2型糖尿病肾病VEGF与VEGF-A的表达及治疗后的变化

宋怡夏骅，李 青，曹卫娟，周国艳

（湖南师范大学附属湘东医院内分泌科，醴陵 412200）

2型糖尿病肾病VEGF与VEGF-A的表达及治疗后的变化

宋怡夏骅，李 青，曹卫娟，周国艳

（湖南师范大学附属湘东医院内分泌科，醴陵 412200）

目的：探讨血清中血管内皮生长因子（VEGF）及其亚型VEGF-A的水平与2型糖尿病肾病之间的关系，探讨依那普利对肾脏的保护作用是否与VEGF、VEGF-A血清水平相关。方法：选取104例2型糖尿病患者，按照尿白蛋白水平分为A 正常白蛋白尿组（35例）、B 微量白蛋白尿组（40例）、C 大量白蛋白尿组（29例），另选健康人作为D 健康对照组（30例），检测各组血清VEGF及VEGF-A水平；将B组随机分为两组各20例，B1组口服依那普利作为治疗组，B2组行常规治疗作为对照组，检测治疗3个月后两组VEGF及VEGF-A的水平。结果：2型糖尿病肾病各组患者中血清VEGF，特别是VEGF-A水平均较健康对照组明显升高，且C组＞B组＞A组；相关性分析：VEGF和VEGF-A与尿微量白蛋白、血肌酐呈正相关，与估算的肾小球滤过率呈负相关；依那普利治疗后患者血清VEGF和VEGF-A较治疗前明显下降。结论：血清VEGF、VEGF-A可及时反映2型糖尿病肾病疾病进展，其中VEGF-A的敏感性及特异性更高，推测VGEF-A可作为早期诊断及监测2型糖尿病肾病疗效的最重要指标之一。

2型糖尿病；糖尿病肾病；血管内皮生长因子；VEGF-A

糖尿病是全球范围内威胁人类健康最重要的非传染性疾病之一，过去的数十年间，我国糖尿病患病率呈井喷式猛增，目前我国糖尿病患者数量为全球之最［1］。而糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病主要微血管病变，已成为住院患者终末期肾病的最重要病因［2］。因此早期诊断及干预DN显得尤为重要［3］。在DN的发生、发展过程中，有多种血清因子参与，其中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是血小板衍生性生长因子家族中的一员，是与肾病相关的最重要的血管生长因子［4］，可促进血管生成、淋巴管形成，具有调节内皮细胞增殖、迁移、分泌，维持血管通透性等生理功能［4，5］，VEGF特别是其亚型VEGF-A（vascular endothelial growth factor-A，VEGF-A）可影响肾小球滤过功能，启动并加重DN的进展［6］，目前国内外关于VEGF-A的研究多集中在肿瘤等领域，对于其与糖尿病肾病的相关性鲜有报道。本研究通过检测DN不同阶段血清VEGF及VEGF-A的水平变化，分析其与DN的相关性，并通过观察依那普利治疗DN后VEGF、VEGF-A及尿微量白蛋白的变化，探讨依那普利对DN的保护作用是否与降低VEGF、VEGF-A相关，从而推测VEGF、特别是VEGF-A能否作为早期诊断及监测DN疗效的最重要指标之一。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选取2015年1月～2016年8月在我院住院的2型糖尿病患者104例作为研究对象，其中男性53例，女性51例；平均年龄（53.87±12.53）岁；平均病程（6.48±5.38）年。入组标准：（1）18-70周岁；（2）2型糖尿病患者，符合1999年WHO的2型糖尿病诊断和分型标准［7］。排除标准：（1）其他原因导致肾损伤，肌酐清除率＜30mL/min/1.73 m2及肾移植患者；（2）有糖尿病酮症酸中毒、高渗高血糖综合征等急性并发症；（3）伴有急性或严重心脑血管病变患者；（4）肝功能转氨酶大于正常上限2倍；（5）急性胰腺炎；（6）妊娠及哺乳期患者。

1.2 分组 根据Mogenson分期，按 24 h尿微量白蛋白定量将患者分为：A、正常蛋白尿组（35例），24 h尿微量白蛋白定量＜30 mg/24h；B、微量白蛋白尿组（40例），24 h尿微量白蛋白定量30～300 mg/24h；C、大量白蛋白尿组（29例），24 h尿微量白蛋白定量≥300 mg/24h，纳入30名同期来我院体检的健康人作为D 健康对照组，所有患者测量身高、体重、腰围、血压，留取空腹血清待测。

