十全育真汤对衰老小鼠学习记忆的影响

朱云超 詹光杰 袁德培 杨付明 黄 琼

(湖北民族学院医学院，湖北 恩施 445000)

十全育真汤对衰老小鼠学习记忆的影响

朱云超 詹光杰1袁德培 杨付明 黄 琼

(湖北民族学院医学院，湖北 恩施 445000)

目的 探讨十全育真汤对D-半乳糖所致衰老小鼠学习记忆的影响。方法 昆明小鼠60只，随机分为高剂量组、中剂量组、低剂量组、模型组及对照组，每组12只。对照组按500 mg·kg-1·d-1腹腔注射生理盐水，其他各组注射等量D-半乳糖。高剂量组、中剂量组、低剂量组注射D-半乳糖的同时按15、10、5 g·kg-1·d-1十全育真汤灌胃，模型组、对照组等量蒸馏水灌胃。各组自由饮食，连续饲养50 d。给药40 d后行Morris水迷宫实验；50 d后检测各组小鼠皮肤羟脯氨酸、心脑组织丙二醛(MDA)、脂褐质(LP)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量，采用双抗体夹心ELISA法检测小鼠血清中白细胞介素(IL)-2及IL-6含量。结果 Morris水迷宫实验，十全育真汤各组潜伏期比模型组较明显减少(P<0.05)，模型组小鼠穿越平台的次数比其他各组小鼠少(P<0.05)。对照组及十全育真汤各组MDA与LP含量低于模型组(P<0.05)，SOD与GSH-Px的活性明显高于模型组(P<0.05)；十全育真汤组小鼠皮肤羟脯氨酸含量都明显低于对照组(P<0.05)，高于模型组(P<0.05)；十全育真汤组小鼠血清中IL-2、IL-6含量显著高于对照组和模型组(P<0.05)，模型组IL-2、IL-6比对照组要低(P<0.05)。结论 十全育真汤在改善学习记忆功能，清除体内自由基抗氧化，增强机体免疫能力等方面都有较好的作用。

十全育真汤；D-半乳糖；衰老

十全育真汤出自《医学衷中参西录》治阴虚劳热方篇，为清代名医张锡纯所创〔1〕。作为中西医汇通学派的代表医家，张锡纯在人体病理生理的中西理论汇通及药物的运用、功效等方面积累了丰富的经验〔2〕。在许多疾病的病因证治张氏既有理论创新又有临证实践，认为虚劳之因在于气血迟滞，治虚劳必先治血痹，据此拟定了十全育真汤〔3〕。十全育真汤由野台参、生黄芪、生山药、知母、玄参、生龙骨、生牡蛎、丹参、三棱及莪术组成，具有益气养阴，活血化瘀之功，对肌肤甲错，形体羸瘦，饮食不壮筋力，或自汗，或咳逆，或喘促，或寒热不时，或多梦纷纭，精气不固等均有较好疗效〔4〕。笔者也常用此方治疗多种慢性病、虚损病，每获良效。本实验采用注射D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型，服用十全育真汤，观察对衰老小鼠在益智、抗氧化及增强免疫力等方面的影响，探讨其延缓衰老机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 清洁级昆明种小鼠(雌雄各半)，购自湖北省实验动物研究中心〔生产许可证号：SCXK(鄂)2008-0005〕。4～6周龄，体重(20.6±2.5)g，常规饲养。

1.2 药品与仪器 十全育真汤由野台参12 g、生黄芪12 g、生山药12 g、知母12 g、玄参12 g、生龙骨12 g(捣细)、生牡蛎12 g(捣细)、丹参6 g、三棱4.5 g及莪术4.5 g组成，煎液由湖北民族学院附属民大医院药剂科提供，相当于生药30%(2 g/ml)的液体,瓶装密封消毒贮存于4 ℃备用。D-半乳糖(晶美公司)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、脂褐质(LP)及羟脯氨酸检测试剂盒(南京建成)，白细胞介素(IL)-2、IL-6 ELISA试剂盒(美国Sigma公司)，其他化学试剂为国产分析纯试剂(湖北恩施乐之塬科技公司)。DMS-2 Morris水迷宫系统(中国医学科学院药物研究所)，全自动酶标仪(美国Thermo公司)，FA1640电子天平(上海天平仪器厂)，紫外分光光度仪(美国Beckman公司)，电动玻璃匀浆机(宁波新芝科技股份有限公司)。

1.3 动物分组、造模及给药 小鼠60只，随机分为高剂量组、中剂量组、低剂量组、模型组及对照组，每组12只。对照组按500 mg·kg-1·d-1腹腔注射生理盐水，其他各组注射等量D-半乳糖〔5〕。高剂量组、中剂量组、低剂量组在注射D-半乳糖的同时按15、10、5 g·kg-1·d-1十全育真汤煎液灌胃，模型组、对照组等量蒸馏水灌胃。各组自由饮食，连续饲养50 d。

1.4 Morris水迷宫实验 给药40 d后，参考文献〔6，7〕进行Morris水迷宫实验,整个水迷宫训练历时10 d，上下午各1 次。水迷宫直径185 cm、高55 cm，内壁黑色，水深35 cm，水温控制在23℃左右。训练前将水迷宫水池分为A、B、C、D四个相等区域，将高度为33 cm，直径8 cm 的平台置于C处，没入水下2 cm。训练时小鼠面对池壁，依次从A、B、C、D入水点放入水中，记录找到平台的时间(逃避潜伏期)，超过2 min还未找到平台的小鼠，则引至平台(时间记为2 min)，训练9 d后撤除平台。第10天小鼠放入水，记录2 min内跨越原平台相应位置的次数。

