佛香饮方对寒凝血瘀型痛经模型大鼠痛反应及血液流变学的影响

缪希红， 冯晓静， 杨新蕊， 白云鹤

(1.河北省承德市中心医院， 河北 承德 067000 2.河北省承德市第三医院， 河北 承德 067000)

佛香饮方对寒凝血瘀型痛经模型大鼠痛反应及血液流变学的影响

缪希红1， 冯晓静1， 杨新蕊2， 白云鹤2

(1.河北省承德市中心医院， 河北 承德0670002.河北省承德市第三医院， 河北 承德067000)

目的探讨佛香饮方水提取物对寒凝血瘀型痛经模型大鼠的镇痛作用及其对血液流变性的影响，为其临床应用提供实验依据。方法采用冰水浴、皮下注射盐酸肾上腺素，加ip注射缩宫素法建立大鼠寒凝血瘀型痛经模型。以扭体反应次数为指标，探讨佛香饮对痛反应的影响。以凝血时间(CT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及血小板聚集率、红细胞压积(HCT)、血沉方程K值、血浆黏度、全血黏度为指标，探讨佛香饮对寒凝血瘀型痛经模型大鼠对凝血及血液流变学指标的影响。结果佛香饮1.8g/kg，3.6g/kg和7.2g/kg剂量组大鼠的CT明显长于模型对照组(P<0.05或P<0.01)，PT、TT及APTT均明显高于模型组(P<0.05或P<0.01)。佛香饮3.6g/kg和7.2g/kg剂量组的血小板聚集率明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)，HCT、血沉方程K值均明显低于模型对照组(P<0.05)；佛香饮各剂量组血浆黏度、全血黏度均低于模型对照组(P<0.05或P<0.01)。结论佛香饮对寒凝血瘀型痛经模型大鼠的镇痛和改善血液流变性作用是其治疗寒凝血瘀型痛经的主要作用基础。

佛香饮； 痛 经； 痛反应； 寒凝血瘀； 血液流变学

原发性痛经是妇科常见病、多发病[1]。中医依据病因将原发性痛经分为寒凝血瘀、气滞血瘀、气血虚弱、肾虚血瘀等四种类型，其中寒凝血瘀型为临床多见[2]，其病因多为经期感受湿寒，或过多饮食寒凉，寒客冲任，致气血凝滞，子宫气血不畅，引发痛经。现代医学治疗痛经多用非甾体类抗炎镇痛药，避孕药等，仅可临时缓解疼痛，无治本之效，且有较多副作用。中医可通过药物的合理配伍，达整体调节，标本兼治之功效。佛香饮为本课题多年用之有效的自拟方，由妇科常用的当归-川芎(佛手散)和香附-川芎两个药对结合而成，组方精简，治疗原发性痛经疗效可靠，止痛作用强而速，经前3d服用可预防经期腹痛，连续服用3个月经周期，可显著减轻痛经症状，远期疗效可靠，无明显的毒副作用。本研究采用4℃冷水浴，皮下注射肾上腺素，腹腔注射缩宫素三因素结合法建立寒凝血瘀型痛经模型，以血液流变学、血液学、痛反应等为指标，评价本方对寒凝血瘀型痛经的治疗作用，为其临床应用提供实验依据，并为深入探讨其作用机制奠定基础。

1 材料与仪器

1.1实验动物：SPF级雌性未孕SD大鼠，体质量220～240g，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK(京)2009-0004，实验前在本实验室适应5d，实验室温度22～24℃，相对湿度50%～60%，光照时间12h(7:00-19:00)

1.2药物与试剂

1.2.1药材：当归、川芎及香附均购自同仁堂药店承德分店；经河北省中药研究与开发重点实验室赵春颖教授鉴定：当归为伞形科植物当归(Angelica sinensis (Oliv.) Diels)的干燥根；川芎为伞形科藁本属植物川芎(Ligusticum chuanxiong Hort)根茎；香附为莎草科植物莎草(Cyperus rotundus L.)的根茎。

