老年原发性干燥综合征患者干扰素-γ、Fas、FasL检测的意义

李玉玲　冀林华

(青海大学附属医院检验科，青海　西宁　810001)



1血液科

老年原发性干燥综合征患者干扰素-γ、Fas、FasL检测的意义

李玉玲冀林华1

(青海大学附属医院检验科，青海西宁810001)

目的探析干扰素(INF)-γ、Fas、FasL在原发性干燥综合征(pSS)老年患者中的检测意义。方法确诊的尚未接受治疗的40例初诊pSS患者为PSS组，同期接受口外伤手术的22例女性健康者作为对照组。采用SP法检测INF-γ、Fas、FasL的表达水平。比较两组唇腺腺泡、唇腺导管的上皮细胞中INF-γ、Fas、FasL的阳性表达率，并对INF-γ、Fas、FasL行两两相关性分析。结果pSS组唇腺腺泡、唇腺导管上皮细胞中INF-γ、Fas、FasL的阳性表达率均明显比对照组高(P均<0.01)。唇腺腺泡的上皮细胞中，INF-γ与Fas呈正相关(r=0.83，P<0.01)；INF-γ与FasL呈正相关(r=0.46，P<0.05)；Fas与FasL呈正相关(r=0.62，P<0.01)。结论INF-γ、Fas、FasL很可能在pSS的整个发生发展过程中扮演了重要的角色，并在唇腺组织中异常表达。

干扰素-γ；Fas；FasL；原发性干燥综合征

原发性干燥综合征(pSS)属于外分泌腺体，主要侵犯泪腺、唾液腺等，临床特征主要是高度的淋巴细胞灶性浸润，主要表现是口腔干燥症、结膜炎、干燥性角，有时甚至累及全身多个系统和器官。作为弥漫性结缔组织疾病之一的pSS，在我国的致病率达0.3%～0.7%，属于多发病、常见病，好发于30～40岁或者是绝经后的女性，老年人群中其致病率高达0.77%〔1〕。目前尚不明确老年pSS的病理机制。本文旨在通过对pSS老年患者唇线组织内的干扰素(INF)-γ、Fas、FasL表达水平的检测，探析其临床意义。

1　资料与方法

1.1一般资料2012年4月至2015年8月我院血液风湿科进行门诊及住院确诊的尚未接受治疗的40例初诊pSS患者的临床资料，均为女性，平均年龄(69.8±7.8)岁。诊断均符合2002年国际分类(诊断)标准，排除感染、高血压、糖尿病等对研究结果会造成一定干扰的相关疾病。另外选取同期在我院接受口外伤手术的22例女性健康者作为对照组，平均年龄(70.1±8.1)岁。受试者均接受唇腺活检术，具体操作由口腔外科医师负责。两组年龄无明显差异。

1.2研究方法上海亚培生物技术有限公司生产的INF-γ、Fas、FasL免疫组化试剂盒。INF-γ、Fas、FasL表达水平的测定：采用SP法。将组织切片、脱蜡并水化；用pH6.0的柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复；对内源性过氧化物酶活性用3%双氧水溶液进行阻断，于室温下孵育10 min；室温下在正常兔血清中封闭20 min；滴注一抗，于4℃下孵育过夜；将二抗注入其中，于室温下孵育30 min；最后滴加辣根过氧化物酶标记链霉亲和素，于室温下孵育15 min；二氨基联苯胺(DAB)显色；蒸馏水冲洗并终止显色；复染、脱水、透明、封片，用显微镜进行观察。

1.3INF-γ、Fas、FasL染色结果判定采用双盲法，由2名病理医师阅片评定。细胞质为黄色，则INF-γ、Fas、FasL为阳性。高倍镜下每张切片随机选取视野10个，且每个视野记录细胞100个，综合染色细胞数和强度在同类细胞数中的百分数值评定：①根据细胞数在同类细胞数中的百分值进行评分：低于25%计1分；25%～50%计2分；51%～75%计3分；超过75%计4分。②根据细胞着色的深浅进行评分：细胞无显色，0分；黄色，1分；棕黄色，2分；棕褐色，3分。总积分为上述两项评分之乘积。总积分如果为0～3分，则为阴性(-)，低表达；4～6分，弱阳性(+)；7～9分，阳性()；超过9分，则为强阳性()。

1.3统计学方法采用SPSS19.0软件进行t检验和χ2检验。

2　结　果

2.1唇腺腺泡和导管上皮细胞中INF-γ、Fas、FasL的检测结果pSS组唇腺腺泡和导管上皮细胞中INF-γ、Fas、FasL的阳性表达率均明显比对照组高(P均<0.01)。见表1。

表1　两组唇腺腺泡和导管上皮细胞中INF-γ、Fas、FasL的检测结果(n)

2.2pSS患者Fas、FasL与INF-γ、Fas与FasL表达的相关性分析在唇腺腺泡的上皮细胞中，INF-γ与Fas呈正相关(r=0.83，P<0.01)；INF-γ与FasL呈正相关(r=0.46，P<0.05)；Fas与FasL呈正相关(r=0.62，P<0.01)。

