二步擦拭转移联合硅珠法提取高度污染检材DNA 2例

钟大军，王学为，余江

（1.丽水市公安司法鉴定中心，浙江丽水 323000；2.丽水市莲都区检察院技术科，浙江丽水 323000）

二步擦拭转移联合硅珠法提取高度污染检材DNA 2例

钟大军1，王学为1，余江2

（1.丽水市公安司法鉴定中心，浙江丽水 323000；2.丽水市莲都区检察院技术科，浙江丽水 323000）

法医遗传学；事故，交通；DNA污染；二步擦拭转移法；硅珠法

1 案例

1.1 简要案情

案例1：某日凌晨2：00左右，在某国道汽车西站路段发现一名老年妇女因头颈部严重碾压伤死亡，民警通过视频监控摸排，找到两辆肇事嫌疑车辆。经仔细观察发现，在其中一辆厢式货车右后轮内侧有一处污泥混杂的疑似人体血迹。

案例2：某木材厂内发现一男子疑似被车辆撞击死亡，无现场目击证人，现场勘验发现两辆转运木材的推土汽车为肇事嫌疑车辆。经仔细观察发现，其中一辆车左前轮外侧缘有疑似人体血斑痕迹，表面黏附大量木屑。

为明确上述两案中的肇事嫌疑车辆，需对案件现场发现存在高度污染的疑似生物检材进行法医DNA分型检验。

1.2 检验过程与结果

采用生物物证专用提取棉签（公安部二所研发），通过二步擦拭转移法对提取部位进行擦拭。经金标抗人血红蛋白（FOB，北京芬格尔安科技有限责任公司）检测，按硅珠法提取DNA[1]。采用Identifiler®Plus试剂盒（美国AB公司），在9700型PCR扩增仪（美国AB公司）上参照试剂盒说明书完成PCR扩增，PCR产物在3130xl型遗传分析仪（美国AB公司）上进行毛细管电泳。

两起案件中，待检检材均获得了D8S1179、D21S11、D7S820等15个基因座特异性扩增产物，且分型结果与相应死者完全一致，为甄别肇事车辆提供了关键证据。

2 讨论

随着我国机动车数量和人口数量的增加，交通事故已成为当今社会的重大问题之一。道路交通事故中涉嫌车辆上物证的DNA检验，在事故认定中起着重要的作用。但是，由于交通事故中检材往往会被反复碾压，或黏附灰尘等污染物，故获取的检材常为微量、严重污染检材，DNA分型易受现场检材提取方法的影响[2]。因此，建立科学的污染检材DNA提取方法对交通事故相关案件极为重要。本研究采用二步擦拭转移法提取现场检材，经硅珠法提取DNA后，成功地获得了两起交通事故中高度污染的微量生物检材的STR分型结果，确定了肇事车辆。

二步擦拭转移法是一种常用的现场微量生物检材提取方法，在指印等微量生物检材的现场提取中已有较好的应用[3-4]。使用二步擦拭转移法提取交通事故现场高度污染的微量生物检材时，应注意以下细节：（1）推荐使用生物物证专用提取棉签，检出率较普通医用棉签略高，且使用方便；（2）棉签的湿度适中，避免过分湿润；（3）擦拭时避免来回擦拭，尽可能往一个方向擦拭；（4）擦拭时力度适中，太轻或太重都会导致检出率的降低，力度以棉签头稍弯曲为宜；（5）擦拭范围集中在喷溅位置，扩大擦拭范围会增加杂质，导致检出率降低。

对于存在严重污染的现场生物检材，除在现场提取时尽可能减少污染物对棉签的黏附外，后续DNA提取方法是获得相对高质量模板DNA的另一关键。硅珠法较传统的Chelex-100法，更能去除大部分杂质、PCR抑制物等[5]，能获得较为完整的STR分型谱带。本文两起案例采用二步擦拭转移联合硅珠法提取DNA，均获得了较为理想的法医DNA分型效果，对交通事故中高度污染生物检材的DNA分型有一定的借鉴意义。

[1]Sweet D，Lorente M，Lorente JA，et al.An improved method to recover saliva from human skin：the double swab technique[J].J Forensic Sci，1997，42（2）：320-322.

[2]刘海耀，康朝彦.浅谈交通事故法医学物证检材的勘验与提取[J].广东公安科技，2015，（3）：60-61，63.

[3]张怀才，刘松，李佑英，等.手套印DNA检验在侦查破案中的应用[J].法医学杂志，2015，31（1）：59.

[4]纪中华.交通事故中汗潜指印DNA检验[J].刑事技术，2015，40（2）：162-163.

[5]聂胜洁，景强，李建京，等.PCR-STR技术在交通事故鉴定中的应用[J].法医学杂志，2001，17（1）：32-34.

（本文编辑：张素华）

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10.3969/j.issn.1004-5619.2016.06.029

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2016-09-26）

钟大军（1975—），男，主检法医师，主要从事法医病理学及法医临床学鉴定、交通事故法医病理学研究；E-mail：1169345301@qq.com