膀胱尿路上皮癌中结肠癌转移相关基因1和基质金属蛋白酶9蛋白的表达及意义

徐松涛 任丽平 盛维新

(漯河医学高等专科学校医疗系,河南 漯河 462002)

膀胱尿路上皮癌中结肠癌转移相关基因1和基质金属蛋白酶9蛋白的表达及意义

徐松涛 任丽平1盛维新2

(漯河医学高等专科学校医疗系,河南 漯河 462002)

目的 研究膀胱尿路上皮癌组织中结肠癌转移相关基因1(MACC1)及基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白的表达及意义。方法 应用免疫组化方法检测60例膀胱尿路上皮癌(膀胱癌)和13例膀胱正常黏膜组织中MACC1及MMP-9的表达情况。结果 MACC1在膀胱癌组织中蛋白阳性率(65.0%)显著高于膀胱正常黏膜组织(15.38%；MACC1蛋白表达在浸润性癌(T2-4)阳性率为78.57%，远高于浅表性癌(T1，33.33%)；MACC1蛋白在高分级乳头状尿路上皮癌为81.58%，高于低分级乳头状尿路上皮癌(36.36%)；复发者MACC1阳性率为77.78%，远高于初发者阳性率(45.83%)。MMP-9在膀胱癌组织中蛋白阳性率(78.33%)显著高于膀胱正常黏膜组织(30.77%,P<0.05)。MMP-9蛋白表达在浸润性癌阳性率为88.10%，远高于浅表性癌(55.56%)；在高分级乳头状尿路上皮癌为92.11%，高于低分级乳头状尿路上皮癌(54.55%)；复发者MMP9阳性率为88.89%，远高于初发者阳性率(62.50%)。MACC1与MMP-9呈正相关。结论 MACC1和MMP-9蛋白与膀胱尿路上皮癌的生长具有相关性，并能反映出恶性程度及其侵袭能力。联合检测有利于判断膀胱癌恶性程度及其侵袭力及患者预后。

膀胱尿路上皮癌；结肠癌转移相关基因1；基质金属蛋白酶-9

膀胱癌发现时已是肿瘤晚期，失去手术机会，预后不良，因此需要寻找新的肿瘤指标提高诊断率，提高早期手术率，延长生命〔1，2〕。结肠癌转移相关基因(MACC)1基因是人类结肠癌细胞转移促进基因，定位于人类7号染色体上(7p21.1)〔3〕，在多种癌组织高表达，且MACC1高表达的肿瘤患者预后不良〔4～7〕。但是MACC1在膀胱癌中表达情况目前研究较少，我们采用免疫组织化学SP法检测60例膀胱尿路上皮癌组织中MACC1及基质金属蛋白酶-(MMP)9蛋白的表达及意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取漯河医学高等专科学校附属第三医院及太仓市第一人民医院泌尿外科2002年4月至2011年4月间施行膀胱部分切除术、全膀胱切除术以及经尿道膀胱肿瘤电切术，并经病理证实为原发性膀胱癌的石蜡标本60例，男43例,女17例；年龄23～81(平均56.7)岁。病理诊断为膀胱乳头状尿路上皮癌,按WHO(2004)病理分级:低分级22例，高分级38例；临床分期:T1 期18例,浸润性癌(T2、T3、T4)42例；肿瘤数目单发34例，多发26例；初发24例，复发36例。取13例癌旁3 cm以上的正常膀胱黏膜组织作为对照，标本来自经尿道膀胱肿瘤电切术、膀胱部分切除术、全膀胱切除术的开放手术。所有患者术前均未接受放疗、化疗或免疫治疗。

1.2 试剂 鼠抗人MACC1、MMP-9单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒均购于美国Sigma公司。

1.3 试验方法 采用免疫组化SP法,鼠抗人MACC1单克隆抗体工作浓度为1∶100，MMP-9工作浓度为1∶50。用已知乳腺癌标本作为阳性对照,用PBS代替一抗制成阴性对照切片。严格按SP试剂盒说明书进行操作。

1.4 结果判定 先按染色强度计分,无染色计0分,浅黄色计1分,棕黄色计2分,棕褐色计3分;再按阳性细胞所占的百分比计分,未见染色细胞计0分,<25%计1分,25%～50%计2分,>50%计3分;两者相加,>2分为阳性，≤2分为阴性。两位病理科医师采用双盲法读片，各自观察后一起做出判断。