此外，为探讨依那普利对DN 患者VEGF、VEGF-A的影响，将B组患者随机分为B1和B2两组各20例，经过2周洗脱期后，其中B1组在糖尿病常规治疗基础上口服依那普利（10mg，每日一次）作为治疗组，B2组行糖尿病常规治疗作为对照组，留取空腹血清待测，3月后抽血复查相关指标。

1.3 试验方法

1.3.1 血清VEGF、VEGF-A测定 清晨空腹采集肘静脉血4mL，用酶联免疫双抗夹心法（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测，试剂盒均购自上海欣博盛生物科技有限公司。

1.3.2 血清生化指标的检测 采用高效液相色谱法检测糖化血红蛋白，AU5800全自动生化分析仪（Beckman，USA）检测肝功能、肾功能、血糖、血脂等相关指标。

1.3.3 24小时尿微量白蛋白检测 收集清晨7时至次日7时24h尿标本，采用SIMENS BN Ⅱ全自动分析仪及其配套试剂检测。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件进行数据处理，进行正态性检验，计量资料以mean±SD表示。组间比较采用方差分析，选择Pearson分析比较主要指标与各指标之间的相关性，依那普利治疗前后指标对比采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料比较 A、B、C、D组一般资料比较，年龄、性别比、BMI等无明显统计学差异（P＞0.05）；与D组对比，A、B、C组的血压、血糖、腰围、总胆固醇、甘油三酯、HbAlc、血肌酐均较高（P＜0.05），而A、B、C组的eGFR、C肽较D组明显下降（P＜0.05）；与A组对比，B、C组病程、24小时尿微量白蛋白逐渐递增（P＜0.05）；其他指标无明显区别，详见表1。

表1 各组一般资料比较

2.2 糖尿病各组和健康对照组的VEGF及VEGF-A比较 与D组对比，A、B、C组VEGF随糖尿病肾病的病情进展而逐渐升高，大量蛋白尿组＞微量蛋白尿组＞正常蛋白尿组＞健康对照组［（158.9±23.6）vs（153.8 ±24.5）vs（137.3±31.8）vs（107.70±32.5），P＜0.05］；VEGF-A水平升高更明显［（140.7±19.4）vs（133.5± 9.2）vs（117.5±21.9）vs（93.1±15.9），P＜0.01］，详见表1。

2.3 相关性分析 进行Pearson相关性分析：VEGF与eGFR呈负相关（-0.285，P＜0.05），而与Cr、尿微量白蛋白呈正相关（分别为0.059、0.029，P＜0.05）；VEGF-A与eGFR呈负相关（-0.351，P＜0.01），与尿微量白蛋白、Cr呈显著正相关（分别为0.320、0.046，P＜0.01）。

2.4 口服依那普利治疗DN前后VEGF、VEGF-A的水平变化 B1组与B2组治疗前病程、年龄、血压、HbAlc、肌酐、血糖、血脂、BMI、尿微量白蛋白水平均无明显统计学差异；与治疗前比较，B1组治疗3个月后VEGF、尿微量白蛋白均有所下降（P＜0.05），VEGF-A下降更明显（P＜0.01），而B2组治疗前后VEGF、VEGF-A、尿微量白蛋白水平无显著差异（P＞0.05）。进行相关性分析后发现，治疗前后VEGF、VEGF-A的变化与尿微量白蛋白呈显著正相关（分别为r=0.119，P＜0.05；r=0.260，P＜0.01），详见表2。

表2 依那普利治疗前后VEGF、VEGF-A水平的变化

3 讨论

糖尿病肾病是导致慢性肾病及终末期肾病的最主要原因之一，很多患者最终需行深静脉置管进行血液透析治疗维持生命，由此也增加再住院的机率［8］。

本研究中各糖尿病组糖化血红蛋白、空腹及餐后血糖、总胆固醇、甘油三酯与健康对照组对比明显升高，随着血压升高、病程延长尿微量白蛋白逐渐增多，差异有统计学意义，提示糖尿病肾病进展与血压升高及病程密切相关，与文献报道一致［9］。

