肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体在前列腺癌中的表达及意义

鲍小招 范广民 吴忠明 陈振乾 吴忠标 曾爱平 屈宏斐

(温州医学院附属温岭市医院泌尿外科，浙江 台州 317500)

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体在前列腺癌中的表达及意义

鲍小招 范广民1吴忠明 陈振乾 吴忠标 曾爱平2屈宏斐

(温州医学院附属温岭市医院泌尿外科，浙江 台州 317500)

目的 探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)在前列腺癌发病机制中的作用。方法 取石蜡包埋的前列腺癌组织(前列腺癌组)和良性前列腺增生组织(良性前列腺增生组)各50例,免疫组化法测定两组组织中TRAIL蛋白的表达。结果 前列腺癌组TRAIL蛋白的阳性表达率和阳性表达强度均显著高于良性前列腺增生组(依次为：86.00% vs 66.00%；0.180±0.043 vs 0.128±0.021 OD值)(P<0.05或P<0.01)。前列腺癌组TRAIL蛋白的阳性表达率和阳性表达强度分别在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期之间、伴有和不伴有骨/淋巴结转移之间差异均无统计学意义(依次为：88.89% vs 84.38%，0.181±0.051 vs 0.179±0.029；89.47% vs 75.00%，0.182±0.044 vs 0.181±0.036)(均P>0.05)。结论 TRAIL在前列腺癌组织中表达增强，但与TMN分期、骨/淋巴结转移无关，增强表达的TRAIL可能与前列腺组织的恶化有关。

前列腺癌；前列腺增生；肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体

前列腺癌在不同种族间存在差异，还受不同文化、社会、心理因素等影响〔1〕，其发病机制十分复杂，受多基因和多因素的影响〔2〕，对其发病机制的研究一直是个热点话题。以往不管是体内试验还是体外试验都发现肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)对多种肿瘤细胞具有促凋亡作用，主要通过细胞表面的死亡受体(DR4和DR5)起作用〔3,4〕。目前已发现前列腺癌的患病风险与TRAIL的基因多肽性相关,我国患者与TRAIL基因启动子区存在一个SNP位点(-716A/G)发生转变有关〔5〕。近来报道TRAIL在前列腺癌中表达增加，血清前列腺癌特异性抗原浓度越高其表达强度越强，其受体R4还与前列腺癌的Gleason分级、前列腺癌特异性抗原再现及生存率降低有关〔6〕，但它的作用机制如何至今尚未完全阐明。本研究通过观察TRAIL在前列腺癌中的表达,探讨TRAIL与前列腺癌生物学特征的相关性。

1 材料与方法

1.1 一般资料 病例选自台州市各医院2010年5月至2014年2月的前列腺癌(前列腺癌组)住院手术患者50例,年龄59～82平均71岁，标本均经术后病理确诊。并与良性前列腺增生患者50例(良性前列腺增生组)作对照,年龄53～81(平均69)岁,均经尿道前列腺电切除术留取增生前列腺组织。两组组织标本经10%甲醛固定保存，两组患者的年龄无统计学差异(P>0.05)。

1.2 试剂 抗人TRAIL多克隆抗体购自美国R&D公司(生产批号为BTE0512031)，工作浓度为1∶100。二抗羊抗多克隆抗体免疫组化试剂盒及二氨基联苯胺(DAB)底物显色剂均购自北京中杉生物技术有限公司(生产批号：K132304G)。

1.3 免疫组化法检测TRAIL蛋白的表达 采用SP法进行检测,主要步骤如下:标本经10%甲醛固定、浓度梯度的乙醇脱水、石蜡包埋、4 μm厚度切片、脱蜡、抗原修复,3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶,兔血清封闭,滴加一抗4℃过夜、二抗及链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶复合物,DAB 显色、复染、封固。PBS 代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判断 阳性表达细胞为棕黄色，表达定位在细胞质。每张切片于随机选择5 个视野(200 倍),细胞阳性率计数方法为：无着色为(-)，<30%计为+，30%～70%计为，>70%计为；并对阳性细胞采用Image Pro-plus 5.1免疫组化图像分析系统进行灰度扫描来表达其平均吸光强度,取其平均值代表该片的吸光度(OD)值。

1.5 统计学方法 应用SPSS16.0软件进行t及χ2检验。

2 结 果

2.1 前列腺组织TRAIL蛋白的表达水平 免疫组化结果显示,阳性细胞呈棕黄色，主要表达在细胞质，两组均有呈阳性表达的细胞。前列腺癌组TRAIL蛋白的阳性率和平均吸光强度均显著高于良性前列腺增生组(P<0.05或P<0.01)。见表1、图1。

