气相色谱法测定食品中苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾及注意事项

□ 吴惠丽　焉耆回族自治县质量与计量检测所

气相色谱法测定食品中苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾及注意事项

□ 吴惠丽焉耆回族自治县质量与计量检测所

食品中苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾的测定原理

食品试样酸化后，利用苯甲酸、山梨酸易溶于乙醚的性质，用乙醚将食品中的苯甲酸、山梨酸提取出来，在气相色谱仪上进行分离测定，根据标准曲线求出食品中苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸和山梨酸钾的含量。

试剂

乙醚：不含过氧化物；石油醚：沸程30～60 ℃；盐酸；无水硫酸钠；盐酸（1∶1）：量取100 mL水，一边摇动，一边缓缓加入100 mL盐酸，混匀，冷却至室温备用。氯化钠酸性溶液（40 g/L）：称取4.0 g氯化钠，加水溶解，并定容至100 mL，然后加数滴盐酸（1∶1）酸化。

气相色谱仪检测条件

色谱柱：固定液AT添加剂玻璃毛细柱，柱长15 m，内径0.53 mm，液膜厚度：1.00 μm；柱温：150 ℃、汽化温度：250 ℃、检测温度260 ℃。

制备标准曲线系列

苯甲酸、山梨酸溶液标准物质

食品防腐剂苯甲酸溶液标准物质，标准值1.00 mg/mL。

食品防腐剂山梨酸溶液标准物质，标准值1.00 mg/mL。

制备苯甲酸、山梨酸混合标准使用液

分别准确吸取0.4 mL苯甲酸溶液标准物质和0.4 mL山梨酸溶液标准物质混合置于1个10 mL容量瓶中，用石油醚_乙醚(3∶1)混合溶剂稀释至刻度，此标准混合使用液含苯甲酸或山梨酸为40 μg/mL。以此类推，再分别准确吸取0.8、1.2、1.6、2.0 mL和2.4 mL苯甲酸溶液标准物质和山梨酸溶液标准物质，混合后置于一组10 mL容量瓶中，用石油醚_乙醚(3∶1)混合溶剂稀释并定容至刻度，混匀备用。盖好瓶塞，防止溶剂挥发造成浓度变化，同时控制实验室温度为20 ℃。

此标准混合使用液系列中，苯甲酸或山梨酸的浓度分别为40、80、 120、160、200μg/mL和 240μg/mL。同时，准备一个试剂空白使用液。

试样提取

（1）将试样预先混合均匀，备用。

（2）无水硫酸钠于130 ℃电热恒温干燥箱中干燥30 min，取出后于干燥器中冷却至室温，备用。

（3）在万分之一电子天平上，于25 mL带塞量筒中准确称取2.50 g预先混合均匀的试样，精确至0.000 2 g。平行测定2次，因此平行称取试样2份。

（4）分别于试样中加0.5 mL盐酸（1:1）酸化、摇匀，第一次加入10 mL乙醚，盖好量筒塞，振摇1 min，静置15 min，用吸管将上层乙醚提取液吸入一个125 mL分液漏斗中，盖好分液漏斗塞。第二次于酸化的试样中加入10 mL乙醚，按照上述提取方法，重复提取一次，合并乙醚提取液于分液漏斗中。第3次于酸化的试样中加入5 mL乙醚，再按照上述方法提取第3次，合并3次提取的乙醚于125 mL分液漏斗中。

（5）于提取的乙醚溶液中加入5 mL氯化钠酸性溶液（40 g/L），洗涤乙醚提取液，静置15 min，分层，弃去下层氯化钠酸性溶液。然后于提取的乙醚溶液中再加5 mL氯化钠酸性溶液（40 g/L），重复洗涤1次，静置15 min，分层，弃去下层氯化钠酸性溶液。

（6）于干燥漏斗中放好滤纸，在滤纸上加入事先干燥的无水硫酸钠5 g，将乙醚提取液缓缓放入，将无水硫酸钠脱水后的乙醚滤入25 mL容量瓶中，用乙醚定容至刻度，混匀。

（7）用单标线吸量管准确吸取5 mL乙醚提取液于5 mL带塞试管中，置于40 ℃水浴上挥干，用单标线吸量管准确加入2 mL石油醚-乙醚(3∶1)混合溶剂。

测定

依次分别进样2 μL苯甲酸、山梨酸标准混合使用液于气相色谱仪中，分别测得标准系列苯甲酸、山梨酸的峰面积，同时进样试剂空白使用液。以浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，分别绘制苯甲酸、山梨酸标准曲线。

同时进样2 μL试样提取液，分别测得山梨酸和苯甲酸的峰面积，与标准曲线比较定量。平行试样，分别进样测定。

结果计算

试样中苯甲酸或山梨酸的含量按式（1）进行计算。

x—试样中苯甲酸或山梨酸的含量，mg/kg；A—试样提取液中苯甲酸或山梨酸的质量，μg；2—加入石油醚-乙醚(3:1)混合溶剂的体积，mL；2—测定时进样的体积，μL；m—试样的质量，g；V1—测定时吸取乙醚提取液的体积，mL；V2—试样乙醚提取液的总体积，mL。

注意：计算结果保留3位有效数字。

实验中的注意事项

检测结果换算的注意事项

（1）

所以换算系数是1.18。即实验结果以苯甲酸钠报出时应乘以1.18。

（2）

所以换算为山梨酸钾的换算系数是1.34。

（3）试样制备时，要充分混合均匀，以防止样品不均匀造成检测结果偏差。

（4）样品中苯甲酸、山梨酸提取环节，若样品丢失，或者提取液遗漏，会导致实验结果偏低。

（5）提取样品中苯甲酸、山梨酸所用有机溶剂乙醚极易挥发，实验室温度要控制在20 ℃，在通风柜中操作，提取操作要熟练、准确、连贯。