越来越多的研究表明［5，6］，肾小球微血管内皮细胞功能障碍在糖尿病肾病中扮演着重要的角色，VEGF、VEGF-A作为主要影响肾脏内皮功能的因子之一，与糖尿病肾病的发生、发展相关。VEGF分为VEGF-A、VEGF-B等数个亚型，分别可调节大、小血管、淋巴管的生成，其中VEGF-A主要由肾小球足细胞分泌［10］，而肾小球内皮分布大量的酪氨酸激酶受体VEGFR-2，VEGF-A与VEGFR-1和VEGFR-2结合可影响肾脏微血管渗透性［4］，产生一系列病理变化［11，12］。在糖尿病肾病早期，慢性高血糖可刺激足细胞中VEGF、特别是VEGF-A的过度表达，同时可导致肾脏血管内皮细胞的损伤、肿胀、增生［13］，逐渐出现超滤及蛋白尿，因此推测VEGF、尤其是VEGF-A可能为糖尿病肾病的始动因素之一。本研究发现，VEGF、VEGF-A水平随糖尿病肾病微量白蛋白增多而逐渐升高，其中VEGF-A变化更为突出，差异有显著统计学意义，与Shao Y等人的研究结果相符［14］，DN患者血浆VEGF水平随着DN临床分期的进展有不同程度的提高，且VEGF水平与尿微量白蛋白及eGFR密切相关，推测VEGF的过量表达可能参与了糖尿病肾病的进展。有相关研究报道，VEGF-A作为VEGF的一个最重要的亚型，其敏感性及特异性均较高［15］，更适合推荐为监测2型糖尿病肾病疾病进展的一个标志。

在本研究相关性分析中，糖尿病人VEGF、VEGF-A与血肌酐、尿微量白蛋白等呈显著正相关，推测糖尿病病程越长患者，随着尿微量白蛋白增高、血糖升高，肾功能损害越严重，VEGF特别是VEGF-A的值越高。有研究也表明，糖尿病肾病患者的VEGF-A水平与糖尿病病程、血肌酐等指标呈正相关性［16］。因此，为了延缓糖尿病肾病的进展，早期监测VEGF、特别是VEGF-A尤为重要。

本研究中，微量白蛋白组患者口服依那普利治疗后与治疗前对比，VEGF、VEGF-A下降明显，尿微量白蛋白也减少。推测依那普利对DN的保护作用与对VEGF、VEGF-A的抑制相关，且治疗前后VEGF-A的变化与尿微量白蛋白呈显著正相关，推测VEGF-A在糖尿病肾病早期发病中起了重要作用［17］。

综上所述，血清VEGF、VEGF-A可能反映DN疾病的发生和进展，其中VEGF-A的敏感性及特异性更高，推测VGEF-A可作为早期诊断及监测DN疗效的最重要指标之一。

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Levels of Serum VEGF and VEGF-A in Type 2 Diabetic Nephropathy and the Changes after Treatment

Songyi Xia-hua, Li Qing, Cao Wei-juan, Zhou Guo-yan
(Department of endocrinology, Affiliated Xiangdong Hospital of Hunan Normal University, Liling 412200, China)

Objective To investigate the relationships between serum vascular endothelial growth factor(VEGF), VEGF-A and Type 2 Diabetic Nephropathy. To find out Whether the protective effect of enalapril on the kidney are related to serum concentrations of VEGF and VEGF-A. Methods Total 104 type 2 diabetes inpatients were selected. According to their urinary albumin, were divided into normal albuminuria group (group A, n=35), microalbuminuria group (group B, n=40), macroalbuminuria group (group C, n=29), and 30 healthy individuals were enrolled in this study as the healthy control group(group D). Detect the serum concentrations of VEGF and VEGF-A. Group B patients were randomly divided into two groups, B1 were treated with enalapril as the treatment group (n=20), B2 were treated with routine treatment as the control (n=20). Results Theserum levels of VEGF and VEGF-A in diabetic nephropathy were significantly higher than those in the healthy control group, group C ＞ group B ＞ group A. Correlation analysis shows that VEGF, VEGF-A has a positive correlation with urinary albumin and serum creatinine, and a negative correlation with estimated glomerular filtration rate. After three months of treatment, VEGF and VEGF-A was Significantly lower in treatment group. Conclusion Serum VEGF, VEGF-A might reflect progress of type 2 diabetes diabetic nephropathy. VEGF-A has higher sensitivity and specificity than VEGF in this study. Serum VEGF-A were likely recommended as indicators for early diagnosis and monitors of disease progression in type 2 diabetic nephropathy.

type 2 diabetes mellitus; diabetic nephropathy; vascular endothelial growth factor; vascular endothelial growth factor-A

R587.2；R692.9

A

1673-016X（2017）01-0015-04

2016-10-11

湖南省卫计委科研计划课题项目（B2015-62）

李青，E-mail：1402598379@qq.com