p57、CD34和Ki-67在胎盘绒毛水肿性病变中的表达及意义

李富亮，刘春英，王 云，王 健，庄振娟

(安丘市人民医院病理科，山东 安丘 262100)

完全性葡萄胎(complete hydatidiform mole，CHM)和部分性葡萄胎(partial hydatidiform mole，PHM)的遗传起源、疾病进展和预后均有很大不同，CHM发生恶变的概率为15%～20%，而PHM恶变的概率仅为4%～6%[1]。水肿性流产胎(hydropic abortus，HA)是由于绒毛发育不良退变所形成，遗传学表型为正常二倍体。因此，有效鉴别CHM、PHM和HA对患者的进一步治疗有重要指导意义。p57作为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子，可以有效鉴别CHM和PHM、HA[2]。CD34是一种形成血管的再生上皮细胞的标志物，可作为水泡状胎块与HA和正常绒毛组织鉴别诊断的依据之一。Ki-67是一种与细胞增殖相关的核抗原，其功能与细胞有丝分裂密切相关。本研究采用免疫组织化学法检测CHM、PHM、HA及正常胎盘组织中p57、CD34、Ki-67的表达，以期为CHM、PHM、HA的诊断与鉴别诊断提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料收集2003年1月至2013年12月安丘市人民医院病理科保存的CHM组织45例、PHM组织40例、HA组织28例和正常妊娠胎盘组织22例，均经病理学检测确诊。CHM患者的年龄为18～34(28.9±7.4)岁；PHM患者的年龄为17～36(27.5±5.6)岁；HA患者的年龄为17～35(26.9±6.8)岁；正常妊娠者的年龄为16～38(28.4±5.5)岁；CHM、PHM、HA患者及正常妊娠者的年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2仪器与试剂RM2235切片机(德国LEICA公司)，BX51显微镜(日本OLYMPUS株式会社)，丹吉尔数字医学图像分析系统(济南丹吉尔电子有限公司)，Costar微量加样器(美国Costar公司)，MA200型电子天平(上海良平仪器仪表有限公司)，DHG202型电热干燥箱(潍坊标诺工业有限公司)，石蜡包埋机(常州郝思琳医用仪器有限公司)。p57、CD34、Ki-67鼠抗人单克隆抗体(上海太阳生物技术有限公司)，PV-9000免疫组织化学染色试剂盒、二氨基联苯胺(diaminobenzidine，DAB)试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

1.3免疫组织化学法检测CHM、PHM、HA及正常妊娠组织中p57、CD34、Ki-67的表达组织标本经40 g·L-1多聚甲醛固定过夜，制备石蜡块，4 μm 切片，常规脱蜡至水，体积分数3%H2O2室温孵育 5～10 min，体积分数5%～10% 正常山羊血清封闭，一抗孵育过夜(p57稀释度1200，CD34稀释度1500，Ki-67稀释度1500)，磷酸盐缓冲液冲洗，滴加适量辣根过氧化物酶标记二抗，37 ℃孵育30 min，二氨基联苯胺显色，复染，脱水，透明，封片。

1.4结果判定及观察(1)p57的免疫组织化学染色结果判断参照管淑敏等[3]的方法，p57阳性表达定位于细胞核，呈棕色颗粒；显微镜下随机选取4个视野，计算绒毛表面的滋养细胞着色，阳性细胞数大于总数的10%为阳性。滋养细胞不着色或散在着色，阳性细胞数小于总数的10%为阴性。(2)CD34主要表达于绒毛间质血管内皮细胞，阳性表达为细胞质或细胞膜可见黄色颗粒；CD34表达水平采用微血管密度(microvessel density，MVD)测定法[4]，400倍光学显微镜下选取5个视野，计算每个视野的MVD，取均值作为CD34阳性表达水平。(3)Ki-67阳性表达为细胞核可见棕黄色颗粒。染色强度积分：无棕黄色染色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞数积分：阳性细胞数≤5% 为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分。阳性细胞数积分×染色强度积分为单片染色总分，总分0～1分为阴性(-)，2～4分为弱阳性(+)，5～7分为阳性(++)，≥8分为强阳性(+++)；≥2分定义为阳性。

2 结果

2.1CHM、PHM、HA及正常妊娠组织中p57、CD34、Ki-67的表达结果见图1、图2和图3。p57和Ki-67主要表达于滋养细胞、绒毛间质细胞、蜕膜细胞的细胞核；CD34主要表达在滋养细胞、蜕膜细胞及绒毛及滋养层细胞的细胞质和细胞膜。p57在正常妊娠组织、HA组织和PHM组织中表达较强，在CHM组织中表达较弱。CD34在正常妊娠组织和HA组织中表达较强，在PHM组织和PHM组织中表达较弱。Ki-67在CHM组织和PHM组织中表达较强，在HA组织和正常妊娠组织中表达较弱。

