟,李佳,彭霞,谢国钢,李莉

(上海交通大学附属第一人民医院检验科,上海 200080)

摘要：目的分析免疫球蛋白(IgE)、FcεRIα及其抗体水平在良性甲状腺疾病患者血清中的表达情况，探讨其与良性甲状腺疾病的相关性。方法收集41例Graves′病(GD)、36例桥本甲状腺炎(HT)和36例甲状腺结节(TN)患者以及60名健康体检者(正常对照组)的临床资料及血清，采用竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清FcεRIα、抗IgE抗体和抗FcεRI抗体水平，采用速率散射比浊法检测血清IgE水平，分析4组间的表达差异并评估其与良性甲状腺疾病的相关性。结果GD组、HT组及TN组IgE水平与正常对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)，而FcεRIα水平和抗IgE抗体水平均明显高于正常对照组(P<0.05)；GD组抗FcεRI抗体水平明显高于正常对照组。HT组及TN组血清IgE、FcεRIα、抗IgE抗体及抗FcεRI抗体与甲状腺激素抗体(TRAb)均无相关性。GD组血清FcεRIα与TRAb呈明显负相关(rs=-0.350，P<0.05)，抗IgE抗体和抗FcεRI抗体与TRAb均呈明显正相关(rs值分别为0.546、0.520，P均<0.05)。结论良性甲状腺疾病患者血清中高表达IgE、FcεRIα及其抗体，并且在GD中与甲状腺抗体有明显相关性，提示此抗体系统可能参与了良性甲状腺疾病的发生、发展。

关键词：免疫球蛋白E；FcεRIα；抗免疫球蛋白E抗体；抗FcεRI抗体；甲状腺疾病

Analysis on the expressions of serum IgE, FcεRI and their antibodies in patients with benign thyroid diseasesWANGYuping，CUIZelin，LINLihui,WANGJuan,LIJia,PENGXia,XIEGuogang,LILi

.(DepartmentofClinicalLaboratory,ShanghaiFirstPeople′sHospital,ShanghaiJiaotongUniversity,Shanghai200080,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the expressions of immunoglobulin E (IgE), FcεRIα and their antibodies in serum from patients with benign thyroid diseases and investigate their relationships with benign thyroid diseases. MethodsA total of 41 Graves′ disease (GD) patients, 36 Hashimoto′s thyroiditis (HT) patients, 36 thyroid nodule (TN) patients and 60 healthy subjects were enrolled. The expressions of FcεRIα, anti-IgE antibody and anti-FcεRI antibody were determined by competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and the level of IgE was determined by rate nephelometry. Their differences in 4 groups and their relationships with benign thyroid diseases were analyzed. ResultsThe levels of IgE in GD, HT and TN groups had no statistical significance compared with that in healthy control group (P>0.05). The serum levels of FcεRIα and anti-IgE antibody in GD, HT and TN groups were higher than that in healthy control group (P<0.05). The level of anti-FcεRI antibody in GD group was higher than that in healthy control group. The relationships of the serum levels of IgE, FcεRIα, anti-IgE antibody and anti-FcεRI antibody with thyroid hormone autoantibody (TRAb) were not observed in HT or TN group, but there was a negative correlation of serum FcεRIα with TRAb (rs=-0.350, P<0.05), and there was a positive positive correlation of anti-IgE and anti-FcεRI antibodies with TRAb in GD group (rs=0.546 and 0.520, P<0.05). ConclusionsThere are high expressions of serum IgE, FcεRIα and their antibodies in patients with benign thyroid diseases and a significant correlation of them with TRAb in GD group. The results suggest that these antibodies may participate in the occurrence and progress of benign thyroid diseases.