1.2.2佛香饮：佛香饮方由当归、川芎(酒制)、香附(醋制)组成，加8倍量水，浸泡6h，煎煮2次，每次煎煮30min，合并煎煮液，过滤，减压浓缩至1g/mL；

1.2.3其他药物：苯甲酸雌二醇注射液(1mL:1mg)，天津金耀氨基酸有限公司生产,批号：1001051；缩宫素注射液(1mL:10U)，马鞍山丰原制药有限公司，批号:1302151;元胡止痛颗粒剂(5g/袋)，沈阳飞龙药业有限公司，批号:130206。

1.3主要仪器：TDB-40B台式离心机，上海安亭科学仪器厂；HC-2062高速离心机，科大创新股份公司中佳分公司；Microsed-System全自动血沉仪，美国Vital Diagnostics公司；LBY-N6COMPACT全自动血液流变仪，北京普利生仪器有限公司；微量血浆测试装置，北京普利生仪器有限公司；XT-2000i全自动血液分析仪，日本SYSMEX公司；compactXR全自动血凝仪，德国BE公司；NJ4半自动血小板聚集仪，北京普利生仪器有限公司。

2 方 法

2.1动物分组、造模及给药：SD大鼠60只，随机分为空白对照组，模型对照组，佛香饮1.8，3.6和7.2g/kg剂量组(按生药计算，分别相当于成人临床用药等效剂量的1/2倍，等倍，2倍)，元胡止痛颗粒剂3.0g/kg剂量组(相当于成人等效剂量的2倍)。除正常对照组外，其他各组大鼠均每天在4℃冰水中浸泡1次，每次20min，连续12d，同时，皮下注射苯甲酸雌二醇，第1d及第2d注射0.8mg/kg，第3至第11天，每天注射0.4mg/kg，同步动情周期，提高子宫平滑肌对缩宫素的敏感性[3]。于造模的第7d各组均ig给予相应的药物，ig容积为5mL/kg，空白对照组及模型组给予等量蒸馏水。造模第12d末次给药后1h，除空白对照组外，各组大鼠腹腔注射缩宫素20μ/kg，随即进行以下实验。

2.2记录痛反应潜伏期及扭体次数：注射缩宫素后，立即记录大鼠出现疼痛反应的潜伏期及30min内的扭体次数，并计算扭体次数抑制率。扭体抑制率=(模型组扭体均数-试药组扭体均数)/模型组扭体均数×100%[4]。

2.3血液流变学指标的测定：4%水合氯醛(5mL/kg)麻醉，腹主动脉取血，置于3支抗凝管中，采用全自动血液分析仪测定红细胞压积，全自动血沉仪测定血沉，全自动血液流变仪测定全血黏度(高切、中切、低切)微量血浆测试装置测定血浆黏度。

2.4凝血时间的测定：取血方法同2.3，血液以3500r/min离心8min，利用全自动血凝仪测定PT、TT和APTT。

2.5血小板聚集率的测定:取血方法同2.3，血液以1800r/min离心10min，取上清部分即为富血小板血浆(PRP)，剩余部分以3000r/min离心10min，取上清部分即为贫血小板血浆(PPP)。先将盛有300μL PPP的比浊管置于半自动血小板聚集仪的测定孔内，经标定后，再将盛有300μL PRP及1小磁棒的比浊管放入，37℃保温5min，在搅拌情况下加入诱导剂ADP(300μmoL/L)聚集。得到血小板的最大聚集率，并根据记录所得的最大聚集率，按以下公式计算抑制率：抑制率(%)=(模型组最大聚集率-给药组最大聚集率)/模型组最大聚集率×100%

3 结 果

3.1佛香饮对痛反应潜伏期及扭体次数的影响:佛香饮3.6g/kg和7.2g/kg组痛反应潜伏期明显长于模型对照组(P<0.01)；佛香饮各剂量大鼠扭体反应次数均显著低于模型对照组(P<0.05或P<0.01)。元胡止痛颗粒大鼠扭体反应潜伏期明显长于模型组(P<0.01),扭体反应次数显著低于模型组(P<0.01)；结果见表1。

