老年非小细胞肺癌患者GRP94及GRP78蛋白表达及其临床意义

钟　鸣　于杜娟　靳荣辉　谭　平

(吉林大学中日联谊医院，吉林　长春　130033)



老年非小细胞肺癌患者GRP94及GRP78蛋白表达及其临床意义

钟鸣于杜娟靳荣辉谭平

(吉林大学中日联谊医院，吉林长春130033)

〔摘要〕目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)中细胞应激因子GRP94及GRP78蛋白表达及其与临床分期及生存期的关系。方法选取该院接受外科手术切除治疗的64例NSCLC患者，应用电话随访的方式了解患者的术后情况和生存期；使用免疫组化技术检测研究对象的病理切片标本中GRP78和GRP94的表达水平。结果GRP94与GRP78蛋白在NSCLC肿瘤细胞中明显高表达状态；GRP94、GRP78蛋白的表达与NSCLC病理类型有关，与分化程度、肿瘤T分期、肿瘤N分期、WHO临床分期具有不同程度的联系，也与肿瘤的大小、浸润、转移有关；与性别和年龄无关。GRP94及GRP78蛋白的高表达与NSCLC患者生存期及生存率呈明显负相关，其蛋白表达水平越高，患者的生存期越短，生存率越低。结论GRP78和GRP94是NSCLC发生、发展中的重要因子，可作为肿瘤分期和预测预后的一项指标。

〔关键词〕非小细胞肺癌(NSCLC)；GRP94；GRP78；生存期

糖调节蛋白GRP94与GRP78是高度保守的内质网驻留糖蛋白。有研究报道，GRP94和GRP78在恶性肿瘤(淋巴瘤、食管癌、乳腺癌、肝癌、胃癌)中均呈高表达，提示GRP94和GRP78的高表达与肿瘤的发生、发展、转移、浸润、化疗及预后密切相关〔1~4〕。本文拟探讨GRP94与GRP78在非小细胞肺癌(NSCLC)中的临床意义及对预后的影响。

1材料与方法

1.1研究对象收集2001~2010年在吉林大学中日联谊医院胸外科进行手术的部分NSCLC患者的肿瘤组织石蜡封存标本，患者术前均未进行放疗或化疗，共64例。年龄60~75岁，平均67岁，其中男53例、女11例，有吸烟史37例，无20例，不详7例；病理类型：鳞癌43例，腺癌21例；病理分化程度：低分化16例，中分化43例，高分化5例；T分期：T1 23例，T2 35例，T3 6例；N分期：N0 37例，N1 15例，N2 11例，N3 1例;pTNM分期：Ⅰ期29例，Ⅱ期23例，Ⅲ期12例；局部浸润：有16例，无48例；生存时间：5年以上0例，3~5年9例，1~3年46例，1年以内9例。

1.2试剂anti-GRP94购买于Santa Cruz公司；anti-GRP78购买于Cell Signaling公司；正常山羊血清工作液、生物素标记山羊抗兔IgG工作液(二抗)、浓缩型DAB试剂盒购买于北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3免疫组化检测GRP78、GRP94蛋白表达严格按试剂盒说明书操作。两种蛋白主要在细胞质内表达，呈棕黄色或棕褐色颗粒。首先在100倍低倍镜下选择具有代表性区域，转到400倍高倍镜下选择5个有阳性表达集中的视野，应用评分法对阳性细胞进行半定量评估，以阳性细胞所占视野百分比计分：无染色或单个表达的细胞计为-，阳性细胞数<10计为+，10%~50%计为，50%~80%计为，>80%计为。

1.4统计学方法使用SPSS19.0软件，采用非参数检验和Spearman分析。应用电话随访，2011年8月随访停止。采用Kaplan-Meier分析和log-rank检验。

2结果

2.1NSCLC中GRP94与GRP78蛋白表达结果在NSCLC中，GRP94与GRP78蛋白表达明显增高，见图1、2，均差异显著。二者表达多在肿瘤细胞胞质中，GRP94蛋白表达强度为~，GRP78蛋白表达强度为+~，癌旁组织可见少量表达。配对T检验提示GRP94与GRP78的蛋白表达具有相关性(r=0.053，P=0.000),GRP94:GRP78+7例，1例；GRP94：GRP78+15例，12例，3例；GRP94：GRP78+4例，11例，11例。

图1　NSCLC中GRP94蛋白表达(×100)

图2　GRP78在NSCLC中的表达(×100)

2.2NSCLC中GRP94与GRP78蛋白表达与临床因素的相关性分析在NSCLC中，病理类型对GRP94蛋白表达有影响，而病理类型和病理分化程度对GRP78蛋白表达水平无影响，见表1。

2.3NSCLC中GRP94与GRP78蛋白表达与生存率的相关性分析在NSCLC中，GRP94强度为、、的患者5年生存率分别为25%、23%、3.8%。GRP94的蛋白表达水平与生存期具有显著的统计学相关性，P=0.026，与病理类型有一定的相关性(P=0.001)，生存函数分析显示GRP94蛋白表达水平越高，患者生存期越短。NSCLC中，GRP78强度为+、、的患者5年生存率分别为7.8%、23%、17%，GRP78蛋白的表达与生存期有显著的统计学相关性，P=0.008，生存函数分析发现同GRP94蛋白表达水平一样，GRP78蛋白表达水平越高，患者的生存期越短。