图1 TRAIL蛋白在不同前列腺组织中的 阳性表达(DAB，×200)

2.2 TRAIL表达与前列腺癌临床病理参数的关系 前列腺癌组TRAIL的阳性表达率和阳性表达强度在Ⅰ～Ⅱ期〔16例(88.89%)、0.181±0.051〕和Ⅲ～Ⅳ期之间〔27例(84.38%)、0.179±0.029)，χ2=0.20,P>0.05；t=0.079，P>0.05〕、伴有〔34例(89.47)%、0.182±0.044〕和不伴有淋巴结转移之间〔9例(75.00%)、0.181±0.036，χ2=1.59,P>0.05;t=0.065,P>0.05〕均无统计学差异。

3 讨 论

TRAIL是肿瘤坏死因子超家族成员之一，为Ⅱ型跨膜蛋白，在人体组织内广泛表达，具有很强的抗癌活性，能诱导多种肿瘤细胞死亡，对正常的细胞损伤却很少。这种选择性地对前列腺癌细胞促进凋亡的作用机制比较复杂，可能为上调其受体DR5(TRAIL-R2)的表达和抑制Akt和胰岛素样生长因子1等的途径〔7,8〕。经TRAIL治疗后，使G2/M期细胞比例下调，G0/G1期细胞比例上升，细胞生长周期停滞，凋亡率增加〔9〕。TRAIL还能通过增强自噬途经促进前列腺癌细胞的死亡，起到保护机体自身的作用〔10〕。TRAIL促进细胞凋亡的功能还能被雷公藤内酯和衣霉素等得到增强〔11,12〕。TRAIL治疗被预期成为一种非常有效的治疗癌症的方法，但也存在TRAIL抵抗的问题〔13〕。但目前TRAIL 表达水平与前列腺癌分化、TNM分期及肿瘤转移之间的关系尚未明确，国内在此方面报道较少。与TRAIL相结合的受体有5种，包括诱骗受体和死亡受体各2种。有研究发现，前列腺癌组织中DcR1 的表达水平明显低于前列腺增生组织，且在高分化、中分化、低分化前列腺癌组织中依次降低；而DR4、DR5 受体的表达水平在前列腺癌组织与前列腺增生组织中无差异，且与前列腺癌的分化程度无关〔14〕；但也有学者认为DR4、DR5、DcR1的表达率与前列腺癌的各病理分级、临床分期之间无关〔15〕。TRAIL在前列腺癌发病机制中的作用尚处在争论之中。因此，研究TRAIL与前列腺癌临床特征的关系，对前列腺癌防治有一定的理论指导意义。

本研究提示TRAIL在前列腺癌组织中过度表达，参与了前列腺增生的癌变过程。推测，随着组织发生恶变，TRAIL促凋亡作用也反应性地得到加强，以达到增强清除恶变细胞的能力，起到保护机体的作用。国内相似的研究也发现，前列腺增生组织中TRAIL 弱呈阳性免疫反应，而在前列腺癌组织中呈强阳性表达，癌组织的表达强度高于增生组织；TRAIL在癌组织中的表达强度还与癌细胞的分化有关，高分化的前列腺肿瘤组织中TRAIL免疫反应较强,反之，低分化的前列腺癌组织免疫反应较弱〔16〕，支持本实验的研究结果。

本研究还发现，前列腺癌组织TRAIL的阳性表达水平与TNM 分期无关，与骨/淋巴结转移也无关。相似的研究也见于大肠腺癌组织TRAIL的表达，其阳性率与肿瘤组织的浸润深度、淋巴转移等无关〔17,18〕。它可能在肿瘤生物学行为方面扮演关键的角色，包括肿瘤细胞的增殖、移行、预后，控制TRAIL通路可能是抑制肿瘤进展的有效策略〔19〕。

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5 糜远源,李久明,邵 宁,等.南京地区汉族人群TRAIL基因多态性与前列腺癌的易感性研究〔J〕.中华男科学,2011;17(3):242-6.

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11 Xiaowen H,Yi S.Triptolide sensitizes TRAIL-induced apoptosis in prostate cancer cells via p53-mediated DR5 up-regulation〔J〕.Mol Biol Rep,2012;39(9):8763-70.

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〔2015-09-08修回〕

(编辑 苑云杰/曹梦园)

温岭市科技局基金资助项目(2010-1-53)

鲍小招(1967-)，男，副主任医师，主要从事泌尿外科学临床研究。

R737.25

A

1005-9202(2017)05-1075-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.05.016

1 台州市中心医院病理科 2 温州医学院附属温岭市医院病理科