Key words:Immunoglobulin E; FcεRIα; Anti-immunoglobulin E; Anti-FcεRI; Thyroid disease

良性甲状腺疾病包括甲状腺功能亢进、甲状腺炎、单纯性甲状腺肿等，其主要的临床表现为甲状腺肿大、肿块、触痛，多汗、暴躁、激惹等[1]。这类疾病的发病与机体的T细胞、B细胞介导的炎症应答过程密切相关。近年的研究证实参与机体天然免疫的肥大细胞(mast cell，MC)也大量存在于Graves′病及甲状腺肿的病变组织中[2]，提示肥大细胞及其效应分子可能也参与了良性甲状腺疾病的发生、发展过程。因此，我们选择了3种良性甲状腺疾病作为研究对象，其中Graves′病(Graves′ disease，GD)和桥本甲状腺炎(Hashimoto′s thyroiditis，HT)为器官特异性自身免疫性疾病，甲状腺结节(thyroid nodule，TN)是由各种原因导致甲状腺内出现一个或多个组织结构异常团块的疾病[3]。分析肥大细胞活化相关抗体——免疫球蛋白E(immunoglobulin E, IgE)、FcεRIα、抗IgE抗体和抗FcεRI抗体在此3种良性甲状腺疾病患者血清中的表达情况，以了解IgE及其抗体、IgE受体及其抗体与良性甲状腺疾病是否有关系，为深入揭示IgE及其抗体、IgE受体及其抗体与疾病的相关性提供依据。

材料和方法

一、对象

1. 良性甲状腺疾病组GD、HT及TN患者均为2014年3月至2014年11月在上海交通大学附属第一人民医院门诊和住院的患者，诊断标准均符合《中国甲状腺疾病诊治指南》(中华医学会内分泌学会)[3]。GD组41 例，其中男13 例，女28 例，年龄16～77岁。HT组36 例，其中男11 例、女25 例，年龄27～80岁。TN组36 例，其中男12 例、女24 例，年龄24～84岁。

2. 正常对照组选取上海交通大学附属第一人民医院健康体检者60名，男20名，女40名，年龄31～57岁，甲状腺功能、肝肾功能、血尿常规等实验室检查正常，排除甲状腺疾病、过敏及自身免疫性疾病。

二、方法

1. 样本收集所有对象清晨空腹静脉血5 mL，离心分离血清，于-20℃保存待测。

2. 试剂与仪器IgE采用SIEMENS BNⅡ全自动蛋白分析仪及配套试剂(速率散射比浊法)检测；FcεRIα、抗IgE抗体和抗FcεRI抗体采用竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)检测，试剂盒由BlueGene Biotech公司提供；甲状腺功能项目[包括游离三碘甲状腺原氨酸(free 3, 5, 3′-triiodothyronine,FT3)、游离四碘甲状腺原氨酸(free thyroxine, FT4)、总三碘甲状腺原氨酸(total 3, 5, 3′-triiodothyronine, TT3)、总四碘甲状腺原氨酸(total thyroxine, TT4)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone, TSH)、反三碘甲状腺原氨酸(reverse triiodothyronine，rT3)、甲状腺球蛋白(thyroglobulin, Tg)、甲状腺髓过氧化物酶抗体(anti-thyroid peroxidase antibody, TPOAb)、促甲状腺素受体抗体(thyrotropin receptor antibody, TRAb)、甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody, A-TG)]采用罗氏E601型电化学发光仪及配套试剂(电化学发光法)检测。

三、统计学方法

采用SPSS 17.0和GraphPad Prism 5.0软件进行统计分析。数据呈偏态分布，以中位数(M)[四分位数(P25，P75)]表示，组间比较采用Kruskal-Wallis检验，两指标相关性分析采用Spearman方法。以P<0.05为差异有统计学意义。

结果

一、GD组、HT组、TN组及健康对照组的甲状腺激素血清学检测结果

GD患者除存在甲亢和弥漫性甲状腺肿症状外，另有22.6%的患者存在突眼和其它浸润性眼征，3.2%的患者存在胫前黏液性水肿。HT患者均存在甲状腺弥漫性肿大。

GD组、HT组甲状腺功能指标均存在不同程度的异常，TN组和正常对照组甲状腺功能均正常，见表1。

二、各组血清IgE、FcεRIα、抗IgE抗体和抗FcεRI抗体水平的检测结果

GD组、HT组、TN组和正常对照组之间血清IgE水平差异均无统计学意义(P均>0.05)。GD组、HT组及TN组血清FcεRIα和抗IgE抗体水平均明显高于正常对照组(P<0.05)。GD组血清抗FcεRI抗体水平明显高于正常对照组，HT组、TN组血清抗FcεRI抗体水平与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

