术前结直肠癌活检组织中TrkB和BDNF表达的临床意义

李林海，刘 辉，江明万，邓天伟，于 双（重庆三峡中心医院消化内科，重庆404000）

结直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，近年来，其发病率有明显的上升趋势。酪氨酸受体激酶B（TrkB）是脑源性神经营养因子（BDNF）的特异性受体。研究发现，TrkB及BDNF在多种肿瘤中存在高表达，且与其侵袭、转移相关。本研究旨在通过检测术前结直肠癌镜下活检标本的TrkB和BDNF表达，探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年3月至2015年5月在本院普外科行结直肠癌根治术患者共60例，所有患者术前均在本院内镜中心结肠镜检查取得标本，并经病理证实。所得标本均进行常规固定、包埋、切片。60例患者中男32例，女28例；年龄28～72岁，平均58.6岁；其中有淋巴结转移26例，无淋巴结转移34例。TrkB兔抗人多克隆抗体、BDNF兔抗人多克隆抗体均购自武汉博士德生物工程有限公司，免疫组织化学SP试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2 方法 免疫组织化学染色采用SP法，操作步骤严格按说明书进行。对每张切片阳性细胞的阳性强度按无着色、淡黄色、棕黄色和棕褐色分别记0、1、2、3分，着色面积按无着色及着色小于1/3、1/3～2/3、＞2/3分别记 0、1、2、3分，然后根据两项记分之和判断其结果：＜3 分为阴性，≥3分为阳性。

1.3 统计学处理 采用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计数资料以率或构成比表示，比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman分析，P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 TrkB和BDNF在结直肠癌中的表达 60例结直肠癌患者术前标本中，TrkB主要表达于结直肠癌的细胞质，其中阳性表达33例，阳性表达率为55.0%。BDNF主要表达于结直肠癌的细胞质和细胞膜，其中阳性表达37例，阳性表达率为61.7%。

2.2 TrkB和BDNF的表达与结直肠癌临床病理因素的关系 TrkB的阳性表达率在临床Ⅲ期（67.6%，23/34）明显高于在临床Ⅰ、Ⅱ期（38.5%，10/26），有淋巴转移的阳性表达率（67.6%，23/34）明显高于无淋巴转移（38.5%，10/26），差异均有统计学意义（P＜0.05）；BDNF的阳性表达率在临床Ⅲ期（73.5%，25/34）明显高于在临床Ⅰ、Ⅱ期（46.2%，12/26），有淋巴转移的阳性表达率（73.5%，25/34）明显高于无淋巴转移（46.2%，12/26），差异均有统计学意义（P＜0.05）；但TrkB和BDNF的表达与患者的性别、年龄、分化程度、浸润程度无关（P＞0.05）。见表1。

表1 TrkB和BDNF的表达与结直肠癌临床病理因素的关系（n）

2.3 TrkB和BDNF表达的相关性 经Spearman相关性分析发现，TrkB与BDNF在术前结直肠癌患者的结肠镜活检标本中的表达呈正相关（r=0.389，P=0.002）。见表2。

表2 结直肠癌中TrkB与BDNF表达的相关性分析（n）

3 讨 论

结直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤，结肠镜检查是发现结直肠癌的最直接方法，TrkB主要与BDNF结合，通过激活MAPK/ERK信号转导途径，导致肿瘤发生发展。

有研究发现，TrkB和BDNF在多种肿瘤中表达上调，郭大伟等[1]发现，TrkB和BDNF可能对肝细胞癌（HCC）细胞的存活和侵袭具有重要的支持作用，并促进HCC的发展演变。本研究发现，在结直肠癌术前标本中，侵润深度T4期的TrkB阳性表达率高于T2、T3期，但差异无统计学意义（P＞0.05），可能与本研究中T2、T3期病例数较少有关，而BDNF的表达在T2、T3期和T4期相差不大。

在决定结肠癌预后的众多因素中，淋巴转移是其中重要的一个因素。早期结肠癌患者往往无症状或症状不明显，易被忽视。手术干预作为现今治疗结肠癌的主要手段，其术前评估的准确率、手术方案的符合率一直是临床工作者关注的重心。由于多层螺旋CT等技术的发展，对结肠癌术前评估已有了极大的提高，特别是在肿瘤浸润、远处转移上的准确率已得到广泛认可，但其对淋巴结转移的判断上却有一定的局限性[2-3]。SASAHIRA等[4]研究发现，TrkB的阳性表达与口腔鳞状细胞癌的淋巴转移相关。赵梅莘等[5]通过对术前胃镜下胃癌活检组织标本的检测发现，TrkB的免疫组织化学表达与胃癌的淋巴结转移相关。PATANI等[6]发现，BDNF阳性表达与乳腺癌的淋巴转移相关。本研究选取结直肠癌术前标本，通过免疫组织化学的方法检测TrkB和BDNF的表达，结果发现，有淋巴转移的TrkB和BDNF阳性表达率明显高于无淋巴转移，且临床分期越晚，TrkB和BDNF阳性表达率越高，提示TrkB和BDNF的表达与结直肠癌的淋巴转移相关。

SASAHIRA等[7]发现，VEGF-A和VEGF-C能显著诱导微血管和淋巴管的生成，从而促进肿瘤的进展和淋巴转移。YU等[8]的研究结果显示，TrkB可能促进了新生淋巴管形成。有研究发现，BDNF与TrkB结合后，通过诱导VEGF-A和VEGF-C的表达升高，从而导致血管和淋巴管生成增加，促进了肿瘤的侵袭及淋巴转移[9-11]。郭大伟等[1]发现，在晚期原发性肝癌中BDNF与TrkB的表达较高，与临床病理分期呈正相关。本研究结果发现，术前结肠镜下结直肠癌活检组织中BDNF与TrkB 的表达呈正相关（r=0.389，P=0.002），提示 BDNF与TrkB可能通过自分泌途径，诱导新生血管和淋巴管生成增加，促进肿瘤的侵袭和淋巴转移。

综上所述，联合检测术前结直肠癌患者的结肠镜病检标本TrkB和BDNF表达，有利于判断结直肠癌的临床分期及淋巴转移，为病情的评估、治疗方案的拟定提供客观依据。

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[5]赵梅莘，丁士刚，刘琳娜，等．术前胃镜下胃黏膜活检组织TrkB、TRIM29表达对胃癌淋巴结转移的预测价值[J]．中华医学杂志，2012，92（6）：376-379．

[6]PATANI N，JIANG WG，MOKBEL K.Brain-derived neurotrophic factor expression predicts adverse pathological&clinical outcomes in human breast cancer[J].Cancer Cell Int，2011，11（1）：23.

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[10]NAKAMURA K，MARTIN KC，JACKSON JK，et al.Brain-derived neurotrophic factor activation of TrkB induces vascular endothelial growth factor expression via hypoxia-inducible factor-1alpha in neuroblastoma cells[J].Cancer Res，2006，66（8）：4249-4255.

[11]SASAHIRA T，UEDA N，YAMAMOTO K，et al.Trks are novel oncogenes involved in the induction of neovascularization，tumor progression，and nodal metastasis in oral squamous cell carcinoma[J].Clin Exp Metastasis，2013，30（2）：165-176.