A：正常妊娠组织；B：CHM组织；C：PHM组织；D：HA组织。

图1CHM、PHM、HA及正常妊娠组织中p57的表达(免疫组织化学，×400)

Fig.1Expressionofp57inCHM，PHM，HAandnormalpregnancytissues(immunohistochemistry，×400)

A：正常妊娠组织；B：CHM组织；C：PHM组织；D：HA组织。

图2CHM、PHM、HA及正常妊娠组织中CD34的表达(免疫组织化学，×400)

Fig.2ExpressionofCD34inCHM，PHM，HAandnormalpregnancytissues(immunohistochemistry，×400)

A：正常妊娠组织；B：CHM组织；C：PHM组织；D：HA组织。

图3CHM、PHM、HA及正常妊娠组织中Ki-67的表达(免疫组织化学，×400)

Fig.3ExpressionofKi-67inCHM，PHM，HAandnormalpregnancytissues(immunohistochemistry，×400)

2.2CHM、PHM、HA及正常妊娠组织中p57、CD34、Ki-67表达比较结果见表1。CHM、PHM、HA及正常妊娠组织中p57阳性表达率分别为2.22%(3/45)、85.00%(34/40)、89.29%(25/28)、95.45%(21/22)，CHM组织中p57阳性表达率显著低于PHM、HA及正常妊娠组织(χ2=59.908、57.055、58.238，P<0.01)，PHM、HA及正常妊娠组织中p57阳性表达率比较差异均无统计学意义(χ2=0.022、0.681、0.074，P>0.05)。CD34在CHM、PHM、HA及正常妊娠组织中的表达分别为10.27±3.00、11.13±2.58、35.57±2.36、35.55±2.22，CHM、PHM组织中CD34表达显著低于HA及正常妊娠组织(t=37.89、37.86、39.79、37.40，P<0.01)，HA与正常妊娠组织中CD34表达比较差异无统计学意义(t=1.485，P>0.05)，CHM与PHM组织中CD34表达比较差异无统计学意义(t=1.404，P>0.05)。Ki-67在CHM、PHM、HA及正常妊娠组织中的阳性表达率分别为64.44%(29/45)、55.00%(22/40)、14.29%(4/28)、9.09%(2/22)，CHM、PHM组织中Ki-67阳性表达率显著高于HA及正常妊娠组织(χ2=18.21、12.61、17.53、11.56，P<0.01)，HA与正常妊娠组织中Ki-67阳性表达率比较差异无统计学意义(χ2=0.015，P>0.05)，CHM与PHM组织中Ki-67阳性表达率比较差异无统计学意义(χ2=0.787，P>0.05)。

表1CHM、PHM、HA及正常妊娠组织中p57、CD34、Ki-67表达比较

Tab.1Comparisonoftheexpressionsofp57，CD34andKi-67inCHM，PHM，HAandnormalpregnancytissues

组织类型np57阴性/例(%)阳性/例(%)Ki-67阴性/例(%)阳性/例(%)CD34(MVD)正常妊娠组织221(4.55)21(95.45)20(90.91)2(9.09)35.55±2.22HA组织283(10.71)25(89.29)24(85.71)4(14.29)35.57±2.36PHM组织406(15.00)34(85.00)18(45.00)22(55.00)b11.13±2.58bCHM组织4542(97.78)3(2.22)a16(35.56)29(64.44)b10.27±3.00b

注：与PHM、HA及正常妊娠组织比较aP<0.01；与HA及正常妊娠组织比较bP<0.01。

3 讨论

CHM、PHM和HA的遗传起源、疾病进展和预后均有很大不同，有效鉴别CHM、PHM和HA对患者的进一步治疗有重要意义。早期葡萄胎的图像不容易区分，限制了早期葡萄胎的诊断。目前，葡萄胎的主要确诊手段仍然是组织病理学检查[6-8]。