三、血清IgE、FcεRIα、抗IgE抗体和抗FcεRI抗体水平与甲状腺激素抗体的相关性分析

HT组及TN组血清IgE、FcεRIα、抗IgE抗体和抗FcεRI抗体与甲状腺激素抗体均无相关性；GD组血清TRAb水平与FcεRIα呈明显负相关[相关系数(rs)=-0.350，P<0.05]，抗IgE抗体和抗FcεRI抗体与TRAb呈明显正相关(rs分别为0.546、0.520，P均<0.05)。见表3。

表1　GD组、HT组、TN组及正常对照组甲状腺激素水平比较　[M(P25，P75)]

注：与正常对照组比较，*P<0.05

注：与正常对照组比较，*P<0.05

讨论

GD具有遗传易感性，其发生、发展与感染、毒素、药物因素相关，是由促甲状腺素受体的细胞外结构域变异和免疫系统功能紊乱等所致的自身免疫性甲状腺疾病，与TRAb密切相关[4]。HT以血清中出现针对甲状腺组织的特异性A-TG和TPOAb作为其实验室诊断的金标准。TN是指各种原因导致甲状腺内出现一个或多个组织结构异常的团块[3]。这类疾病的发病与机体的T细胞、B细胞介导的炎症应答过程密切相关，而近年甲状腺疾病中MC和Fc受体的研究越来越引起关注。文献报道无慢性荨麻疹病史的HT患者自体血清皮肤试验阳性率为51.3%～60.4%[5]，Graves′眼病的眼外肌中浸润有大量的MC[2]，并且甲状腺疾病患者合并慢性荨麻疹的概率为28%，明显高于健康人群(6%)[6]。这些反应均为IgE和抗IgE抗体、FcεRIα和抗FcεRI抗体通过自身免疫途径活化MC，引发速发相和迟发相反应而产生的过敏、炎症、防御损伤的结果。本研究观察到GD和HT患者血清FcεRIα和抗IgE抗体水平均明显高于正常对照组(P<0.05)。对GD组血清抗FcεRI抗体进行分析，结果显示抗FcεRI抗体水平明显高于正常对照组。抗FcεRI抗体是机体针对过剩的可溶性FcεRIα产生自身免疫的结果[7]。抗FcεRI抗体可通过与MC表面的FcεRI结合活化MC，形成MC活化的正反馈，与GD自身免疫性疾病的本质相符，进一步证明此抗体系统可能参与了甲状腺疾病的发生、发展。本研究中TN组血清FcεRIα和抗IgE抗体的升高提示此抗体系统或许与TN也有一定的关系。

KENÉZY等[8]报道GD患者易发生过敏反应，并把过敏反应视为GD活动性的一个参考指标。本研究也证明GD组血清FcεRIα、抗IgE抗体和抗FcεRI抗体水平与甲状腺抗体表达水平明显相关。其中抗IgE抗体和抗FcεRI抗体均是机体针对过剩的IgE以及可溶性FcεRIα产生自身免疫的结果，形成IgE-抗IgE抗体及FcεRIα-抗FcεRI抗体免疫复合物[9]，导致血清中IgE和FcεRIα水平显著降低。因而抗IgE抗体和抗FcεRI抗体与GD的特异性抗体TRAb呈正相关(rs分别为0.546、0.520)，而FcεRIα与TRAb呈负相关(rs=-0.350)。