表1 加味佛手散对缩宫素诱发小鼠痛经模型痛反应的影响

注：与模型组比较：aP<0.05；bP<0.01

3.2佛香饮对PT、TT及APTT的影响：模型组大鼠的PT、TT及APTT均明显低于正常对照组(P<0.05或P<0.01)，血小板聚集率明显高于正常对照组(P<0.01)，说明模型组大鼠血液凝固指标发生了异常改变。佛香饮各剂量组大鼠的PT、TT及APTT均明显高于模型对照组(P<0.05或P<0.01)，结果见表2。

表2 佛香饮对寒凝血瘀型大鼠PT、TT及APTT的影响

注：与正常对照组比较：aP<0.05,bP<0.01；与模型组比较：cP<0.05,dP<0.01

表3 佛香饮对寒凝血瘀型痛经模型大鼠血小板聚集率

注：与正常对照组比较：aP<0.05,bP<0.01；与模型组比较：cP<0.05,dP<0.01

表4 佛香饮对寒凝血瘀型痛经模型大鼠HCT

注：与正常对照组比较：aP<0.05,bP<0.01；与模型组比较：cP<0.01

3.3佛香饮对血小板聚集率的影响：模型组大鼠的血小板聚集率明显高于正常对照组(P<0.01)。佛香饮各剂量组和元胡止痛颗粒组大鼠的血小板聚集率均明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)。结果见表3。

3.4佛香饮对大鼠HCT及血沉方程K值的影响：模型组大鼠HCT及血沉方程K值均明显高于模型组(P<0.01)。佛香饮各剂量组及元胡止痛颗粒组大鼠的HCT及血沉方程K值均明显低于模型组(P<0.01)，结果见表4。

3.5佛香饮对大鼠血浆黏度及全血黏度的影响：模型对照组血浆黏度及全血黏度均显著高于正常对照组(P<0.01)。佛香饮各剂量组及元胡止痛颗粒组大鼠的血浆黏度明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)；全血低、中、高切黏度均明显低于模型对照组(P<0.05或P<0.01)。结果见表5。

表5 佛香饮对寒凝血瘀型痛经模型

注：与正常对照组比较：aP<0.05,bP<0.01;与模型对照组比较：cP<0.05,dP<0.01

4 讨 论

寒凝血瘀型原发性痛经属中医血瘀证范畴。中医认为血得温而行，得寒则凝，凝则不通，不通则痛；本研究依据中医“寒、凝、痛”之理论，采用“寒、凝、痛”三因素联合的方法建立寒凝血瘀型痛经模型[5,6]。4℃冰水浸泡，给动物以寒冷刺激，致寒邪侵袭，为寒凝血瘀证的首要诱因；皮下注射肾上腺素模拟交感神经过度兴奋状态，并诱发血小板聚集，增强血液的凝固性；注射缩宫素诱发子宫平滑肌痉挛性收缩而引起腹痛。三者联合是复制寒凝血瘀型痛经模型的经典方法。

现代医学研究认为，与中医血瘀证密切相关的主要病理表现包括微循环障碍，血液流变学异常改变，受累器官血流量减少，组织缺血缺氧，致代谢产物滞留局部，刺激末梢神经引发痛反应。临床检验证明，血瘀证患者的血液学指标的异常改变包括：血细胞比容增加、全血及血浆比黏度增高、血浆蛋白浓度及纤维蛋白原含量增高、红细胞变应力减弱、血小板聚集率增高、PT、TT时间缩短等。本研究根据中医寒凝血瘀理论建立痛经模型，配伍组方，依据现代医学理论设计相关检查指标。

本组方依据中医“温经散寒、活血化瘀”治疗寒凝血瘀证的治则组方。本方结合应用了当归-川芎和川芎-香附两个妇科常用药对[7]。当归性温，具补血活血、调经止痛，祛瘀消肿之功效。川芎辛温香窜，行气活血、祛风止痛。香附性平，具解郁疏肝，调经止痛，调中理气，为治疗月经不调，经闭、痛经之要药二药对合用组方，互制其短，互长其长，针对“寒、凝、痛”三因素，一方可奏数功之效[8]。