表1　NSCLC中GRP94/GRP78蛋白表达与临床因素的

3讨论

GRP94和GRP78是葡萄糖调节蛋白家族中目前研究最多的蛋白，和热休克蛋白具有高度的同源性，作为一种应激蛋白分布于内质网腔中。最初在葡萄糖饥饿的鸡胚细胞发现，为细胞应激因子。它们参与蛋白质合成时新生肽链的折叠，行使分子伴侣功能。然在肿瘤细胞中糖蛋白的诱导表达出来低糖、酸性环境、缺氧等，也可能是肿瘤细胞对宿主主动免疫的一种防御机制。GRP94和GRP78在肿瘤的发生、发展、增殖等过程中起作用外，还参与了肿瘤耐药机制的形成〔5〕。

本研究结果与近年来国内研究一致〔6，7〕。GRP94和GRP78两种蛋白的升高可能是由于在肿瘤细胞生长、增殖过程中，细胞常处于葡萄糖葡饥饿、酸中毒、缺氧的微环境中，这种微环境能够促使糖基化和错误折叠蛋白的积累，导致折叠蛋白反应，促进内质网分子伴侣糖调节蛋白表达。GRP94和GRP78表达水平升高，对肿瘤细胞的的生存有重要作用，其可介导肿瘤细胞的免疫逃避机制，使肿瘤对不良环境的耐受力增加，对凋亡的抵抗性增强，使得肿瘤细胞能够更好地生存、生长、增殖和转移。GRP94和GRP78在肿瘤细胞中高表达与肿瘤的发生、发展、转移有关，被认为是评估恶性肿瘤生物学行为和预后的重要标志物。近期研究发现，部分恶性肿瘤细胞中，二者呈高表达状态，其中包括NSCLC，并且在NSCLC中其基因和蛋白的表达程度与WHO分期和病理分化程度相关〔8〕。

GRP94的蛋白表达水平越高，患者的生存期越短，与病理类型有一定的相关性。因为GRP94具有刺激细胞生长、存进血管生成的功能，这种功能能够使肿瘤细胞在不利其生存的环境中继续存活。本研究提示GRP94可能与肿瘤的转移、进展有一定的联系；肿瘤细胞的分化过程可能有GRP94的参与；其表达对肿瘤患者的预后有一定影响。GRP78蛋白表达水平越高，患者的生存期越短。

总之GRP94和GRP78的在肺癌组织中高表达，与性别、肿瘤T分期、病理分化程度及病理类型有一定关系，且与生存期呈负相关，在预测肺癌发生、发展、预后有重要意义。

4参考文献

1Langer R，Feith M，Siewert JR，etal.Expression and clinical significance of glucose regulated proteins GRP78 (BiP) and GRP94(GP96)in human adenocarcinomas of the esophagus〔J〕.BMC Cancer，2008;8：70-2.

2Hodorova I，Rybarova S，Solar P，etal.GP96 and its different expression in breast carcinomas〔J〕.Neoplasma，2008;55(1)：31-5.

3Nomura H，Uzuwa K，Yamano Y，etal.Network-based analysis of alcium binding protein genes identifies Grp94 as atarget in human oral carcinogenesis〔J〕.Br J Cancer，2007;97(6)：792-801.

4Zheng HC，Takahashi H，Li XH，etal.Overexpression of GRP78 and GRP94 are markers for aggressiver behavior and poor prognosis in gastric carcinoma〔J〕.Ham Pathol，2008;39(7)：1042-9.

5Fu Y，Lee AS.Glucose regulated proteins in cancer progression，drug resistance and immunotherapy〔J〕.Cancer Biol Ther，2006;5(7)：741-4.

6Wang Q，He Z，Zhang J，etal.Overexpression of endoplasmic reticulum molecular chaperone GRP94 and GRP78 in human lung cancer tissues and its significance〔J〕.Cancer Detect Prev,2005；29(6)：544-51.

7Koomagi R，Mattem J，Volm M.Glucose-related protein(GRP78) and its relationship to drug resistance proteins P170，GST-π，LRP56 and angiogenesis in non-small cell lung carcinoma〔J〕.Anticancer Res，1999；(5B)：4333-6.

8Uramoto H，Sugio K，Oyama T，etal.Expression of endoplasmic reticulum molecular chaperone Grp78 in human lung cancer and its clinical significance〔J〕.Lung Cancer,2005；49(1)：55-62.

〔2015-03-10修回〕

(编辑李相军)

〔中图分类号〕R730.4

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)07-1632-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.07.043

通讯作者：谭平(1963-)，男，教授，主任医师，主要从事肺癌及COPD方面的研究。

第一作者：钟鸣(1977-)，女，主治医师，主要从事肿癌相关因子的研究。