维生素B1与氯酚红的分子吸收光谱及应用

江 蔓, 杨 智, 王凤怡, 江 虹*

(长江师范学院化学化工学院，重庆 408100)

维生素B1(VB1)是人体健康不可缺少的营养物质，也是婴幼儿配方奶粉中必须添加的营养成分之一。因此，研究奶粉(尤其是婴幼儿配方奶粉)中VB1含量的检测方法具有重要意义。目前，VB1的测定方法主要是高效液相色谱法[1 - 3]。此外，还有荧光法[4]、化学发光法[5]和分光光度法[6,7]等的报道。分光光度法操作简便，仪器价廉，得到广泛应用，而将分光光度法用于VB1检测的报道却较少。

本工作以氯酚红(CHR)作探针，研究并建立了测定VB1的分光光度法。该方法不仅简便,而且省时，用于婴幼儿奶粉和学生奶粉中VB1的测定，结果与国家标准方法基本一致。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

U-3010型紫外-可见分光光度计(日本，日立公司)；pHS-3C精密酸度计(上海虹益仪器仪表有限公司)。

VB1标准溶液：称取适量VB1，用0.010 mol/L HCl溶解并稀至100 mL，配成浓度为300.8 mg/L的储备液，冰箱4 ℃保存，用时稀释10倍。CHR溶液：1.0×10-4mol/L。Tris-HCl缓冲溶液：不同体积0.10 mol/L HCl和0.20 mol/L Tris溶液混合，配成不同pH的缓冲溶液。EDTA溶液：100 g/L。所用试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。

样品：市售学生奶粉、婴儿配方奶粉1段。

1.2 实验方法

于10 mL具塞比色管中，先加入适量的30.08 mg/L VB1标准溶液或者样品溶液，再依次加入3.0 mL 1.0×10-4mol/L CHR溶液和1.0 mL pH=6.86 Tris-HCl缓冲溶液，用水稀至刻度，摇匀，15 min后，用1 cm比色皿，以试剂空白作参比，在最大正吸收或负吸收波长处测定溶液的吸光度A。

2 结果与讨论

图1 吸收光谱Fig.1 Absorption spectra 1.VB1(3.01 mg/L),against water;2.CHR(3.0×10-5 mol/L),pH=6.86,against water;3-5.VB1(1.50,3.01,4.51 mg/L)-CHR(3.0×10-5 mol/L),pH=6.86,against reagent blank.

2.1 吸收光谱

按实验方法扫描不同体系的吸收光谱，见图1。从图可见，VB1在可见光区几乎无吸收；CHR在可见光区有较强吸收，最大吸收位于570 nm；在弱酸性条件下，VB1与CHR发生缔合反应，其生成物分别产生一个明显的正吸收峰和一个负吸收峰，其最大正吸收位于428 nm，紫移142 nm，其最大负吸收位于染料最大波长的附近。表明CHR与VB1反应生成了新物质。在最大正、负吸收波长处，VB1的浓度在一定范围内与缔合物的吸光度呈线性关系。

2.2 反应条件

2.2.1溶液酸度及用量的选择试验了溶液pH值对VB1-CHR体系吸光度的影响。结果表明：pH为3.5～7.0时体系吸光度较大。实验用pH=6.86的Tris-HCl缓冲溶液，适宜用量为1.0 mL。

2.2.2CHR溶液浓度的选择试验了CHR溶液的浓度对VB1-CHR体系吸光度的影响。结果表明：CHR溶液的浓度为(2.8～3.2)×10-5mol/L时吸光度相对较大，实验选用1.0×10-4mol/L CHR 溶液3.0 mL。

2.2.3试剂加入顺序的选择试验了VB1、Tris-HCl及CHR溶液在不同加入顺序时对VB1-CHR体系吸光度的影响。结果表明：按实验方法的加入顺序为最佳。

2.2.4反应时间及稳定性考察了室温下，在最大正、负吸收波长处，反应时间对VB1-CHR体系吸光度的影响。结果表明：VB1与CHR反应在15 min内即可完成，至少稳定1 h。

2.3 标准曲线及灵敏度

在10 mL比色管中，按实验方法配制标准系列溶液并扫描吸收光谱，绘制标准曲线。其线性回归方程、相关系数、线性范围及表观摩尔吸光系数(ε)等列于表1。

表1 标准曲线相关参数

2.4 方法的选择性

2.5 样品测定

准确称取学生奶粉(1#)和婴儿配方奶粉1段(2#)各20.0000 g，分别置于锥形瓶中，加入80 mL 0.010 mol/L HCl，摇匀，置沸水浴中加热30 min，取出流水冷至室温后，用6.0 mol/L NaOH溶液调至pH为4.5～5.0(使蛋白质沉淀),干过滤，将滤液置于100 mL容量瓶中，加入5.0 mL 100 g/L EDTA溶液(掩蔽Fe3+、Al3+、Cu2+)，再用水定容至100 mL，即为待测液。取1#和2#待测液各4.0 mL，分别置于10 mL具塞比色管中，按实验方法测量428 nm处的吸光度，由回归方程求得VB1的含量，同时做加标回收试验，结果见表2。结果表明方法有较高准确度。

表2 样品分析结果及回收试验(n=6)

3 结论

本文建立的方法与国家标准方法相比，更为简便、快速，且有较高灵敏度和选择性。方法可用于奶粉生产过程中的质量控制。