DNA甲基化酶3b多态性与乳腺癌易感性的关系

迪力夏提·金斯汗 赵 倩 吐鲁洪·沙列尔 付子毅

(新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺外科,新疆 乌鲁木齐 830011)

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DNA甲基化酶3b多态性与乳腺癌易感性的关系

迪力夏提·金斯汗 赵 倩 吐鲁洪·沙列尔 付子毅

(新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺外科,新疆 乌鲁木齐 830011)

目的 探讨DNA甲基化酶(DNMT)3b基因单核苷酸多态性(SNPs)与乳腺癌易感性的关系。方法 采用直接测序法检测157例女性乳腺癌患者(疾病组)和同期162例健康女性(对照组)DNMT3b基因rs6119954、rs4911107、rs4911259和rs2424913位点多态性分布情况，采用比值比(OR)及95%可信区间(CI)表示DNMT3b多态性与乳腺癌易感性的关系，同时分析以上位点多态性与临床病理参数(年龄、肿瘤大小、侧别、TNM分期、淋巴结转移、绝经状态、乳腺良性病史及HER-2表达)的关系。结果 疾病组和对照组rs6119954、rs4911107、rs4911259和rs2424913位点多态性基因型分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡。两组DNMT3b rs4911107和rs4911259基因型分布无统计学差异(P<0.05)；两组DNMT3b rs6119954位点的GG、GA和AA型分布频率及DNMT3b rs2424913位点的TT、CT和CC型分布频率均有统计学意义(P<0.05)。DNMT3b rs4911107和rs4911259位点各基因型及等位基因分布与乳腺癌发病风险无关(P>0.05)。DNMT3b rs6119954、rs2424913位点上，携带突变等位基因者的乳腺癌风险升高，均有统计学意义(P<0.05)。DNMT3b rs6119954基因型分布与肿瘤大小、TNM分期及淋巴结转移有关，而DNMT3b rs2424913基因型分布与TNM分期及乳腺良性病史有关(P<0.05)。结论 DNMT3b rs4911107和rs4911259位点多态性与乳腺癌易感性有关，且其突变基因型增加了乳腺癌的发病风险。

DNA甲基化酶3b(DNMT3b)；单核苷酸多态性；乳腺癌；易感性

研究发现某些基因的多态性与恶性肿瘤的易感性有关，如暴露在相同致癌因素的个体间存在患癌差异性〔1,2〕。在乳腺癌中也发现了较多的易感性相关基因,目前已成为乳腺癌研究的热点〔3～6〕。DNA甲基转移酶(DNMT)3b是一种重要的DNA甲基转移酶，主要功能为从头甲基化，以非甲基化DNA为模板，催化新的甲基化位点，其单核苷酸多态性(SNPs)与多种肿瘤的易感性有关〔7,8〕。目前，DNMT3b SNPs与乳腺癌易感性的关系尚不清楚，本研究探讨DNMT3b SNPs与乳腺癌易感性的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2013年2月至2016年2月本院收治的157例女性乳腺癌患者(疾病组)，年龄31～74岁，中位年龄58.5岁，≤50岁75例，>50岁82例；肿瘤大小≤2 cm者64例，>2 cm者93例；TNM分期：Ⅰ期49例，Ⅱ期55例，Ⅲ期53例；肿瘤部位：左侧80例，右侧77例；绝经状态：绝经前44例，绝经后113例；82例有淋巴结转移，96例有乳腺良性病史，69例HER-2阳性。选取同期的162例于本院体检的健康女性为对照组，年龄33～75岁，中位年龄55.0岁。排除有放、化疗史、既往职业暴露史及自身免疫系统疾病者。本研究获所有患者的知情同意，并获本院伦理委员会批准。

1.2 样本收集及处理 入院后第2天于治疗前抽取157例乳腺癌患者外周静脉血3 ml，置于EDTA抗凝管中，静置4 h后转入离心管，4 000 r/min离心10 min后分离血浆，使用全血核酸提取试剂盒(Qiagen公司)提取血浆DNA，置-20℃恒温冰箱中保存备用。

1.3 SNPs基因分型 按照最小等位基因频率>0.10、r2>0.8的原则选取4个SNPs位点(rs6119954、rs4911107、rs4911259和rs2424913)，针对以上位点设计引物，采用BigDye Terminator Sequencing试剂盒及ABI 3130型DNA测序仪(美国Applied Biosystem公司)进行DNA测序。

1.4 评价指标 (1)分析两组DNMT3b基因rs6119954、rs4911107、rs4911259和rs2424913位点多态性分布情况，采用比值比(OR)及95%可信区间(CI)表示DNMT3b多态性与乳腺癌易感性的关系；(2)分析以上位点多态性与临床病理参数(年龄、肿瘤大小、侧别、TNM分期、淋巴结转移、绝经状态、乳腺良性病史及HER-2表达)的关系。