3种良性甲状腺疾病中4种抗体的表达水平呈现差异性也证明在不同的疾病中，此抗体系统通过活化不同的信号通路激活或抑制免疫系统，参与到疾病的发生、发展中。高、低亲和力刺激诱导MC活化不同的信号通路，高亲和力刺激诱导受体与Src家族的酪氨酸激酶Lyn(tyrosine-kinase Lyn, Lyn)结合，低亲和力刺激诱导受体与Src家族的酪氨酸激酶Fgr(tyrosine-kinase Fgr, Fgr)结合，使T细胞活化街接蛋白1(linker for activated of T cells 1, LAT1)分子的磷酸化向LAT2分子的磷酸化转换，由此引起MC脱颗粒的减少以及细胞因子的分泌增加,从而使机体产生不同的免疫反应[10-11]。这或许就是导致疾病发作或缓解的重要原因。

此外，目前这些抗体在MC活化中的作用、MC与甲状腺疾病的关系等尚不知晓。本研究仅仅提示这些抗体与良性甲状腺疾病存在着相关性，并未检测到4种抗体对于疾病诊断的特异性，并且IgE和抗IgE抗体、FcεRIα和抗FcεRI抗体之间形成的配受体复合物以及免疫复合物的状态研究也仍处于初级阶段。因此，深入研究IgE及其抗体、IgE受体及其抗体与疾病的关系对于认识和揭示疾病发生的机制有重要意义。

参考文献

[1]王斌，彭文晖.良性甲状腺疾病手术治疗的临床分析[J].中国医药指南，2014,12(26)：198.

[2]MOSHKELGOSHA S, SO PW, DEASY N, et al. Cutting edge:retrobulbar inflammation,adipogenesis, and acute orbital congestion in a preclinical female mouse model of Graves′orbitopathy induced by thyrotropin receptor plasmid-in vivo electroporation[J].Endocrinology,2013,154(9):3008-3015.

[3]中华医学会内分泌学会《中国甲状腺疾病诊治指南》编写组.中国甲状腺疾病诊治指南——甲状腺结节[J].中华内科杂志，2008,47(10)：867-968.

[4]SEGNI M, PUCARELLI I, TRUGLIA S,et al.High prevalence of antinuclear antibodies in children with thyroid autoimmunity[J].J Immunol Res,2014,2014:150239.

[5]TURKOGLU Z, ZINDANCI I, TURKOGLU O, et al.Skin autoreactivity in Hashimoto′s thyroiditis patients without urticaria: autologous serum skin test positivity correlation with thyroid antibodies, sonographical volume and grading[J].Eur J Dermatol,2012,22(3):345-350.

[6]DOUTRE MS.Chronic urticaria and thyroid auto-immunity[J].Clin Rev Allergy Immunol,2006,30(1):31-37.

[7]PLATZER B, RUITER F, VAN DER MEE J, et al.Soluble IgE receptors-elements of the IgE network[J].Immunol Lett，2011,141(1)：36-44.

[8]MOLNÉR I. What is the role of allergic sensitization in Graves′ disease[J].Orv Hetil,2007,148(29):1347-1352.

[9]MARONE G,SPADARO G,PALUMBO C,et al.The anti-IgE/anti-Fcepsilon Rlalpha autoantibody network in allergic and autoimmune diseases[J].Clin Exp Allergy,1999,29(1):17-27.

[10]MACNEIL AJ, YANG YJ, LIN TJ. MAPK kinase 3 specifically regulates Fc epsilonRI-mediated IL-4 production by mast cells[J]. J Immunol,2011,187(6):3374-3382.

[11]SUZUKI R, LEACH S, LIU W,et al.Molecular editing of cellular responses by the high-affinity receptor for IgE[J].Science,2014,343(6174):1021-1025.

(本文编辑：储怡星)

收稿日期：(2015-03-06)

中图分类号：

文章编号：1673-8640(2015)05-0450-04R446.1

文献标志码：ADOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.05.010

通讯作者：李莉，联系电话：021-63240090-4600。

作者简介：王玉萍，女，1987年生，硕士，主要研究肥大细胞相关抗体与自身免疫性疾病。

基金项目：国家自然科学基金资助项目(81273276)；上海市科委资助项目(12ZR1447800、11JC1410300)