3　讨　论

pSS属于慢性全身性自身免疫性疾病，主要损害外分泌腺，对于患者的腺体组织受损机制目前尚未完全明确。pSS的发病与细胞凋亡存在一定的关系〔2〕。Fas抗原是肿瘤坏死因子(TNF)家族中的成员。作为Ⅰ型跨膜蛋白，Fas定位于10q33，分子量是45 kD。Fas的天然配体是FasL，其也是TNF家族中一员，分子量是40 kD，属于Ⅱ型跨膜蛋白〔3〕。Fas和FasL主要分布在自然杀伤细胞(NK)、T细胞及生殖细胞、肝、肾、心中，两者的结合可以对凋亡信号进行转导，对Fas所在细胞的整个凋亡过程起诱导作用〔4〕。细胞中各种蛋白对Fas功能活性起决定性的调节作用。肿瘤的发生往往与Fas的异常表达有关〔5〕。细胞凋亡往往通过Fas/FasL系统途径发生，Fas/FasL系统在参与免疫赦免、控制免疫应答及诱导被激活的细胞凋亡、人体自身的耐受机制中均扮演着重要的角色〔6〕。

本文提示INF-γ、Fas、FasL均参与了老年pSS患者的发病过程；且在免疫调节、免疫相关性疾病等发生发展及转归过程中，细胞因子均发挥重要作用。在自身免疫性疾病的诱导、发展过程中，Th1和Th2细胞间的平衡发挥了关键性的作用〔7〕。Th1细胞通过表达FasL可以诱导靶细胞实现Fas途径细胞凋亡〔8〕。INF-γ属于Th1型细胞因子，其主要用于介导免疫应答〔9〕。类风湿关节炎患者的滑液和滑膜T细胞的功能性Fas抗原异常表达，抑制了患者体内的Fas途径的T淋巴细胞凋亡，同时还抑制了关节局部的巨噬细胞、成纤维细胞、滑膜细胞等的凋亡，导致了滑膜细胞类肿瘤样增生与滑膜细胞的活化，滑膜组织侵蚀性、增生性生长破坏了关节软骨及其下面的骨〔10〕。

INF-γ可以对体外培养的所有腺上皮细胞进行诱导，使其表达Fas及FasL，最终对上皮细胞的生存产生影响〔11〕。

本研究提示INF-γ作为炎症及免疫反应中关键性细胞因子，几乎参与了各个阶段免疫反应，其中包括B和T细胞分化、增殖与活化，参与血管内皮细胞、NK细胞及巨噬细胞等的激活过程，诱导细胞表达主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ、Ⅱ类分子，可以对IgG类转化起一定的促进作用〔12〕。老年pSS患者INF-γ表达水平如果上升，不但会加剧腺体组织及自身免疫反应的受损，同时还会诱导pSS唇腺组织大量表达Fas、FasL，加速细胞凋亡，破坏腺体结构，减弱甚至丢失腺体分泌功能〔13〕。

1Simka M.Cellular and molecular mechanisms of venous leg ulcers development-the “puzzle” theory〔J〕.Int Angiol，2010；29(1)：1-19.

2Papageorgiou A，Voulgarelis M，Tzioufas AG.Clinical picture，outcome and predictive factors of lymphoma in Sjgren syndrome〔J〕.Autoimmun Rev，2015；14(7)：641-9.

3Kinugawa T，Kato M，Yamamoto K,etal.Proinflammatory cytokine activation is linked to apoptotic mediator，soluble Fas level in patients with chronic heart failure〔J〕.Int Heart J，2012；53(3)：182-6.

4Ehlken H，Krishna-Subramanian S，Ochoa-Callejero L,etal.Death receptor-independent FADD signalling triggers hepatitis and hepatocellular carcinoma in mice with liver parenchymal cell-specific NEMO knockout〔J〕.Cell Death Differ，2014；21(11)：1721-32.

5Girnita DM，Ohmann EL，Brooks MM,etal.Gene polymorphisms impact the risk of rejection with hemodynamic compromise：a multicenter study〔J〕.Transplantation，2011；91(12)：1326-32.

6Ramamoorthy D，Turos E，Guida WC.Identification of a new binding site in E.coli FabH using molecular dynamics simulations：validation by computational alanine mutagenesis and docking studies〔J〕.J Chem Inf Model，2013；53(5)：1138-56.

7Park IH，Venable JD，Steckler C,etal.Estimation of hydrogen-exchange protection factors from MD simulation based on amide hydrogen bonding analysis〔J〕.J Chem Inf Model，2015；55(9)：1914-25.

8Kwan EE.ACD/Spectrus Processor review〔J〕.J Chem Inf Model，2012；52(7)：1898-900.

9Hegazy SK，Tolba OA，Mostafa TM,etal.Alpha-lipoic acid improves subclinical left ventricular dysfunction in asymptomatic patients with type 1 diabetes〔J〕.Rev Diabet Stud，2013；10(1)：58-67.

10Chen CJ，Vijaya KR，Tsai CC,etal.Structure and functions of gamma-dodecalactone isolated from antrodia camphorata for NK cell activation〔J〕.Bioorg Med Chem，2010；18(18)：6896-904.

11Iwai A，Shiozaki T，Miyazaki T.Relevance of signaling molecules for apoptosis induction on influenza a virus replication〔J〕.Biochem Biophys Res Commun，2013；441(3)：531-7.

12Elton TS，Selemon H，Elton SM,etal.Regulation of the MIR155 host gene in physiological and pathological processes〔J〕.Gene，2013；532(1)：1-12.

13Gu YZ，Xue Q，Chen YJ,etal.Different roles of PD-L1 and FasL in immunomodulation mediated by human placenta-derived mesenchymal stem cells〔J〕.Hum Immunol，2013；74(3)：267-76.

〔2014-12-25修回〕

(编辑苑云杰)

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.14.085

李玉玲(1975-)，女，主管检验师，主要从事临床检验研究。

R392.1

A

1005-9202(2016)14-3536-02；