1.5 脑组织GSH-Px、SOD、MDA、LP及皮肤羟脯氨酸检测 50 d后眼眶取血，处死小鼠，小心取出脑组织放入冰冻生理盐水(0.9%)冲洗拭干，迅速用精密分析天平称取重量后剪碎，制备成10%匀浆，离心后取上清低温保存备用。并及时取小鼠背部皮肤约1 cm2，去毛去脂，切碎晾干，精密称取30 mg备用。按照试剂盒说明书进行GSH-Px、SOD、MDA、LP及羟脯氨酸测定。

1.6 ELISA法检测衰老小鼠血清IL-2、IL-6 将收集的小鼠血清及时处理或低温贮存备用，参考试剂盒说明书检测IL-2、IL-6。

1.7 统计学处理 采用SPSS16.0软件进行单因素方差分析。

2 结 果

2.1 十全育真汤对小鼠空间探索、定位航行能力的影响 模型组平均潜伏期较对照组显著增加(P<0.05)，十全育真汤各组平均潜伏期要比模型组显著减少(P<0.05)。在空间探索能力的测试中，模型组穿越平台的平均次数要比其他各组少(P<0.05)。见表1。

2.2 十全育真汤对脑组织氧化指标的影响 模型组MDA、LP含量显著高于其他各组(P<0.05)，SOD、GSH-Px活性明显低于其他各组(P<0.05)。高剂量组、中剂量组MDA、LP少于低剂量组， SOD、GSH-Px活性则高于低剂量组(P<0.05)。见表2。

表1 十全育真汤对小鼠空间探索、 定位航行的影响

与模型组比较:1)P<0.05；与对照组比较:2)P<0.05；表3同

表2 十全育真汤对脑组织抗氧化性的影响±s,n=12)

与模型组比较:1)P<0.05；与低剂量组比较:2)P<0.05

2.3 十全育真汤对皮肤羟脯氨酸含量及血清IL-2、IL-6含量的影响 皮肤羟脯氨酸含量对照组明显高于其他各组(P<0.05)，然而十全育真汤各组小鼠明显高于模型组(P<0.05)。十全育真汤组小鼠血清中IL-2、IL-6含量显著高于对照组和模型组(P<0.05)，模型组小鼠血清中的IL-2、IL-6比对照组要低(P<0.05)。见表3。

表3 十全育真汤对皮肤羟脯氨酸，血清中IL-2、 IL-6含量的影响

3 讨 论

衰老又称老化，是机体随年龄的增长，自身功能减退，体内各种生理功能退行性退变。中医学对衰老的认识早在《黄帝内经》中就有记载，认为衰老是由脾气虚、肾气虚、脾肾两虚、精气神虚衰、精血津液亏虚及阴阳失调等所致〔8〕。现代医学则认为衰老是代谢所产生过多的氧自由基造成细胞膜的破坏，使蛋白质(酶)变性，并会导致一系列神经功能损伤，造成认知障碍，加速衰老〔9〕。明代虞抟《医学正传》认为“肾气盛则寿延，肾气衰则寿夭”，肾虚为衰老之根本原因，而肾主骨生髓，髓通脑，所以衰老早期体现在学习记忆能力的下降。本实验表明衰老小鼠在空间定位、空间记忆等认知方面是较差的。服用十全育真汤的小鼠平均潜伏期明显缩短，撤去平台后穿越原平台次数也增加，说明十全育真汤衰老小鼠的学习记忆能力有比较好的恢复。中医认为脾胃为后天之本，气血生化之源，为延年益寿之本〔8〕，健脾可调节机体代谢，改善免疫功能，减轻体内自由基的损伤。本实验表明十全育真汤的抗衰老作用存在一定的量效关系。在羟脯氨酸含量检测中发现，十全育真汤还可有效地恢复衰老小鼠皮肤中的羟脯氨酸的含量。衰老的另一显著特征是免疫能力下降，本实验发现十全育真汤能显著增加小鼠体内的IL-2和IL-6的含量，表明其可增强衰老小鼠的免疫功能，有助于促进细胞的分裂增殖。

1 张锡纯,著.王云凯,李彬之,韩 煜,重校.医学衷中参西录〔M〕.石家庄:河北科学技术出版社,2002:23-6.

2 杨付明.张锡纯配伍运用活血化瘀法据探析〔J〕.湖北民族学院学报(医学版),2003;20(3):49-51.

3 郝丽莉.论张锡纯学术思想与十全育真汤的衍用〔J〕.中医药学报,1998;5(1):9.

4 吴 曦.张锡纯十全育真汤治验3则〔J〕.江苏中医药,2008;40(10):71-2.

5 姜国良,于 晓,徐 恺，等.腹腔和皮下注射D-半乳糖衰老大鼠模型分析〔J〕.中国老年学杂志,2013;33(5):1101-3.

6 王绪平,呙登俊,陈 宇,等.Morris水迷宫实验评价血管性痴呆大鼠模型的学习记忆能力〔J〕.中华中医药学刊,2013;31(1):99-100.

7 刘金凤,聂 坤,栗振杰,等.Morris水迷宫测评方法的改进及对快速老化痴呆小鼠SAMP8认知功能的再评价〔J〕.中国中医急症,2013;22(1):5-7.

8 冀小伟,张连城.中医对衰老的认识〔J〕.中医杂志,2013;54(17):1527-9.

9 李 燕.银耳多糖的抗衰老作用及其机制研究〔D〕.上海:第二军医大学,2004.

〔2015-09-28修回〕

(编辑 曹梦园)

国家中医药管理局公共卫生专项资金项目(财社〔2010〕91号)；湖北民族学院博士科研启动基金项目(MY2010B004)

朱云超(1971-)，男，硕士，讲师，主要从事延缓衰老及防治老年病的应用研究。

R285.5

A

1005-9202(2017)05-1054-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.05.006

1 湖北民族学院科技学院