1.5 统计学分析 采用SPSS22.0软件进行χ2检验、Hardy-Weinberg平衡检验。

2 结 果

2.1 Hardy-Weinberg遗传平衡检验 两组rs6119954、rs4911107、rs4911259和rs2424913位点多态性基因型的实际频数与理论频数无统计学意义(P<0.05)，提示两组以上SNPs基因型分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡。见表1。

2.2 两组DNMT3b多态性位点基因型分布比较 两组DNMT3b rs4911107和rs4911259基因型分布无统计学差异(P>0.05)；两组DNMT3b rs6119954位点的GG、GA和AA型的分布频率及DNMT3b rs2424913位点的TT、CT和CC型的分布频率均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.3 两组DNMT3b多态性位点等位基因分布比较 两组DNMT3b rs4911107和rs4911259等位基因分布无统计学差异(P<0.05)；两组DNMT3b rs6119954位点的G、A等位基因分布频率及DNMT3b rs2424913位点的T、C等位基因分布频率均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表1 疾病组的Hardy-Weinberg遗传平衡检验

表2 两组DNMT3b多态性位点基因型分布情况比较〔n(%)〕

表3 两组DNMT3b多态性位点等位基因分布比较〔n(%)〕

2.4 DNMT3b各基因型及等位基因与乳腺癌发病风险的关系 DNMT3b rs4911107和rs4911259位点各基因型及等位基因分布与乳腺癌发病风险无关(P>0.05)。DNMT3b rs6119954位点上，以野生型GG为参照，GA、AA及GA+AA型显著增加了乳腺癌的发病风险，以野生型等位基因G为参照，A等位基因显著增加了乳腺癌的发病风险；DNMT3b rs2424913位点上，以野生型TT为参照，CC及CT+CC型显著增加了乳腺癌的发病风险，以野生型等位基因T为参照，C等位基因显著增加了乳腺癌的发病风险(均P<0.05)。见表2、表3。

2.5 DNMT3b rs6119954、rs2424913基因型与乳腺癌临床病理参数的关系 DNMT3b rs6119954基因型分布与肿瘤大小、TNM分期及淋巴结转移有关，而DNMT3b rs2424913基因型分布与TNM分期及乳腺良性病史有关(P<0.05)。见表4。

表4 疾病组DNMT3b rs6119954、rs2424913基因型分布与临床病理参数的关系

3 讨 论

DNA甲基化是一种常见的表观遗传学修饰，可通过调控基因转录过程来影响机体生长发育，其中DNA甲基化酶是调节DNA甲基化的关键酶。近年来发现DNA甲基化酶的基因多态性与多种恶性肿瘤的易感性有关，如鲍倩等〔7〕发现DNMT3B基因-579位点G等位基因在结直肠癌发生过程中是一个潜在的保护因素，李菡等〔8〕发现DNMT3B rs16999593和rs2228611位点与食管癌的发生及分化程度有关，但王川等〔9〕发现DNMT3b基因多态性与中国北方汉族人群胃癌发生无关。以上结果提示DNMT3B多态性与恶性肿瘤易感性的关系在不同类型肿瘤中差别较大。DNMT3B多态性位点可影响该酶的活性和水平，继而影响表观遗传学修饰来影响肿瘤的发生发展。

本研究结果表明rs6119954、rs2424913位点多态性与乳腺癌的易感性有关，其余2个SNPs位点基因分布与乳腺癌易感性均无关。rs2424913处于DNMT3b的启动子区域，此处SNP引起的遗传突变可导致在距转录起始位点-149碱基对的启动子区含有C→T转换多态性〔10〕，表现为DNMT3b活性升高〔11〕，继而通过引发DNA异常甲基化的方式来使抑癌基因失活〔12〕，增加了乳腺癌易感性。尽管rs6119954、rs4911107和rs4911259 均位于内含子区域，但仅rs6119954多态性与乳腺癌易感性有关，考虑可能原因为rs6119954位于DNMT3b基因第1内含子可能并非直接的致病位点，但该位点是DNMT3b基因的标签SNP位点之一，可代表与其处于连锁不平衡区域的所有SNP位点。王建军等〔13〕发现DNMT3b rs6119954多态性分布可影响晚期结直肠癌患者FOLFOX4方案的疗效，其中携带rs6119954突变基因者的疗效较差，表明该SNP多态性可能是一个潜在的风险因素，支持了本研究的结论。下一步将通过实验分析DNMT3b rs6119954突变是如何增加乳腺癌的发病风险。此外，本研究表明rs6119954、rs2424913两个SNP可能与乳腺癌的进展有关，在乳腺癌的诊断上有一定潜在价值。本研究为单中心小样本研究，仍需多中心大样本量研究来验证本研究结论。

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〔2016-10-27修回〕

(编辑 滕欣航)

国家自然科学基金资助项目(81302304)

吐鲁洪·沙列尔(1963-)，男，主任医师，硕士生导师，主要从事乳腺肿瘤研究。

迪力夏提·金斯汗(1982-)，男，主治医师，硕士，主要从事乳腺肿瘤研究。

R73

A

1005-9202(2017)05-1151-04；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.05.051