大多数葡萄胎患者存在父系和母系印记基因表达紊乱，提示印记基因异常表达是葡萄胎常见的分子机制。p57作为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子与抑癌因子，同时为父源性印记基因，仅在母源性等位基因表达。国外有研究显示，p57是一项兼具灵敏性与特异性的生物学指标，有助于从遗传基因学角度对CHM和PHM进行鉴别诊断[9]。本研究结果显示，CHM、PHM、HA及正常妊娠组织中p57阳性表达率分别为2.22%、85.00%、89.29%、95.45%，CHM组织中p57阳性表达率显著低于PHM、HA及正常妊娠组织，提示p57在CHM与其他胎盘绒毛水肿性病变的鉴别诊断中起重要作用。CD34是一种相对分子质量为100 000的单链跨膜蛋白，由早期淋巴造血干细胞、组细胞、血管内皮细胞、胚胎成纤维细胞和某些神经组织细胞表达产生[10]，CD34是一种形成血管的再生上皮细胞的标志物，该特征可用于血管的标记。妊娠滋养细胞疾病的典型病理表现之一就是绒毛间质血管减少或消失，通过检测CD34可以较为准确地反映妊娠滋养细胞疾病中血管的变化。HA和正常妊娠组织绒毛间质血管无明显减少。因此，通过对CD34进行免疫组织化学标记血管，可以有效鉴别葡萄胎和HA。MVD可准确反映新生血管的数量。本研究结果显示，CHM、PHM组织中CD34表达显著低于HA及正常妊娠组织，提示CD34检测有助于鉴别诊断葡萄胎与HA。由此说明，葡萄胎与水肿性流产胎的不同病理改变在于绒毛间质血管明显减少[11]。Ki-67是一种与细胞增殖相关的核抗原，其功能与有丝分裂密切相关，其是鉴别良恶性肿瘤、判断肿瘤预后的一个重要辅助指标。HA属于退行性变，滋养细胞增生不明显，而葡萄胎均有不同程度的滋养细胞增生。本研究结果显示，Ki-67在CHM和PHM组织中呈高表达，而在HA及正常妊娠组织中呈低表达，提示Ki-67对CHM、PHM与HA的鉴别诊断具有重要意义。

综上所述，p57有助于鉴别CHM和其他绒毛水肿性病变，CD34和Ki-67有助于鉴别葡萄胎和HA，p57、CD34和Ki-67联合检测有助于CHM、PHM及HA的鉴别诊断。

[1] OTA H，ODA C，HAYASHI M，etal.Rare case of peritoneal complete hydatidiform mole[J].JObstetGynaecolRes，2014，40(4)：1154-1156.

[2] SUN S Y，MELAMED A，JOSEPH N T，etal.Clinical presentation of complete hydatidiform mole and partial hydatidiform mole at a regional trophoblastic disease center in the United States over the past 2 decades[J].IntJGynecolCancer，2016，26(2)：367-370.

[3] 管淑敏，孙丽丽，安志强，等.p57、p53、CD34蛋白在葡萄胎诊断中的应用[J].实用妇科内分泌杂志，2016，3(2)：33-35.

[4] 何英，杨开选，王红静，等p57Kip2在完全性和部分性葡萄胎与流产伴绒毛水肿中的表达及意义[J].中华病理学杂志，2007，36(3)：197-199.

[5] 钟萍萍，顾依群，孙云飞，等.p57、p53和Ki-67蛋白在葡萄胎诊断中的价值[J].诊断病理学杂志，2014，21(6)：391-394.

[6] 许良中，杨文涛.免疫组织化学反应结果的判断标准[J].中国癌症杂志，1996，6(4)：229-231.

[7] 杨绍英，刘朝荣，张志刚，等.乳腺癌新辅助化学治疗前后雌激素受体、乳激素受体、Ki-67抗原和人类表皮生长因子受体-2的表达[J].新乡医学院学报，2017，34(2)：125-128.

[8] FOWLER D J，LINDSAY I，SECKL M J，etal.Routne pre-ecaution ultrasound diagnosis of hydatidiform mole：experience of more than 1 000 cases from a regional center[J].UltrasoundObstetGynecol，2006，27(1)：56-60.

[9] ISHIKAWA N，HARADA Y，TOKUYASU Y，etal.Re-evaluation of the histological criteria for complete hydatidiform male：comparison with the immunohistochemical diagnosis using p57 and CD34[J].BiomedRes，2009，30(3)：141-147.

[10] EL-MASRRI O，SLIM R.Familial hydatidiform mole pregnancy：the germline imprinting defect hypothesis[J].CurrTopMicrobiolImmunol，2006，301：229-241.

[11] 李昌秀，杨达荣，徐红梅，等.p57、p53、Her-2及Ki-67在胎盘绒毛水肿性病变中的表达及其意义[J].重庆医学，2017，46(4)：519-522.