1.5 统计学方法 采用SAS9.2统计软件包进行χ2检验。

2 结 果

2.1 MACC1和MMP-9在膀胱癌组织中的染色结果 MACC1以细胞质中出现棕黄色、棕褐色颗粒为阳性细胞，MMP-9以细胞质被染色呈棕黄色、棕褐色为阳性细胞，见图1。

MACC1

MMP-9 图1 MACC1及MMP-9在膀胱癌组织中的表达(DAB，×400)

2.2 MACC1及MMP-9在膀胱癌组织中的表达 MACC1在膀胱癌组织中蛋白阳性率(65.0%)显著高于膀胱正常黏膜组织(15.38%)；MACC1蛋白表达在浸润性癌(T2-4)阳性率为78.57%，远高于浅表性癌(T1，33.33%)；MACC1蛋白在高分级乳头状尿路上皮癌为81.58%，高于低分级乳头状尿路上皮癌(36.36%)；复发者MACC1阳性率为77.78%，远高于初发者阳性率(45.83%)。MMP-9在膀胱癌组织中蛋白阳性率(78.33%)显著高于膀胱正常黏膜组织(30.77%,P<0.05)。MMP-9蛋白表达在浸润性癌阳性率为88.10%，远高于浅表性癌(55.56%)；在高分级乳头状尿路上皮癌为92.11%，高于低分级乳头状尿路上皮癌(54.55%)；复发者MMP-9阳性率为88.89%，远高于初发者阳性率(62.50%)。MACC1与MMP-9呈正相关。见表1。

表1 膀胱癌中MACC1及MMP-9表达情况〔n(%)〕

2.3 MACC1与MMP-9 在膀胱癌中的相关性 在膀胱癌组织中，MACC1与MMP-9蛋白表达呈明显正相关(r=0.533，P=0.001 1)。

3 讨 论

研究表明MACC1可以激活下游的肝细胞生长因子及其受体(HGF/c-Met)信号通路，进而促进肿瘤细胞的增殖、转移〔8，9〕。有学者通过RNA干扰的方法，抑制肿瘤细胞中MACC1蛋白的表达，发现其细胞增殖及侵袭、迁移能力明显降低〔10〕。因此，MACC1有望成为肿瘤基因治疗的新靶点。本研究中,MACC1蛋白在膀胱癌组织中表达的细胞阳性率明显高于膀胱正常黏膜,提示MACC1表达增高在膀胱癌发生中可能起一定促进作用，同时，MACC1在膀胱尿路上皮癌侵袭、发展中也起一定的作用。另外，膀胱癌复发的患者，其MACC1蛋白量明显高于非复发组，提示MACC1高表达者预后不良。肿瘤细胞通过分泌基质金属蛋白酶(MMPs)降解细胞外基质而发生侵袭、转移〔11〕，其中MMP-9在多种肿瘤组织中高表达，与肿瘤的转移密切相关〔12，13〕。用抑制剂减少MMP-9分泌可降低肿瘤细胞的侵袭能力，并且可以增加抗肿瘤药物的效果〔14，15〕。

本研究中,MMP-9蛋白增高与膀胱癌的发生、发展有关，且MMP-9阳性率增高患者预后不良。Gao等〔16〕研究表明，MACC1对MMP-9有调节作用，我们研究与其相符合。综上所述，MACC1及MMP-9在膀胱尿路上皮细胞癌发生、发展中可能起一定作用,联合检测MACC1及MMP-9有助于判断膀胱癌恶性程度和患者的预后，对其进一步研究，有可能使其成为膀胱癌基因治疗的新靶点。

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〔2015-11-13修回〕

(编辑 苑云杰/曹梦园)

河南省基础与前沿技术研究计划(52300410177)；漯河医学高等专科学校博士基金(2013-DF-002);漯河医学高等专科学校校级基金项目(2014-S-LMC08)

徐松涛(1975-)，男，副主任医师，博士，主要从事泌尿系肿瘤诊断及治疗研究。

R737.14

A

1005-9202(2017)05-1154-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.05.052

1 漯河医学高等专科学校基础部 2 太仓市第一人民医院泌尿外科