“东方之星”客轮翻沉事件中肋软骨的检测

（武汉市公安司法鉴定中心，湖北 武汉 430024）

2015年6月1日晚，长江监利段“东方之星”客轮发生特大翻沉事件，遇难者达442人，受天气炎热、打捞工作复杂等影响，遇难者遗体腐败很快，心血、肌肉等常规检材已经无法提取到DNA，如何快速有效地进行DNA检验对客轮翻沉事件的尸源认定具有重要意义。肋软骨因其相对不易腐败、易于前处理等特点在腐败尸体DNA检验中成为首选生物检材[1]。笔者通过对肋软骨样品使用GlobalFiler®系统经直接扩增法检验DNA，积累了一些经验，供法医同行们参考。

1 材料与方法

样本选自“东方之星”客轮翻沉事件遇难者中死亡时间在4～12d的10例高度腐败遇难者尸体肋软骨。

GlobalFiler®Express PCR扩增试剂盒（美国AB公司）检验组：取上述10份肋软骨样本于扩增管中，分别加入预先配制好的GlobalFiler®Express PCR扩增体系 25 μL，包括反应混合液 7.5 μL、引物混合物2.5μL、去离子水15μL。离心除气泡后按操作手册推荐的扩增条件进行扩增。

GoldeneyeTM20A试剂盒［基点认知技术（北京）有限公司］对照组：取上述10份肋软骨样本于扩增管中，按照GoldeneyeTM20A试剂盒说明书选取25 μL体系进行扩增[2]。

所有样本的扩增产物在3130xl基因分析仪（美国AB公司）上进行电泳，用GeneMapper®ID-X软件（美国Thermo Fisher Scientific公司）对各原始电泳数据进行STR基因分析，设定峰高阈值≥50相对荧光单位（relative fluorescence unit，RFU）作为分析标准。

2 结果与讨论

20份肋软骨样本均获得了全部基因座的分型结果。经GlobalFiler®Express PCR扩增试剂盒得到的10个样本（编号1～10）的PCR产物，各基因座峰高为（4 826.90±1 591.66）RFU，等位基因杂合子峰高比为0.88±0.02（表1）。 经GoldeneyeTM20A 试剂盒得到的10个样本的PCR产物各基因座峰高为（4425.50±1 276.47）RFU，等位基因杂合子峰高比为0.87±0.03（表 1）。GlobalFiler®Express PCR扩增试剂盒和GoldeneyeTM20A试剂盒在整体峰值高度、各基因座之间平衡性均表现良好。

表1 两种试剂盒各基因座的检查结果

本研究结果表明，使用GlobalFiler®Express PCR扩增试剂盒直接扩增对肋软骨具有较好的可行性。GlobalFiler®Express PCR扩增试剂盒直接扩增法与常规的提取、扩增、电泳流程相比缩短了约3 h，与GoldeneyeTM20A试剂盒相比，扩增时间节省约2 h。同时减少耗材使用，降低了成本，也避免了外源性污染的可能，为及时、准确地获得死者身源信息提供了保障。在这类腐败严重的生物检材中通常含有较多对PCR产生抑制的物质[1]，为克服抑制物的影响，Global-Filer®Express PCR扩增试剂盒改进了PCR所需缓冲液配方，使其能更有效地释放DNA[2]。GlobalFiler®Express PCR扩增试剂盒具有24个位点，其中含10个miniSTR位点，对腐败降解检材具有更强的抗抑制能力[3]。肋软骨采用GlobalFiler®Express PCR扩增试剂盒直接扩增法获得了良好的基因座分型，并且在整体峰值高度、杂合子平衡性、荧光峰相对荧光强度值在各基因座间平衡性方面均表现良好。同时，国产GoldeneyeTM20A试剂盒也表现不俗，在控制成本上具有一定优势，样本量大的情况下可节省开支，实验室可根据实际情况进行选择。

[1]窦雪丽，陈红英，牛蕾蕾，等.PowerPlex®16 HS系统直接扩增法检测肋软骨[J].刑事技术，2014（5）：6-8.

[2]王洁，黄艳梅，张庆霞，等.国产GoldeneyeTM20A试剂盒性能指标验证[J].中国法医学杂志，2012，27（1）：12-15.

[3]路志勇，薛卢艳，张庆霞，等.GlobalFiler®PCR扩增试剂盒验证及其STR遗传多态性[J].法医学杂志，2015，31（4）：273-276.