现代药理学研究证明，当归-川芎药对，对多种动物、不同生理阶段的离体子宫平滑肌的张力均有明显抑制作用；对组胺、缩宫素、乙酰胆碱等诱发的离体子宫平滑肌的痉挛性收缩均有显著的拮抗作用[9]。当归多糖、阿魏酸、川芎内酯均有显著的解痉、镇痛作用。川芎嗪改善微循环，扩张毛细血管，增加开放毛细血管数、加快血液流速，增加子宫平滑肌血流量，改善其缺血缺氧状态，降低局部代谢产物浓度而产生止痛之效[10]。香附可剂量依赖性的抑制痛经模型小鼠子宫平滑肌的收缩力，抑制血小板聚集，延长出血时间，改善血液学指标及镇痛作用[11]。

本实验结果显示，佛香饮各剂量组动物的扭体反应次数均显著低于模型组(P<0.05或P<0.01)，说明佛香饮对本类痛经模型有显著的镇痛作用。痛经模型组大鼠PT、TT及APTT时间明显小于正常组大鼠(P<0.05或P<0.01)，HCT及血沉方程K值、血浆黏度及全血黏度明显高于正常对照组(P<0.05或P<0.01)，说明模型大鼠血液学和血液流变学参数发生了明显的异常改变，出现了血瘀证所具备的血液浓、黏、凝、聚状态。与模型组比较，佛香饮可剂量依赖性的延长PT、TT及APTT时间，(P<0.05或P<0.01)，显著降低HCT及血沉方程K值、降低血浆黏度及全血黏度(P<0.05或P<0.01)。说明改善模型大鼠的血液学和血液流变性指标是本组方治疗寒凝血瘀型痛经的作用基础。具体的作用机制有待进一步研究。

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FoxiangyinontheModelRatswithColdCoagulationandBloodStasisDysmenorrheaPainReactionandBloodRheology

MIAOXihong,FENGXiaojing,etal

(ChengdeCentralHospital,HebeiChengde067000,China)

Objective: To investigate the effects of water extract from Foxiang Yin (FXY) on pain reaction and hemorheological parameters of rats with dysmenorrhe induced by cold coagulation and blood stasis to provide the experimental basis for clinical application of the prescription.MethodsThe rats dysmenorrhea model induced by cold congealing and blood stasis were made by ice water bath and subcutaneous injection of adrenaline hydrochloride(Adr)combined with intraperitoneal injection of oxytocin. The inhibition rate of pain reaction was were calculated. The prothrombin time (PT), thrombin time (TT), activated partial thromboplastin time (APTT), the rate of platelet aggregation, hematocrit (HCT), K value of erythrocyte sedimentation equation, plasma viscosity and whole blood viscosity were detected.ResultsThe CT,PT,TT and APTT in 1.8g/kg，3.6g/kg and 7.2g/kg doses groups of FXY are significantly longer than that in the model control group(P<0.05 or P<0.01). The platelet aggregation rate in high and middle 3.6g/kg and 7.2g/kg dose of FXY group were significantly lower than that of model group (P<0.05 or P<0.01). The hematocrit ( HCT) and ESR equation K values in all doses of FXY groups were significantly lower than that of model group (P<0.05). The plasma viscosity and whole blood viscosity in all dosage of FXY groups were lower than that of model group (P<0.05 or< P 0.01).ConclusionFXY has obvious analgesic effect on the cold coagulation and blood stasis dysmenorrhea rats and improve high agglutination condition of blood and hemorheology is one of its action mechanisms.

Foxiang yin； Dysmenorrhea； Pain reaction； Cold coagulation and blood stasis； Hemorheological parameters

1006-6233(2017)11-1791-05

河北省中医药管理局资助项目,(编号：2016159)

冯晓静

A

10.3969/j.issn.1006-6233.2017.11.009